曾宇鋒 羅榮城 楊接輝 米賢軍

南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院，廣東中山 528403

乳腺癌新輔助化療前后分子標(biāo)志物表達(dá)的臨床意義

曾宇鋒 羅榮城▲楊接輝 米賢軍

南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛醫(yī)院，廣東中山 528403

目的 探討乳腺癌新輔助化療前后分子標(biāo)志物表達(dá)的臨床意義。 方法 應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)40例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌Ⅱ～Ⅲ期患者在新輔助化療前后分子標(biāo)志物的表達(dá)情況，分析其改變?cè)蚣胺肿訕?biāo)志物與臨床療效的相關(guān)性。 結(jié)果 40例患者新輔助化療前后分子標(biāo)志物（ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2）均發(fā)生了一定程度的量變和狀態(tài)改變，ER和Ki-67表達(dá)的改變與新輔助化療的臨床療效相關(guān) （P＜0.05）。 結(jié)論ER和Ki-67表達(dá)可以作為預(yù)測(cè)化療療效的敏感因子。

乳腺癌；新輔助化療；分子標(biāo)志物

自20世紀(jì)80年代始，隨著分子生物學(xué)研究的開展，分子標(biāo)志物的臨床價(jià)值不斷被揭示并應(yīng)用于臨床。有部分分子標(biāo)志物已用于指導(dǎo)乳腺癌臨床治療，預(yù)測(cè)乳腺癌術(shù)后的轉(zhuǎn)歸，并對(duì)其療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究擬通過對(duì)40例Ⅱ～Ⅲ期可手術(shù)的原發(fā)性乳腺癌患者在新輔助化療前后對(duì)分子標(biāo)志物（ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2）進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，了解新輔助化療對(duì)這些分子標(biāo)志物表達(dá)的影響，觀察這些分子標(biāo)志物對(duì)新輔助化療療效是否有預(yù)測(cè)作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2008年4月～2010年3月在我院乳腺外科確診為Ⅱ～Ⅲ期乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的患者40例為研究對(duì)象，其中，Ⅱ期患者30例，Ⅲ期患者10例；所有患者均為單側(cè)原發(fā)性乳腺癌，具可評(píng)價(jià)病灶；性別均為女性，且為初治；年齡最小29歲，最大78歲，中位年齡52歲；均無放療、化療及內(nèi)分泌治療病史。

1.2 方法

全部病例均用18G空芯針（CNB）進(jìn)行穿刺活檢，經(jīng)病理確診為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，同時(shí)采用免疫組化方法測(cè)定穿刺組織的ER、PR、Ki-67、C-erbB-2和 pS2水平。 采用CEF方案（環(huán)磷酞胺500 mg/m2，表柔比星75 mg/m2，氟尿嘧啶500 mg/m2）對(duì)全部患者進(jìn)行化療2個(gè)周期后，施行乳腺癌改良根治術(shù)。將術(shù)后標(biāo)本再次行同樣分子標(biāo)志物測(cè)定。

1.3 評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 療效評(píng)定 按照RECIST 1.0標(biāo)準(zhǔn)，化療前后均進(jìn)行CT掃描檢查，測(cè)量每個(gè)可測(cè)量病灶治療前后的最長(zhǎng)徑以及最大垂直徑，計(jì)算最長(zhǎng)徑以及最長(zhǎng)徑與最大垂直徑的乘積（代表腫瘤面積）及其變化率。療效分為4個(gè)等級(jí)，即完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩(wěn)定（SD）和疾病進(jìn)展（PD）。

1.3.2 免疫組化結(jié)果判定 ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2 量變的含義為陽性反應(yīng)僅有程度改變。狀態(tài)改變的含義為由陽性（陰性）變?yōu)殛幮裕栃裕?。C-erbB-2由過度表達(dá)（低表達(dá)）變?yōu)榈捅磉_(dá)（過度表達(dá)）稱狀態(tài)改變。由于ER、PR均定位于細(xì)胞核，故以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，表達(dá)率的標(biāo)準(zhǔn)為：陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為（-），陽性細(xì)比例為10%～25%為（+），陽性細(xì)胞比例為 26%～50%為（++），陽性細(xì)胞比例＞50%為（+++）。C-erbB-2 呈 （+++）被認(rèn)為是過度表達(dá)；呈（-）～（+）被認(rèn)為是低表達(dá)。Ki-67的增殖指數(shù)（PI）是指計(jì)算1 000個(gè)乳腺癌細(xì)胞，陽性細(xì)胞所占百分比，PI≥20%為高表達(dá)，＜20%為低表達(dá)。pS2表達(dá)率的標(biāo)準(zhǔn)與ER相同。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)關(guān)系的分析采用Spearman秩相關(guān)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床療效

經(jīng)CEF方案化療2個(gè)療程后，30例Ⅱ期乳腺癌患者中有24例達(dá)到PR，其臨床部分緩解率為80.0%（24/30）；10例Ⅲ期乳腺癌患者7例達(dá)到PR，其臨床部分緩解率為70.0%（7/10）；40例Ⅱ～Ⅲ期乳腺癌患者中共 30例達(dá)到 PR的效果，總有效率為77.5%（31/40）；Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者中分別有6例和3例達(dá)到SD；所有患者中均未出現(xiàn)CR與PD病例。Ⅱ、Ⅲ期患者的臨床療效一致性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），即可以認(rèn)為Ⅱ期乳腺癌和Ⅲ期乳腺癌患者經(jīng)CEF方案化療2個(gè)療程后臨床療效一致，具體結(jié)果見表1。

表1 Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者臨床療效一致性比較（例）

2.2 分子標(biāo)志物在新輔助化療中的意義

40例患者新輔助化療前后分子標(biāo)志物 （ER、PR、Ki-67、C-erbB-2、pS2） 的量變依次為 17.5%、15.0%、22.5%、32.5%、7.5%；狀態(tài)改變依次為22.5%、42.5%、12.5%、50.0%、45.0%；新輔助化療前后Ki-67增殖指數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.218，P=0.003）。

2.2.1 ER表達(dá)在新輔助化療中的意義 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，ER表達(dá)的改變與術(shù)前新輔助化療的臨床療效呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），相關(guān)系數(shù)r為0.313。臨床療效為SD時(shí)，ER 表達(dá)改變 5例（12.5%），其中，3例（7.5%）和 2例（5.0%）分別為陽性表達(dá)上調(diào)和陽性表達(dá)下調(diào)；臨床療效為PR時(shí)，ER表達(dá)改變10例（25.0%），均為陽性表達(dá)上調(diào)。由此可以看出，隨著臨床療效的增加，ER陽性表達(dá)逐漸上調(diào)；反之，隨著臨床療效的降低，ER陽性表達(dá)逐漸下調(diào)。

2.2.2 Ki-67表達(dá)在新輔助化療中的意義 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，Ki-67表達(dá)的改變與術(shù)前新輔助化療的臨床療效呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），相關(guān)系數(shù)r為0.373。臨床療效為 SD時(shí)，Ki-67表達(dá)改變 12例 （30.0%）， 其中，9例（22.5%）和3例（7.5%）分別為PI下調(diào)和上調(diào)；臨床療效為PR時(shí)，Ki-67表達(dá)改變20例（50.0%），均為PI下調(diào)。由此可以看出，隨著臨床療效的降低，Ki-67增殖指數(shù)下調(diào)減弱；反之，隨著臨床療效的增加，Ki-67增殖指數(shù)下調(diào)明顯增強(qiáng)。

2.2.3 其他分子標(biāo)志物在新輔助化療中的意義 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，其他分子標(biāo)志物PR、C-erbB-2、pS2表達(dá)的改變與化療療效并無明顯相關(guān)性（均P＞0.05）。

3 討論

乳腺癌作為婦女常見的惡性腫瘤之一，目前，對(duì)該疾病的治療重點(diǎn)已轉(zhuǎn)向注重早期全身治療的新模式，而其中最重要的就是新輔助化療的出現(xiàn)。新輔助化療是指在手術(shù)治療或放療前進(jìn)行的全身性、系統(tǒng)性的2～4個(gè)周期的細(xì)胞毒性藥物治療[1]。新輔助化療能夠提高保乳率，根據(jù)臨床的治療反應(yīng)評(píng)估和選擇有效化療方案，為術(shù)后殘留病灶的治療提供化療選擇依據(jù)。ER、PR是乳腺癌的預(yù)測(cè)因子和預(yù)后因子，在激素治療時(shí)可以預(yù)測(cè)效果[2]。乳腺癌生物學(xué)指標(biāo)在新輔助化療前后會(huì)發(fā)生很大的變化[3]。乳腺癌術(shù)后輔助治療方案的選擇可能受術(shù)前新輔助化療能否使乳腺癌ER、PR表達(dá)出現(xiàn)變化的影響。本研究的結(jié)果顯示，ER、PR狀態(tài)在化療前后無明顯差異，但部分患者ER的狀態(tài)受化療的影響。ER、PR表達(dá)出現(xiàn)變化的原因，費(fèi)伯健等[4]認(rèn)為可能是：對(duì)ER、PR的染色技術(shù)水平的不同以及化療后腫瘤細(xì)胞染色的透明度可能會(huì)降低影響判斷。另外，腫瘤組織內(nèi)部存在著生物學(xué)差異，術(shù)前活檢標(biāo)本和術(shù)后用于檢測(cè)ER的腫瘤標(biāo)本作為整個(gè)腫瘤組織的一部分存在著差異。

C-erbB-2對(duì)乳腺癌患者的預(yù)后及乳腺癌對(duì)多種治療方法的敏感性均能有效預(yù)測(cè)且已有文獻(xiàn)報(bào)道[1]。有研究提示，新輔助化療并不能改變C-erbB-2基因的增殖狀況[5]。本研究顯示，C-erbB-2在新輔助化療前后的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與Tauther等[6]研究報(bào)道的結(jié)果相同。但C-erbB-2在有腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中陽性率較高，這可能提示C-erbB-2主要影響腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能，對(duì)增殖性影響較小。

Ki-67是一種在增殖細(xì)胞中表達(dá)的核抗原，Ki-67表達(dá)能可靠而迅速地反映惡性腫瘤增殖率，其表達(dá)的高低能夠?qū)Χ喾N惡性腫瘤細(xì)胞的增殖狀態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)，并且對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的評(píng)估、腫瘤的臨床化療及推斷其預(yù)后均有相當(dāng)?shù)闹笇?dǎo)意義。在相關(guān)的研究中，衛(wèi)燕等[7]的研究提示，Ki-67表達(dá)與化療敏感性并無明顯相關(guān)性。經(jīng)多組研究證實(shí)，腫瘤細(xì)胞的增殖是重要的預(yù)后因素，腫瘤細(xì)胞增殖越快，提示對(duì)化療的反應(yīng)性越好。本研究結(jié)果顯示，新輔助化療能明顯降低乳腺癌Ki-67的表達(dá)。

pS2對(duì)了解乳腺癌的生物學(xué)行為和激素依賴性有很大的幫助，并能指導(dǎo)內(nèi)分泌治療。有學(xué)者認(rèn)為，作為乳腺癌內(nèi)分泌治療的預(yù)測(cè)指標(biāo)，其作用可能要優(yōu)于ER和PR。本研究中新輔助化療前pS2表達(dá)與ER表達(dá)正相關(guān)，但用Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)pS2與化療療效卻顯著相關(guān)性。

綜上所述，新輔助化療能使Ⅱ/Ⅲ期乳腺癌達(dá)到PR，能明顯降低乳腺癌組織Ki-67的表達(dá)，且Ki-67高表達(dá)的患者對(duì)化療更敏感，因此，Ki-67可能是預(yù)測(cè)化療療效的敏感因子；對(duì)PR、C-erbB-2、pS2的表達(dá)雖無顯著影響，但仍能改變部分患者的上述腫瘤特異性標(biāo)志物的表達(dá)。此研究?jī)H選擇CEF方案，尚未包括紫杉醇在內(nèi)，故不能代表所有的新輔助化療；且本研究的樣本量尚小，觀察療效的時(shí)間也較短，所以還有待增大樣本量及增加化療方案做進(jìn)一步探討。乳腺癌患者的預(yù)后判斷是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的問題，其中存在許多未知因素，而且這些預(yù)測(cè)指標(biāo)與以后長(zhǎng)期隨訪結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，將會(huì)進(jìn)一步明確其臨床價(jià)值。

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Clinical significance of molecular markers expression before and after neoadjuvant chemotherapy of breast cancer

ZENG Yufeng LUO Rongcheng▲YANG Jiehui MI Xianjun
Zhongshan Bo'ai Hospital Affiliated to Southern Medical University,Guangdong Province,Zhongshan 528403,China

ObjectiveTo explore the clinical significance of molecular markers expression before and after neoadjuvant chemotherapy of breast cancer.MethodsMolecular markers expression before and after neoadjuvant chemotherapy among 40 cases of patients with invasive ductal carcinoma of stageⅡ-Ⅲ was tested by immunohistochemistry method.The changes reasons and correlation between molecular markers and clinical effect were analyzed.ResultsAfter neoadjuvant chemotherapy,biological molecular markers of 40 patients(ER,PR,C-erbB-2,Ki-67 and pS2)all had some quantitative and status changes,and the changes of ER,Ki-67 expression were correlated with clinical effect(P＜0.05).ConclusionER and Ki-67 expression can be used to predict the sensitivity of chemotherapy curative effect.

Breast cancer;Neoadjuvant chemotherapy;Molecular marker

R737.9

A

1673-7210（2012）08（c）-0048-02

曾宇鋒（1970-），男，2008級(jí)在職碩士研究生，副主任醫(yī)師?！?/p>

2012-03-30 本文編輯：程 銘）