龔其海，趙 萬，余 蘭，王 毅，劉 波，石京山

(遵義醫(yī)學(xué)院1．藥理學(xué)教研室暨貴州省基礎(chǔ)藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;2．藥學(xué)院實(shí)習(xí)生;3．藥學(xué)院分析化學(xué)教研室，貴州遵義 563099)

黨參出典于《本草從新》［1］，為桔?？浦参稂h參(Codonopsis pilosula(Franch)Nannf)及其同屬多種植物的干燥根，是我國傳統(tǒng)的補(bǔ)益藥。產(chǎn)地眾多，種類各異，主產(chǎn)于貴州、山西、四川等省。黨參化學(xué)成分復(fù)雜。幾十年來，從黨參中分離鑒定了10種甾醇類，21種糖苷類，5種生物堿類及含氮成分，34種揮發(fā)油成分，13種三萜類及其他類成分［2］。黨參的藥理作用較為復(fù)雜，主要包括補(bǔ)血作用、增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能等作用［3］，并以其相關(guān)活性部位或復(fù)方廣泛用于臨床。

貴州道真縣陽溪鎮(zhèn)、洛龍鎮(zhèn)等地盛產(chǎn)“洛龍黨參”，是貴州著名的藥食兩用特有藥材，質(zhì)量優(yōu)良，但產(chǎn)量有限，嚴(yán)重限制了其后續(xù)開發(fā)。為擴(kuò)大“洛龍黨參”的種植規(guī)模，余慶縣關(guān)興鎮(zhèn)地理環(huán)境與道真縣洛龍鎮(zhèn)較為相似，因此考慮對其異地移栽。然而，移栽后是否改變其主要成分的主要藥理學(xué)效應(yīng)尚不清楚。因此，本研究觀察并比較道真洛龍黨參及其移栽余慶關(guān)興后其主要成分黨參多糖對環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)所致小鼠免疫功能抑制的影響，旨在闡明道真洛龍黨參移栽后其主要成分的主要藥理學(xué)效應(yīng)是否發(fā)生改變提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動物 昆明種小鼠72只，體重(18～22)g，雌雄各半，由中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號:SCXK(渝)2007－0003。

1．2 主要藥品及試劑 印度墨汁(南京都萊生物技術(shù)有限公司)，注射用CTX(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字:H320208570)，黃芪顆粒(貴州漢方制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字:Z19993254)，洛龍黨參(采自貴州省道真仡佬族苗族自治縣洛龍鎮(zhèn))，移栽后黨參(采自貴州省余慶縣關(guān)興鎮(zhèn))。

1．3 主要儀器 電子天平(北京賽多利斯電子天平有限公司)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)，HITACHI U3010紫外分光光度計(HITACHI公司)，F(xiàn)Z植物粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)。

1．4 黨參多糖的提取及精制 選擇根條肥壯，無蟲蛀霉變、無破損的洛龍黨參及移栽后黨參，洗凈，陰干，F(xiàn)Z植物粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，80℃干燥5h備用。后續(xù)提取及精制按照本課題組既往方法進(jìn)行［4］。實(shí)驗(yàn)中兩種多糖的提取及精制過程一致。

1．5 實(shí)驗(yàn)動物的分組及處理 昆明種小鼠72只，雌雄各半，體重20±2g，按照預(yù)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果隨機(jī)分為空白組，模型組，陽性組，道真洛龍黨參低、高劑量組及移栽組共6組，每組12只。除空白組外，其余各組均腹腔注射 CTX 100 mg/kg，連續(xù)3 d。造模當(dāng)日起，連續(xù)灌胃給藥7 d(0．02 mL/g)，陽性組灌胃黃芪顆粒0．2 g/kg，道真洛龍黨參低、高劑量組分別灌胃道真洛龍黨參多糖400 mg/kg和800 mg/kg，移栽灌胃移栽后的黨參多糖800 mg/kg，空白組及模型組灌胃等體積的生理鹽水，每天1次。

1．6 小鼠靜注碳粒廓清速率的測定 末次給藥24 h后稱重，經(jīng)小鼠尾靜脈注射用1%明膠稀釋5倍的印度墨汁各0．1 mL/10 g，即刻計時，分別于5，10 min(記錄為 t1、t2)時眼眶靜脈取血 80 μl，各加入0．1%碳酸鈉溶液8 m搖勻，分光光度計在波長680 nm處測吸光度值，分別記錄為A1、A2，計算廓清速率K。第2次取血后將小鼠脫頸椎處死，分別取肝(剔除膽囊)、脾、胸腺，剔除雜質(zhì)后用生理鹽水洗去血液，再用濾紙吸干血跡稱重，計算吞噬指數(shù)α。其中，廓清速率(K)=(logA1－logA2)/(t2－t1)，吞噬指數(shù)α=K1/3×體重/(肝重+脾重)。1．7 小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的計算 按照1．6中小鼠體重(g)，脾、胸腺(mg)，計算小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)。公式:胸腺指數(shù)=(胸腺重量/小鼠體重)×10，脾臟指數(shù) =(脾臟重量/小鼠體重)×10。

1．8 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)用SPSS 12．0統(tǒng)計軟件處理，各項指標(biāo)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間比較使用one－way ANOVA檢驗(yàn)(方差齊使用LSD法，方差不齊使用Dunnett＇T3法)。P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 黨參多糖對小鼠靜注碳粒廓清速率的影響小鼠處死后，計算其廓清速率K和吞噬指數(shù)α。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組K和α均低于空白組。然而，陽性藥組、道真洛龍黨參高劑量組及移栽組K和α均高于模型組。值得注意的是，道真洛龍黨參高劑量組及移栽組的K和α均未見差異(見表1)。

表1 黨參多糖對小鼠靜注碳粒廓清速率及吞噬指數(shù)的影響(n=12，x±s)

2．2 黨參多糖成分對小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的影響按照公式計算了小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)較空白組明顯降低。然而，陽性藥組、道真洛龍黨參高劑量組及移栽組小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯高于模型組。值得注意的是，道真洛龍黨參高劑量組及移栽組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均未見差異(見表2)。

表2 黨參多糖對小鼠胸腺、脾臟指數(shù)的影響(n=12，x±s)

3 討論

CTX是臨床治療惡性腫瘤最常用的烷化劑代表藥物之一，也是一種很強(qiáng)免疫抑制劑［5］。其抑制免疫的主要機(jī)制包括殺傷淋巴細(xì)胞(尤其是早期對B細(xì)胞)、NK細(xì)胞，抑制T淋巴細(xì)胞對抗原刺激后的淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化及抑制B細(xì)胞的特異性抗體反應(yīng)等［6］。在實(shí)驗(yàn)室研究過程中，通常將CTX用作工具藥建立免疫功能抑制模型［7］。本研究發(fā)現(xiàn)，小鼠腹腔注射CTX后，其碳粒廓清速率、胸腺及脾臟指數(shù)均較空白組明顯降低。碳粒廓清試驗(yàn)是根據(jù)血流中碳粒被廓清的速度，判斷單核－巨噬細(xì)胞的功能。當(dāng)顆粒狀異物靜脈注入小鼠血循環(huán)后，可迅速被單核細(xì)胞清除，主要被定居在肝臟和脾臟的巨噬細(xì)胞吞噬。當(dāng)異物量恒定時，其血流中顆粒清除率可反映單核－巨噬細(xì)胞吞噬功能。碳粒廓清速率下降，反映單核－巨噬細(xì)胞的功能降低。本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報道一致［7］。胸腺和脾臟是機(jī)體主要的免疫器官，其相對重量的變化在免疫評價中占有重要地位，脾臟和胸腺指數(shù)顯著降低，反映出免疫功能受損［8］。

本研究通過CTX所致小鼠免疫功能抑制模型，選用黃芪顆粒作為陽性對照［9］，觀察并比較遵義道真洛龍黨參及其移栽余慶關(guān)興后所含多糖的免疫功能增強(qiáng)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，道真洛龍黨參多糖高劑量組及移栽后的黨參多糖在等劑量下均產(chǎn)生了與黃芪顆粒相似的效應(yīng)，碳粒廓清速率及胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均明顯高于模型組，這表明兩種多糖均具有減輕CTX對小鼠免疫功能的抑制作用，與文獻(xiàn)報道一致［10］。值得注意的是，遵義道真洛龍黨參及其移栽余慶關(guān)興后所含多糖在等劑量下對小鼠免疫功能的影響未見顯著差異。本研究在對兩種多糖的提取及精制時采用相同條件，且提取工藝也完全相同，故可以認(rèn)為在本研究條件下，道真洛龍黨參經(jīng)移栽后其主要成分之一黨參多糖對小鼠免疫功能的影響未發(fā)生改變。從該角度講，其移栽后的主要活性成分的主要藥理作用并未受到影響。

總之，本研究表明，遵義道真洛龍黨參及其移栽余慶關(guān)興后所含多糖均可減輕CTX所致小鼠免疫功能抑制，且移栽后所含多糖的免疫功能增強(qiáng)作用未受影響。

［1］王世民．黨參出典小考［J］．山西中醫(yī)，2005，21(6):42－43．

［2］朱恩圓，賀慶，王崢濤，黨參化學(xué)成分研究［J］．中國藥科大學(xué)學(xué)報，2001，32(2):94 －95．

［3］焦紅軍．黨參的藥理作用及其臨床應(yīng)用［J］．臨床醫(yī)學(xué)，2005，25(4):89，92．

［4］余蘭，陳華，婁方明．洛龍黨參的多糖含量測定［J］．貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(7):190－191．

［5］Motoyoshi Y，Kaminoda K，Saitoh O，et al．．Different mechanisms for anti－tumor effects of low－ and highdose cyclophosphamide［J］．Oncol Rep，2006，16(1):141－146．

［6］Krüger K，Mooren F C．T cell homing and exercise［J］．Exerc Immunol Rev，2007，13:37 －54．

［7］楊穎，蔡玟，黃志彪，等．環(huán)磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型建立與評價［J］．中國公共衛(wèi)生，2008，28(5):581－583．

［8］張汝學(xué)，賈正平，李茂星，等．鎖陽Part III對環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠免疫功能的影響［J］．中藥材，2011，31(3):407－409．

［9］許鵬飛，孫京惠，高福云，等．黃芪顆粒對小鼠免疫調(diào)節(jié)功能的影響［J］．中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14(4):27－28．

［10］張曉君，祝晨蔯，胡黎，等．黨參多糖對小鼠免疫和造血功能的影響［J］．中藥新藥與臨床藥理，2003，14(3):174－176．