張曉娟 朱 燕 楊其昌 劉宏斌 沈 屹

乳腺癌是1種嚴(yán)重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，發(fā)病率呈現(xiàn)上升及年輕化趨勢(shì)，因此其早期診斷和各種治療方法一直是人們研究的焦點(diǎn)。OPN蛋白是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的1種分泌型鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白，不但參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，而且可能在腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。有關(guān)OPN和c-erbB-2蛋白的表達(dá)與浸潤(rùn)性乳腺癌相關(guān)性研究尚少見(jiàn)報(bào)道。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法，分別檢測(cè)87例浸潤(rùn)性乳腺癌、癌旁組織及20例乳腺良性病變組織的0PN和c-erbB-2蛋白的表達(dá)，觀察兩者在浸潤(rùn)性乳腺癌中的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

87例乳腺癌標(biāo)本均來(lái)自南通大學(xué)第二附屬醫(yī)院2006年1月～2007年12月手術(shù)標(biāo)本。所有患者均為女性，年齡37～83歲，平均年齡53.8歲，腫瘤平均直徑3.58 cm。術(shù)前均未進(jìn)行放療或化療，均經(jīng)HE染色及本院2位主治以上病理醫(yī)師診斷。87例中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌47例，其中Ⅰ級(jí)12例、Ⅱ級(jí)17例、Ⅲ級(jí)18例;浸潤(rùn)性小葉癌18例;髓樣癌12例;其他類型包括黏液腺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、化生性癌等10例。同時(shí)選取20例乳腺良性病變組織標(biāo)本對(duì)比。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)EnVision法。OPN單克隆抗體及乳腺癌試劑盒均購(gòu)自福州邁新公司。所有標(biāo)本均在癌灶中央及正常組織交界處常規(guī)取材，10%福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，行HE及免疫組織化學(xué)染色。并用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液代替一抗和二抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

采用雙盲法觀察每張切片。OPN染色以癌細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性著色。具體觀察方法:高倍鏡下(×200)隨機(jī)選擇5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)癌細(xì)胞，共1000個(gè)細(xì)胞。①按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的比例計(jì)分:無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分，＜25%計(jì)1分，＞25%計(jì)2分。②按陽(yáng)性細(xì)胞顯色強(qiáng)度計(jì)分:無(wú)顯色計(jì)0分，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)淺黃色顆粒計(jì)1分，棕黃色顆粒計(jì)2分，棕褐色顆粒計(jì)3分。①+②≥3記為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Stata10.0軟件分析，各組間率采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 OPN在乳腺組織中的表達(dá)

OPN在乳腺良性病變及癌旁組織中幾乎無(wú)表達(dá)，在浸潤(rùn)性乳腺癌中OPN陽(yáng)性率51.7%(45/87)，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 OPN表達(dá)在乳腺癌中的表達(dá)

在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、浸潤(rùn)性小葉癌、髓樣癌及其他類型癌中 OPN 陽(yáng)性率分別為 61.7%(29/47)、38.9%(7/18)、41.7%(5/12)、40.0%(4/10)，不同類型癌組織中OPN陽(yáng)性表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)陽(yáng)性率分別為33.3%(4/12)、58.8%(10/17)、83.3%(15/18)，表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。乳腺癌伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，OPN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率65.9%(27/41)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示OPN表達(dá)在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。c-erbB-2蛋白過(guò)表達(dá)的乳腺癌OPN蛋白表達(dá)高于c-erbB-2蛋白陰性者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。癌組織中OPN表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、組織學(xué)類型及ER、PR表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 OPN表達(dá)與乳腺癌各臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)是1種帶負(fù)電荷、具有親水性的酸性多功能分泌型鈣結(jié)合磷酸化糖蛋白，可表達(dá)于人類不同組織中，如骨、腎、肺、肝、膀胱、胰腺、乳腺、睪丸、腦和骨髓等，可由骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、腔上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、活化的T細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等分泌。OPN在許多人類腫瘤如肝癌、胃癌、宮頸癌［1～3］組織中表達(dá)增高。OPN通過(guò)與其主要受體整合素和CD44的相互作用，在腫瘤細(xì)胞的移行、浸潤(rùn)、促進(jìn)腫瘤血管的形成、抑制凋亡等多個(gè)環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要的作用［4］。姜斌等［5］用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)人非小細(xì)胞肺癌的OPN的表達(dá)，結(jié)果表明非小細(xì)胞肺癌中OPN的表達(dá)水平較正常肺組織及其他良性肺腫瘤表達(dá)明顯升高，且OPN的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)。余洋等［6］研究50例膀胱尿路上皮癌中OPN表達(dá)，顯示OPN隨腫瘤病理分級(jí)、臨床分期的增高而明顯增加，并且在初發(fā)組和復(fù)發(fā)組中、單發(fā)組與多發(fā)組中的比較，都具有顯著差異。本組研究結(jié)果中，浸潤(rùn)性乳腺癌OPN陽(yáng)性率51.7%，而正常乳腺及良性病變組織中幾乎無(wú)表達(dá)，提示OPN可能通過(guò)同樣的作用途徑促進(jìn)乳腺細(xì)胞異常增生和惡性轉(zhuǎn)化。

本組實(shí)驗(yàn)中，OPN表達(dá)與浸潤(rùn)性乳腺癌組織學(xué)類型無(wú)相關(guān)性，而與浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的組織學(xué)分級(jí)密切相關(guān)，Ⅲ級(jí)導(dǎo)管癌OPN表達(dá)明顯高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)導(dǎo)管癌，但在Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)之間無(wú)顯著差異。表明OPN的表達(dá)不僅反映了乳腺癌細(xì)胞的增殖活性，還與腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)。OPN在淋巴結(jié)有、無(wú)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性表達(dá)率分別是65.9%和39.1%，顯示OPN陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲、轉(zhuǎn)移能力，OPN的表達(dá)對(duì)判斷乳腺癌的預(yù)后具有重要的臨床意義。與陳軍等［7］研究結(jié)果相近。c-erbB-2過(guò)表達(dá)者中70%癌組織同時(shí)表達(dá)OPN蛋白，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率遠(yuǎn)高于二者同時(shí)陰性者。cerbB-2及OPN都是與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因，其作用機(jī)制各不相同但又存在著復(fù)雜的聯(lián)系。

正常人循環(huán)血液中也存在一定水平的OPN。Singhal等［8］比較了轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者、處于無(wú)病生存期的原發(fā)性乳腺癌患者及健康志愿者血漿OPN水平，發(fā)現(xiàn)OPN表達(dá)上調(diào)提示預(yù)后不良。Bramwell等［9］連續(xù)測(cè)定158例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血漿OPN水平，前瞻性分析顯示OPN濃度越高，患者無(wú)瘤生存期及總生存期越短，且易發(fā)生體內(nèi)臟器轉(zhuǎn)移。因此，對(duì)乳腺癌患者定期復(fù)查血液OPN水平非常必要。

骨橋蛋白OPN在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸中具有重要作用，對(duì)OPN及其抑制劑的研究可能為腫瘤治療帶來(lái)新的前景。但是，目前對(duì)于OPN自身及其作用機(jī)制仍有許多問(wèn)題尚不明了，有待進(jìn)一步證實(shí)。

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