王新秋，高 艷，李功勇，2，何 勇，袁子國，翁亞彪，林瑞慶

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州510642；2.廣東省清遠(yuǎn)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東 清遠(yuǎn)511515）

弓形蟲病是由孢子蟲綱、弓形蟲屬的龔地弓形蟲（Toxoplasmagondii）引起的一種寄生于動(dòng)物或人的細(xì)胞內(nèi)的多宿主原蟲病，是一種呈世界性分布的人獸共患寄生蟲?。?－2］。弓形蟲病在人群中流行范圍廣，全世界有約1／4人口受到感染，平均血清陽性率為25%～50%，甚至可高達(dá)85%以上［3］。龔地弓形蟲血清學(xué)調(diào)查在許多國家都有研究［1－2］，并且在中國的許多省份也見報(bào)道，但禽類的報(bào)道相對較少［4－7］。盡管禽類感染弓形蟲常呈亞臨床癥狀或無臨床癥狀，但禽作為其傳播的中間宿主，在該病的傳播中起重要作用［1］。廣東是我國水禽的傳統(tǒng)出口大省，而清遠(yuǎn)市是廣東養(yǎng)鵝業(yè)的重要的生產(chǎn)基地，對弓形蟲特異性抗體的檢測可以揭示弓形蟲在鵝群中的感染情況，有助于了解該病在廣東地區(qū)以至我國養(yǎng)鵝業(yè)的流行情況，并有利于審時(shí)度勢，提前預(yù)防，以減少病原對養(yǎng)鵝業(yè)及對社會(huì)的影響和危害，為更好的預(yù)防和控制此類寄生蟲提供參考。

1 材料與方法

1.1 血清樣品的采集 血清樣品從廣東省清遠(yuǎn)市12個(gè)鵝場（編號 MG1－MG8，BG1－BG4）不同日齡的鵝只，共520只，其中包括1～30日齡肉鵝，31～60日齡肉鵝和60日齡以上肉鵝各120只，91～360日齡種鵝和360日齡以上種鵝各80只（表1）。無菌采集受檢動(dòng)物的靜脈血1.5～2.0mL，離心獲得血清。

1.2 檢測試劑 血清稀釋液及抗原稀釋液由本實(shí)驗(yàn)室自備保存。檢測抗原由美國農(nóng)業(yè)部動(dòng)物與自然資源研究所Jitender Dubey教授惠贈(zèng)。

1.3 方法 應(yīng)用美國農(nóng)業(yè)部動(dòng)物與自然資源研究所Jitender Dubey教授所贈(zèng)弓形蟲抗原按常規(guī)方法進(jìn)行抗體檢測，反應(yīng)在96孔微孔板上進(jìn)行?？乖?00μL的抗原稀釋液中加入7μL的2－巰基乙醇、10μL的伊文氏藍(lán)和30μL的抗原的比例稀釋備用。每孔加血清稀釋液24μL，除陽性對照孔、陰性對照孔和空白對照孔之外，每孔加1μL的待檢血清。在加入25μL稀釋后的抗原。充分振蕩后于37℃溫育過夜。結(jié)果判定：判定“＋＋”以上的為陽性，“＋”以下的判定為陰性。

1.4 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

被檢520份鵝血清中，共檢出弓形蟲抗體陽性的9份，陽性率為1.73%。其中肉鵝血清360份，檢出弓形蟲抗體陽性2份，陽性率為0.56%，鵝場MG2和MG3各檢出1例陽性血清，陽性率均為2.22%；種鵝血清160份，檢出弓形蟲抗體陽性7份，陽性率為4.38%，鵝場BG1、BG2、BG3和BG4的陽性率分別為：2.5%、5%、7.5%、2.5%，見表1。

表1 清遠(yuǎn)市鵝弓形蟲抗體的血清學(xué)調(diào)查樣品及結(jié)果

3 分析與討論

由于弓形蟲病的感染一般無特異性臨床癥狀而難以確診，病原分離限于機(jī)率及感染期不同等原因使得這一確診方法不易達(dá)到預(yù)期目的，因此血清學(xué)診斷方法仍為目前主要的診斷方法。常見的血清學(xué)方法有染色試驗(yàn)（DT）、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT與CIT）、直接凝集試驗(yàn)（DAT）、間接凝集試驗(yàn)（IHAT）、乳膠凝集試驗(yàn)（LAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、間接免疫熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）以及本試驗(yàn)所用的改良凝集試驗(yàn)（MAT）。MAT方法是在直接凝集試驗(yàn)的基礎(chǔ)上經(jīng)改良發(fā)展而來的，是目前檢測禽弓形蟲抗體最為特異、敏感的方法，其原理是用福爾馬林浸泡的弓形蟲速殖子和稀釋的血清在微量“U”型板上反應(yīng)，陽性樣品產(chǎn)生凝集現(xiàn)象，而陰性樣品將在孔底出現(xiàn)速殖子沉積團(tuán)。由于試驗(yàn)前血清樣品經(jīng)2－巰基乙醇的處理將IgM 蛋白變性直接檢測IgG抗體，使得MAT方法克服了直接凝集試驗(yàn)特異性不強(qiáng)的缺點(diǎn)；在抗原稀釋液中加入伊文氏藍(lán)染液，使得陰、陽性結(jié)果在藍(lán)色背景下更容易觀察，可直接用肉眼觀察，不需任何儀器。鑒于上述優(yōu)點(diǎn)，本方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于禽弓形蟲的流行病學(xué)調(diào)查、蟲株分離以及臨床檢測［2］。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，清遠(yuǎn)市不同鵝場的鵝弓形蟲抗體檢測陽性率較低，與之前實(shí)驗(yàn)室的對清遠(yuǎn)散養(yǎng)鵝［7］調(diào)查的陽性率比較差異極顯著（P＜0.01），造成這種差異可能的原因有以下幾個(gè)方面：（1）本次調(diào)查樣品來源于清遠(yuǎn)市的規(guī)?；B(yǎng)殖場，規(guī)?；B(yǎng)殖場能夠有效控制環(huán)境因素，采用封閉式飼養(yǎng)管理，有利于疾病控制，也有利于藥物的合理使用。（2）貓、犬等多種動(dòng)物都可作為弓形蟲的中間宿主，同時(shí)貓又為弓形蟲的終未宿主，農(nóng)村散養(yǎng)戶犬貓活動(dòng)較頻繁，而規(guī)?；B(yǎng)殖場養(yǎng)犬貓的少，且能夠有效控制其他中間宿主動(dòng)物在養(yǎng)殖場的活動(dòng)，有助于弓形蟲病的控制。（3）由于本次調(diào)查樣品量的限制，可能存在一些誤差，故需加大樣品量，進(jìn)行進(jìn)一步分析。在本次調(diào)查中，清遠(yuǎn)地區(qū)種鵝的弓形蟲感染率明顯高于肉鵝，差異顯著（P＜0.05），可能與鵝的日齡和飼養(yǎng)管理不同等有關(guān)，肉鵝飼養(yǎng)周期相較于種鵝的要短很多，故而接觸病原的機(jī)會(huì)相對地也更少；兩種鵝的用途不一樣，其飼養(yǎng)喂料、用藥方式等也不盡相同。

本次調(diào)查有利于掌握廣東省清遠(yuǎn)市鵝弓形蟲病的流行情況，種鵝的感染率較之于肉鵝的要高，可能會(huì)給畜禽和人類健康帶來威脅，應(yīng)引起重視，采取進(jìn)一步綜合戰(zhàn)略措施預(yù)防和控制鵝弓形蟲病，減少對社會(huì)帶來的危害。

［1］Dubey J P，Jones J L.Toxoplasma gondii infection in humans and animals in the United States［J］.Int J Parasitol，2008，38：1257－1278.

［2］Dubey J P.Toxoplasmosis in pigs－the last 20years［J］.Vet Parasitol，2009，164：89－103.

［3］于恩庶.弓形蟲病學(xué)［M］.2版.福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1992.

［4］Yan C，Yue C L，Yuan Z G，etal.Toxoplasma gondii infection in domestic ducks，free－range and caged chickens in southern China［J］.Vet Parasitol，2009，165（3－4）：337－340.

［5］Zou F C，Sun X T，Xie Y J，etal.Seroprevalence of Toxoplasma gondii in pigs in Southwestern China［J］.Parasitol Int，2009，58：306－307.

［6］Huang C Q，Lin Y Y，Dai A L，etal.Seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in breeding sows in Western Fujian Province，China［J］.Trop Anim Health Prod，2010，42：115－118.

［7］Yan C，Yue C L，Zhang H，etal.Serological Survey of Toxoplasma gondii Infection in the Domestic Goose（Anser domestica）in Southern China［J］.Zoonoses Public Health，2011，58（4）：299－302.