方 青，曹慧玲*，高英杰(.吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 303；.吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，吉林 長春 300)

·論 著·

參脈注射液對ALI大鼠氧化損傷的影響

方 青1，曹慧玲1*，高英杰2
(1.吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013；2.吉林大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，吉林 長春 130012)

目的分析參麥注射液對大鼠急性肺損傷(ALI)的影響。方法大鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型組和參脈治療組，采用尾靜脈注射油酸建立急性肺損傷的大鼠模型。給藥后8 h檢測肺組織HE染色病理改變及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的變化。結(jié)果與模型組比較，參脈治療組能夠減輕肺組織水腫液，減少炎細(xì)胞浸潤；降低血清MDA的表達(dá)，同時(shí)使血清SOD、GSH、GSH-Px含量增加。結(jié)論參麥注射液對ALI大鼠具有抗氧化損傷的保護(hù)作用。

參脈; 急性肺損傷;氧化損傷

急性肺損傷(acute lung injury,ALI) 在臨床上是一種以肺泡-毛細(xì)血管膜通透性增高所致肺間質(zhì)和肺泡水腫為基本病理特征的疾病。影像學(xué)上表現(xiàn)為非均一性的滲出性病變，其發(fā)展至嚴(yán)重階段時(shí)被稱為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)。ALI/ARDS在臨床上屬于危重性疾病，發(fā)病率比較高。如果治療不及時(shí)，很容易導(dǎo)致病人死亡。目前針對本病治療主要有：積極去除原發(fā)病,改善通氣,激素及藥物治療。參脈注射液是中藥注射劑，成分主要有紅參、麥冬,含有人參皂苷、人參多糖、甾苷、有機(jī)酸等成分，這些有效成分能加強(qiáng)機(jī)體器官抗應(yīng)激能力，有抗休克、抗心律失常、強(qiáng)心、調(diào)節(jié)免疫和抗炎等作用。有研究揭示，參麥注射液可能通過下調(diào)Toll樣受體2(TLR2)的表達(dá)，以及上調(diào)NF-κB抑制因子I-κBαmRNA的表達(dá)。通過調(diào)節(jié)NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，抑制由此引起的炎癥反應(yīng)而對機(jī)體細(xì)胞起保護(hù)作用[1]。本研究建立大鼠ALI動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上觀察參脈注射液的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物分組及給藥

參脈注射液，購自河北省神威藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字號Z13020888。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2藥品及試劑

健康Wister大鼠24只，清潔級，體重(180±20)g，雌雄各半，購自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號：SCXK-(吉)-2005-0013。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為 3 組，每組8只，即空白對照組、模型組、治療組。模型組和參脈干預(yù)治療組分別經(jīng)尾靜脈注射油酸0.27 mL/只，建立ALI模型。治療組5分鐘后腹腔內(nèi)注射參脈0.27 mL/kg，4 h追加1次。對照組和模型組給予相當(dāng)參脈劑量的生理鹽水。

1.3實(shí)驗(yàn)指標(biāo)測定

采用1%烏拉坦行腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血5 mL,離心分離血清，-20 ℃冰箱保存，分別用硫代巴比妥酸法、亞硝酸鹽法、二硫代二硝基苯甲酸法、二硝基苯甲酸法檢測以下指標(biāo)：MDA、SOD、GSH和GSH-Px。依說明逐步加入試劑及待檢標(biāo)本，分別用分光光度計(jì)在532 nm、550 nm、420 nm和422 nm處測定其OD值，用所給公式分別計(jì)算MDA、SOD、GSH和GSH-Px濃度。大鼠處死后，取左肺下組織(約1 cm×1 cm×0.5 cm)浸泡固定于4%多聚甲醛中。固定左肺24 h后，然后行石蠟包埋、切片、HE染色，備組織病理學(xué)觀察。

1.4數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1注射后8 h肺組織HE染色觀察

100倍顯微鏡下顯示：空白對照組肺泡腔空亮，鏡下可見肺泡間隔薄，無炎細(xì)胞浸潤，肺泡腔內(nèi)無滲出物(如圖1 A)。模型組顯示肺泡廣泛水腫，伴有炎細(xì)胞浸潤，并有局灶性出血，并伴透明膜形成，肺泡間隔增寬，肺泡腔內(nèi)可見粉染的滲出液(如圖1 B)。治療組肺泡仍可見充血水腫，并有炎細(xì)胞浸潤，但較模型組病變有所減輕，部分肺泡內(nèi)水腫液明顯減少，僅見炎細(xì)胞浸潤(如圖1 C)。

A:空白對照組 B:模型組 C:參脈治療組

2.2血清SOD、MDA、GSH和GSH-Ps含量變化

與空白對照組相比較，模型組MDA含量增加，SOD、GSH和GSH-Px水平降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)；參麥治療組MDA含量降低，SOD、GSH和GSH-Px水平提高，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)(見表1及圖2 A、B、C)。

表 1 參麥對ALI大鼠血清脂質(zhì)過氧化的影響

與模型組比比較，*：P<0.05；**：P<0,01

A:MDA B:SOD，GSH C:GSH-Px

3 結(jié) 論

臨床上ALI屬于多發(fā)病和常見病，最新隨機(jī)調(diào)查表明，ALI患者死亡率高達(dá)35%～40%，其中28 d內(nèi)死亡率達(dá)25%～30%[2]。ALI的發(fā)生涉及多種病理生理機(jī)制，主要有炎癥反應(yīng)、細(xì)胞因子失衡、氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡等?；钚匝鹾脱踝杂苫c肺損傷有密切關(guān)系，氧化應(yīng)激能夠刺激中性粒細(xì)胞激活，可以產(chǎn)生和釋放一系列活性氧簇(ROS)[3]。氧自由基可進(jìn)一步使脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物MDA水平上升，引起蛋白質(zhì)交聯(lián)變性、DNA斷裂，破壞肺組織結(jié)構(gòu)，加重?fù)p傷[4]。SOD是生物體內(nèi)重要的超氧陰離子自由基清除劑，其主要作用是能專一地清除生物氧化中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基，有助于減少和阻止脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)，延緩機(jī)體衰老及防止生物大分子損傷。GSH、GSH-Px具有清除脂質(zhì)過氧化物和H2O2的能力，主要清除存在于細(xì)胞的過氧化體，降低機(jī)體的氧化損傷。

本實(shí)驗(yàn)中，采用尾靜脈注射油酸0.27 mL/kg建立ALI模型。復(fù)制的模型病變典型、適度，適于觀察藥物的防治作用。參脈注射液含有人參皂苷、人參多糖、甾苷、有機(jī)酸等成分，這些有效成分能加強(qiáng)機(jī)體器官抗應(yīng)激能力，有抗氧化、抗心律失常、調(diào)節(jié)免疫和抗炎等作用。近年來大量研究提示參麥注射液可明顯降低肺損傷后異常升高的炎性細(xì)胞因子從而緩解ALI。提示參麥注射液可能通過免疫調(diào)節(jié)作用抑制炎癥因子釋放，減輕肺損傷后炎癥反應(yīng)，從而發(fā)揮保護(hù)肺臟作用。本實(shí)驗(yàn)通過大鼠尾靜脈注射油酸成功復(fù)制ALI模型后，應(yīng)用參麥注射液后，模型組顯示肺泡廣泛水腫，伴有炎細(xì)胞浸潤，并有局灶性出血，并伴透明膜形成，肺泡間隔增寬，肺泡腔內(nèi)可見粉染的滲出液。治療組肺泡仍可見充血水腫，并有炎細(xì)胞浸潤，但較模型組病變有所減輕，部分肺泡內(nèi)水腫液明顯減少，僅見炎細(xì)胞浸潤。與空白對照組相比較，模型組MDA含量增加，SOD、GSH和GSH-Px水平降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；參麥治療組MDA含量降低，SOD、GSH和GSH-Px水平提高，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。提示在參麥保護(hù)油酸所致的肺損傷過程中通過降低肺組織勻漿中TNF-α、ICAM-1的含量，降低血清MDA水平、提高SOD、GSH和GSH-Px水平而發(fā)揮抗炎及抗氧化作用。

[1] 袁兆新,劉 瀟,季東平,等.“失血加LPS”大鼠肺臟IκBα和TLR4基因表達(dá)及參麥的肺臟保護(hù)作用[J].中國病理生理雜志,2006,22(4)：730-733.

[2] Bernard G R.Acute respiratory distress syndrome:a historical perspective[J].Am J Respir Crit Care Med，2005，172(7):798-806.

[3] Klebanoff S J.Myeloperoxidase:friend and foe[J].J Leukoc Biol，2005，77(5):598-625.

[4] 陳 寶，李惠萍，范 峰，等.三氧化二砷對博萊霉素致大鼠肺纖維化的影響及其作用機(jī)制[J].中國病理生理雜志,2010，26(5)：858-864.

EffectsofShenmaiinjectiononoxidativedamageinALIrats

Fang Qing1， Cao Hu-ling1 *,Gao Ying-jie2
(1.Jilin Medical College,Jilin City,Jilin Province,132013,China；2.Animal Husbandry and Veterinary College,Jilin University,Changchun,Jilin Province,130012,China)

ObjectiveTo investigate the effects of Shenmai injection on oxidative damage in ALI rats and explore it's medicinal value.MethodsWistar rats were divided randomly into three groups:control group，model group and Shenmai group.The acute lung injury model of rats was built by injection of oleic acid via tail vein.After 8 hours，serum MDA，SOD，GSH and GSH-Px were determined.ResultsCompared with model group，Shenmai can reduce pulmonary edema and inflammatory cell infiltration and decrease the levels of MDA and increased the level of SOD、GSH and GSH-Px in serum.ConclusionShenmai has protective effect on oxidative damage in ALI rats.

Shenmai;acute lung injury;oxidative damage

1673-2995(2012)05-0287-03

吉林省教育廳“十一五”科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(2010534).

方 青(1969-)，女(漢族)，高級實(shí)驗(yàn)師，碩士.

曹慧玲(1959-)，女(漢族)，教授，主任醫(yī)師,本科.

R363

A

2012-05-17)