易先鋒 盧根香 鐘偉湘 宋春紅 童鐘

外用多慮平對(duì)燒傷創(chuàng)面致癢介質(zhì)影響的實(shí)驗(yàn)研究

易先鋒 盧根香 鐘偉湘 宋春紅 童鐘

目的 研究多慮平外用制劑對(duì)家兔燒傷創(chuàng)面致癢介質(zhì)的影響。方法 采用顯微計(jì)數(shù)尺計(jì)算肥大細(xì)胞數(shù)目，通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)0.25%多慮平外用制劑應(yīng)用在家兔燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后不同時(shí)間中組織組胺及5-羥色胺的含量。結(jié)果 用藥后家兔實(shí)驗(yàn)組脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目明顯少于對(duì)照組(P＜0.01)。二組家兔深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面及燒傷愈合后創(chuàng)面不同時(shí)間組織中組織胺及5-羥色胺含量實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較明顯差異P＜0.01)。結(jié)論 0.25%多慮平外用制劑對(duì)家兔燒傷創(chuàng)面致癢介質(zhì)有一定的影響，從燒傷創(chuàng)面早期就開(kāi)始用藥物進(jìn)行燒傷瘙癢的干預(yù)是一條可以考慮的方法。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn);燒傷創(chuàng)面;瘙癢;多慮平;干預(yù)

增生的瘢痕組織臨床上大都會(huì)有瘙癢的癥狀，瘢痕瘙癢的機(jī)制尚沒(méi)有完全清楚［1］。課題應(yīng)用多慮平外用制劑在家兔燒傷創(chuàng)面上以了解該藥物對(duì)燒傷創(chuàng)面致癢介質(zhì)的影響，為治療燒傷的瘙癢尋找一條可供選擇的途徑方面作一些探索。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選健康成年家兔60只，體重3.0 kg～5.5 kg，雌雄不均，動(dòng)物由南昌大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。

1.2 燒傷動(dòng)物模型

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組家兔應(yīng)用1%戊巴比妥鈉(30 mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，麻醉成功后用90℃的沸水燙傷家兔的背及雙側(cè)2 min造成1%(深Ⅱ度)面積燒傷模型。

1.3 材料和實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)組應(yīng)用0.25%多慮平外用制劑，對(duì)照組應(yīng)用0.9%生理鹽水。每天創(chuàng)面涂藥一次，二組家兔分別在有燒傷創(chuàng)面的第7天、第14天和第21天及創(chuàng)面愈合后的第1天、第14天和第28天取創(chuàng)面組織制作病理切片標(biāo)本。采用顯微計(jì)數(shù)尺計(jì)數(shù)組織中脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目。運(yùn)用熒光分光光度法測(cè)定組織胺及5-羥色胺含量。兔抗人5-羥色胺多克隆抗體由上海施萊德生物技術(shù)有限公司提供。兔抗人肥大細(xì)胞類(lèi)胰蛋白酶單克隆抗體由美國(guó)Maixin公司提供。組織胺標(biāo)準(zhǔn)品由美國(guó)Sigma公司提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 肥大細(xì)胞(MC)的表達(dá)及分布情況

采用顯微計(jì)數(shù)尺分別計(jì)數(shù)二組家兔深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面和創(chuàng)面愈合后不同時(shí)間組織中脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目。結(jié)果顯示：用藥后實(shí)驗(yàn)組脫顆粒的MC數(shù)目與對(duì)照組比較有差異性，實(shí)驗(yàn)組脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目明顯少于對(duì)照組(P＜0.01)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后組織中脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目s，個(gè)/高倍視野)

表1 燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后組織中脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目s，個(gè)/高倍視野)

注：△P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別 例數(shù) 燒傷創(chuàng)面 燒傷創(chuàng)面愈合后第7天 第14天 第21天 第1天 第14天 第28天實(shí)驗(yàn)組 30 3.26±0.71 2.43±0.72 2.17±0.23 2.05±0.64 1.93±0.35 1.78±0.46對(duì)照組 30 6.72±0.83△ 5.44±0.72△ 4.37±0.52△ 4.35±0.43△ 4.29±0.42△ 4.17±0.33△

2.2 組織胺及5-色胺含量

熒光分光光度法測(cè)定深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后組織不同時(shí)間點(diǎn)組織胺及5-羥色胺含量.結(jié)果顯示：家兔從燒傷用藥第7、14、21天和創(chuàng)面合后第1、14、28天創(chuàng)面組織的組織胺及5-色胺量逐次下降與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見(jiàn)表2，3。

表2 燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后組織中組織胺含量± s，μg/g)

表2 燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后組織中組織胺含量± s，μg/g)

注：△P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別 例數(shù) 燒傷創(chuàng)面 燒傷創(chuàng)面愈合后第7天 第14天 第21天 第1天 第14天 第28天實(shí)驗(yàn)組 30 2.17±0.51 2.04±0.22 1.68±0.23 1.39±0.18 1.29±0.16 1.19±0.14對(duì)照組 30 4.28±0.51△ 4.13±0.32△ 3.75±0.24△ 3.67±0.19△ 3.29±0.15△ 2.15±0.17△

表3 燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后組織中5-羥色胺含量±s，μg/g)

表3 燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后組織中5-羥色胺含量±s，μg/g)

注：△P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

組別 例數(shù) 燒傷創(chuàng)面 燒傷創(chuàng)面愈合后第7天 第14天 第21天 第1天 第14天 第28天實(shí)驗(yàn)組 30 1.99±0.23 1.78±0.21 1.62±0.14 1.37±0.12 1.28±0.11 1.19±0.10對(duì)照組 30 4.19±0.59△ 4.08±0.38△ 3.46±0.20△ 3.27±0.12△ 3.19±0.13△ 2.67±0.11△

3 討論

瘙癢是皮膚疾病中最常見(jiàn)的癥狀，雖然皮膚瘙癢的發(fā)生機(jī)制還不十分明確［2］。但目前研究認(rèn)為存在獨(dú)立的癢覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)通路，瘙癢感受器起源于真皮與表皮連接處的游離神經(jīng)末梢，不同的癢覺(jué)感受器與來(lái)源不同的配體特異結(jié)合后，由外周無(wú)髓C纖維傳入信號(hào)至脊髓背側(cè)角的最淺層Lamina I脊髓丘腦束上行至丘腦，進(jìn)一步投射至皮質(zhì)區(qū)，傳遞沖動(dòng)導(dǎo)致瘙癢［3］。誘導(dǎo)瘙癢的許多介質(zhì)中組胺主要存在于肥大細(xì)胞內(nèi)的異染性顆粒中，當(dāng)它被釋放以后作用于H1受體引起瘙癢［4］。5-羥色胺所致瘙癢是通過(guò)中樞和外周化學(xué)感受器共同作用產(chǎn)生［5］。在外周它間接促使肥大細(xì)胞釋放組胺，而在中樞它通過(guò)類(lèi)阿片物質(zhì)神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)發(fā)揮致癢作用。

增生的瘢痕組織臨床上大都會(huì)有瘙癢的癥狀。針對(duì)這種瘢痕瘙癢臨床上采用多種方法進(jìn)行治療，但治療效果均不能長(zhǎng)久穩(wěn)定，同時(shí)長(zhǎng)時(shí)間口服這些抗瘢痕瘙癢藥物也會(huì)產(chǎn)生一定的副作用?，F(xiàn)已證實(shí)多慮平可影響人類(lèi)皮膚對(duì)組胺介導(dǎo)的反應(yīng)，有益于臨床上組胺介導(dǎo)的反應(yīng)調(diào)節(jié)，多慮平不僅是一種抗抑郁藥，還有重要的抗H1受體和抗H2受體的活性作用，0.25%多慮平外用制劑是較為有效的抗組胺皮膚止癢制劑［6］。

本課題選用多慮平外用制劑對(duì)家兔深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面進(jìn)行分組外用治療。采用顯微計(jì)數(shù)尺計(jì)算肥大細(xì)胞數(shù)目，通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)0.25%多慮平外用制劑應(yīng)用在家兔燒傷創(chuàng)面及創(chuàng)面愈合后不同時(shí)間中組織組胺及5-羥色胺的含量。結(jié)果顯示用藥后家兔實(shí)驗(yàn)組脫顆粒的肥大細(xì)胞數(shù)目明顯少于對(duì)照組(P＜0.01)。二組家兔深Ⅱ°燒傷創(chuàng)面及燒傷愈合后創(chuàng)面不同時(shí)間組織中組織胺及5-羥色胺含量實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，可能是因?yàn)槎鄳]平外用制劑能夠穩(wěn)定肥大細(xì)胞，減少肥大細(xì)胞脫粒，使組織胺及5-色胺與相應(yīng)的受體結(jié)合加快導(dǎo)致含量下降。

4 結(jié)論

瘙癢的發(fā)病機(jī)制與多元致瘙癢因子有關(guān)，本研究應(yīng)用多慮平外用制劑從家兔的燒傷創(chuàng)面早期就開(kāi)始干預(yù)，從實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看多慮平外用制劑能夠在一定程度上減少瘙癢介質(zhì)組織胺及5-羥色胺含量，穩(wěn)定肥大細(xì)胞。本研究中止癢的穩(wěn)定效果還需要進(jìn)一步觀(guān)察。但從燒傷創(chuàng)面早期就開(kāi)始用藥物進(jìn)行燒傷瘙癢的干預(yù)是一條可以考慮的途徑。

［1］焦婷，肖生祥.瘙癢的病理生理學(xué)和治療進(jìn)展.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2004，18(10)：622-623.

［2］Heymann，Warren R.Journal of the American Academy of Dermatology，2006，54(4)：705-7061.

［3］倪春雅，劉玲玲，朱學(xué)駿.皮膚源性瘙癢發(fā)生機(jī)制的研究進(jìn)展國(guó)際皮膚性病學(xué)雜志，2008，34(5)：321-323.

［4］Stander S，Steinhof M，Schmelz Metal Neurophysiology of pruri-tiscutaneous elicitation of itch.Arch Dermatol，2003，5(14)：63-70.

［5］Rees J，Murray CS.Itching for progress.Clinical ＆ Experimental Der-matology，2005，30(5)：471-473.

［6］Drake LA，F(xiàn)alIon JD，Sober A.Relief of pruritus in patients with a topic dermatitis after treatment with topical doxep incream.Journal of the American Academy of Dermatology，2004，3l(4)：613-616.

廣東省科技立項(xiàng)課題(項(xiàng)目編號(hào)：2010B031600251)

510440 廣東省工傷康復(fù)中心(易先鋒 鐘偉湘 宋春紅童鐘);廣東科學(xué)技術(shù)職業(yè)學(xué)院(盧根香)