邊 可，張素素，汪秋鴻，郭瑞珍，王海青

(遵義醫(yī)學院珠海校區(qū)1．臨床本科2008級學生;2．病理學教研室，廣東珠海 519041)

腫瘤轉移是惡性腫瘤生物學特性的表現(xiàn)之一，針對同源性兩種腫瘤轉移率不同和惡性腫瘤早期、晚期發(fā)生轉移的幾率不同等現(xiàn)象，本研究采用免疫組織化學方法，選用凋亡抑制基因Survivin，檢測來源相同但轉移能力卻不同的皮膚鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)和皮膚基底細胞癌(basal cell carcinoma，BCC)，檢測有淋巴結轉移和無淋巴結轉移的大腸癌(Carcinoma of large intestine，CRC)組織中Survivin蛋白的表達，探討Survivin蛋白與上述幾種腫瘤轉移這一生物學行為的關系。

1 材料與方法

1．1 標本來源 收集遵義醫(yī)學院第五附屬醫(yī)院病理科2006年8月至2010年12月的外檢石蠟包埋標本，4μm厚連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，光鏡觀察。所有病例術前均未經(jīng)放療和(或)化療。

1．1．1 皮膚BCC和SCC組 皮膚BCC 15例，女性4例，男性6例，年齡35～74歲，平均年齡65歲，均發(fā)生在顏面部。SCC組10例，女性4例，男性6例;年齡17～83歲，平均年齡62．50歲;頭皮4例，下肢3例，耳周、面部各3例，上肢、頸部及腹部各1例。

1．1．2 CRC組 27例，其中無淋巴結轉移17例，女性5例，男性12例，年齡34～85歲，平均59．4歲，結腸10例，直腸7例;有淋巴結轉移10例，女性5例，男性5例，年齡21～83歲，平均年齡56．9歲，結腸7例，直腸3例 。

1．2試劑 Survivin(兔抗人)多克隆抗體，S－P免疫組化試劑盒，DAB顯色試劑盒均購自福州邁新公司。

1．3 實驗方法 免疫組化染色(S－P法)，以已知Survivin表達陽性的胃癌組織為陽性對照，以PBS代替一抗作為空白對照。切片常規(guī)脫蠟至水，微波抗原修復，操作步驟按試劑盒說明書進行，經(jīng)DAB顯色，蘇木素復染，脫水干燥、透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察，拍照。

1．4 陽性判斷標準 陽性表達信號定位于細胞質或細胞核，陽性信號為棕黃色顆粒狀。采用半定量積分法判斷陽性等級，綜合染色程度和陽性細胞百分數(shù)兩方面記分相加的總分判斷陽性等級。

1．5 表達水平和表達強度判斷 運用CCD成像系統(tǒng)，每張切片隨機選取5個高倍視野成像，應用顯微圖像分析系統(tǒng)判斷陽性表達的面積(值越大，陽性表達面積越高)及其表達強度(值越大，陽性表達強度越高)，各取平均值進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

1．6 統(tǒng)計學分析 運用SPSS13．0統(tǒng)計軟件，所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，采用單因素方差分析和相關分析，以P＜0．05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 BCC和SCC中Survivin蛋白的表達 在皮膚BCC中Survivin蛋白呈弱陽性或陰性表達，在SCC中呈強陽性表達(見圖A～圖B)，BCC組Survivin蛋白的表達顯著低于SCC組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P﹤0．01)(見表1)。

2．2 大腸癌組織中Survivin蛋白的表達 在無淋巴結轉移的大腸癌中Survivin蛋白呈弱陽性或陰性表達，在有淋巴結轉移的大腸癌中呈陽性或強陽性表達(見圖C～圖D)，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P ＜0．01)(見表1)。

注:A:BCC中Survivin蛋白呈弱陽性表達(SP法×400);B:SCC中Survivin蛋白呈強陽性表達(SP法×400);C:無轉移大腸癌中Survivin蛋白呈弱陽性表達 (SP法×400);D:有轉移大腸癌中Survivin蛋白呈強陽性表達 (SP法×400)。

表1 survivin蛋白在各組腫瘤組織中的表達

3 討論

轉移是惡性腫瘤最基本的生物學特征之一，任何一種惡性腫瘤都具有侵襲轉移潛能，而其侵襲轉移潛能的高低受多方面因素的影響。Survivin是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子，是凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis protien，IAP)家族中最受重視的成員之一，與細胞周期密切相關，它調節(jié)G2/M期，參與細胞周期調控及有絲分裂。研究認為，Survivin是腫瘤組織中表達上調最為普遍的基因，在腫瘤發(fā)生過程中起重要作用。1998年Tamm等［1］研究了60株人類腫瘤細胞，發(fā)現(xiàn)60株細胞均有 Survivin的異常表達，并且在癌前細胞向癌細胞轉化過程中Survivin的表達逐漸升高，提示Survivin的異常高表達在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中發(fā)揮重要作用。此外，目前認為Survivin的高表達還與腫瘤的浸潤、轉移及預后密切相關，有研究報道，Survivin的異常高表達在直腸癌、胃癌、乳腺癌、甲狀腺乳頭狀癌和宮頸癌等多種惡性腫瘤的淋巴結轉移中起著重要的作用［2－6］。

本研究所選用的BCC和SCC是同源于皮膚表皮發(fā)生的惡性腫瘤，同屬于非黑素性皮膚癌，但是在臨床上BCC生長緩慢，對局部組織的破壞性侵襲性很強，卻幾乎不發(fā)生轉移，而SCC發(fā)展較快，浸潤轉移能力很強，很容易發(fā)生轉移，兩種腫瘤轉移的生物學特性有著明顯差異。此前，有研究顯示，在皮膚腫瘤中Survivin的異常表達與皮膚SCC和惡性黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展有關，而且也與它們的淋巴結轉移密切相關［7－9］。本組的研究結提示:Survivin在BCC和SCC兩種同源性腫瘤組織中的表達差異具有統(tǒng)計學意義，揭示了兩種腫瘤組織中凋亡抑制功能的強度不盡相同，細胞凋亡抑制功能的低表達，與BCC幾乎不轉移的生物學行為有關，而SCC中凋亡抑制功能的增強，則具有較強的浸潤轉移能力。另外本組研究的CRC早期很少發(fā)生轉移，而晚期轉移率卻很高，其轉移生物學特性的改變在CRC生長過程中也是一種常見的現(xiàn)象，這留給了我們研究探討的空間。本組研究結果顯示:Survivin蛋白在有淋巴結轉移的CRC組中的表達均明顯高于無淋巴結轉移組，差異有顯著性(P＜0．01)，這一結果揭示了隨著CRC的生長和進展，Survivin蛋白的表達逐漸增高，腫瘤組織中凋亡抑制功能逐漸增強，著間接提示了CRC在生長過程中的演進現(xiàn)象和異質性的獲得，也提示Survivin蛋白的高表達和凋亡抑制功能的增強可能在CRC淋巴結轉移的生物學特性方面發(fā)揮了一定的作用。

結合Survivin特殊的功能，從理論上講，Survivin的高水平表達，使其促進細胞增殖和抑制細胞凋亡的功能增強，導致腫瘤細胞凋亡抑制功能的解除，相對無限制增殖而形成腫瘤或促進轉移。另外，Survivin具有參與腫瘤血管的形成的作用，Survivin的高表達使腫瘤血管形成增強，使腫瘤細胞生長加快，從而促進了腫瘤的生長速度。本研究結果提示兩個問題，不同轉移潛能的兩種皮膚惡性腫瘤組織中，Survivin蛋白表達的強度不盡相同，兩種腫瘤轉移能力受凋亡抑制功能強弱的影響;腫瘤生長的不同時期其轉移潛能不一樣，腫瘤晚期轉移潛能的增強，受凋亡抑制功能逐漸增強的影響，Survivin蛋白的表達與腫瘤轉移潛能呈正相關。

［1］Tamm I，Wang Y，Sausville E，et al．IAP － family protein Survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas(CD95)，Bax，caspases，and anticancer drugs［J］．Cancer Res，1998，58(23):5315 －5320．

［2］Rodel F，Hofmann J，Grabenbauer G G，et al．High Survivin expression is associated with reduced apoptosis in rectal cancer and may predict disease－free survival after preoperative radiochemotherapy and surgical resection ［J］．Strahlenther Onkol，2002，178(8):426 －435．

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［9］涂亞庭，林云，陶娟，等．皮膚惡性黑色素瘤凋亡相關基因Survivin、Bax表達及其與端粒酶的關系［J］．中國皮膚性病學雜志，2005，19(6):325 －328，