楊兆麗 何家靖 林燕芳 詹利之 張美義 廣州中醫(yī)藥大學(xué)青蒿研究中心 廣州 510405

·實(shí)驗(yàn)研究·

銀翹清感片中薄荷、荊芥穗揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合的工藝研究

楊兆麗 何家靖 林燕芳 詹利之 張美義 廣州中醫(yī)藥大學(xué)青蒿研究中心 廣州 510405

目的：研究銀翹清感片中β-環(huán)糊精包合薄荷、荊芥穗揮發(fā)油的最佳工藝。方法：采用飽和水溶液法制備包合物，用L9（34）正交試驗(yàn)法，考察β-環(huán)糊精與揮發(fā)油的配比、包合溫度、包合時(shí)間三個(gè)因素對(duì)揮發(fā)油利用率、包合物含油率的影響。結(jié)果：最佳包合工藝為，揮發(fā)油與環(huán)糊精的投料量比為1:8（m l/g），包合溫度40℃，包合時(shí)間3h。結(jié)論：優(yōu)選的包合工藝操作簡(jiǎn)便、工藝穩(wěn)定，可用于大生產(chǎn)。

薄荷 荊芥穗揮發(fā)油 β-環(huán)糊精包合物 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

銀翹清感片是在傳統(tǒng)古方銀翹散基礎(chǔ)上自主研發(fā)的中藥復(fù)方制劑，具有疏風(fēng)解表、清熱解毒功效，用于風(fēng)熱感冒，癥見發(fā)熱頭痛、咳嗽口干、咽喉疼痛。處方由金銀花、連翹等9味中藥組成，其中，薄荷、荊芥穗含有較多揮發(fā)油，且是主要活性成分。傳統(tǒng)的方法多以噴灑加入，密封包裝保存[1]。該法的缺點(diǎn)是穩(wěn)定性差、貯存期間易揮發(fā)損失，質(zhì)量難以控制。近年來，采用β-環(huán)糊精（β-CD）包合中藥揮發(fā)油以增強(qiáng)穩(wěn)定性的方法已日趨成熟。結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[2-7]，本文采用飽和水溶液法進(jìn)行揮發(fā)油β-CD的包合研究，并用正交試驗(yàn)法對(duì)制備包合物的最佳工藝條件進(jìn)行篩選。

1 儀器與試藥

95-1型恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器廠）；HN1006型超聲清洗器（廣州華南超聲設(shè)備廠）；揮發(fā)油測(cè)定器（北京玻璃儀器廠）；WG2003SBC型臺(tái)式干燥箱（重慶萬達(dá)儀器有限公司）。β-環(huán)糊精（廣東省郁南縣環(huán)糊精廠，純度98%以上）；薄荷、荊芥穗（購于廣州至信中藥飲片有限公司，經(jīng)鑒定符合2010版一部《中國藥典》薄荷、荊芥穗項(xiàng)下規(guī)定）。所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的制備 將薄荷、荊芥穗藥材按處方比例稱取，放入圓底燒瓶中，加入6倍量水，按《中國藥典》（2010版一部）附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法甲法連接提取裝置，提取約5h后揮發(fā)油量不再增加，停止加熱，靜置30min，收集揮發(fā)油。即得薄荷、荊芥穗揮發(fā)油混合物，為淡黃色液體。

2.2 揮發(fā)油包合工藝正交試驗(yàn) 采用飽和水溶液法進(jìn)行包合物的制備，稱取一定量的β-環(huán)糊精，加入25倍量純化水，加熱使之完全溶解，降到所需的溫度，在磁力攪拌器上邊攪拌邊緩緩加入揮發(fā)油1mL（預(yù)先配成50%的無水乙醇溶液），并在一定溫度下攪拌適當(dāng)時(shí)間，靜置冷藏24h，抽濾，用少量乙醚（30～60℃）洗滌，電熱恒溫干燥箱50℃以下干燥，即得成品。設(shè)定揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的比例（A），包合溫度（B）和包合時(shí)間（C）3個(gè)因素為考察因子，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，采用L9（34）正交表設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，見表1。為更全面地分析，用綜合評(píng)分尋找最佳工藝，計(jì)算方法如下：在揮發(fā)油包合物的兩個(gè)指標(biāo)中，分別選取最高作為100分，其余按公式計(jì)算，得分yi′=100-最高值+yi，然后對(duì)兩個(gè)指標(biāo)賦予不同的權(quán)重，考慮到生產(chǎn)成本，將揮發(fā)油利用率的權(quán)重定為0.7，含油率的權(quán)重定為0.3。

2.3 包合物中揮發(fā)油的含量測(cè)定 精密稱定制得的包合物置于500mL燒瓶中，加純化水200mL，按照《中華人民共和國藥典》（2010版一部）附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定法甲法測(cè)定包合物中揮發(fā)油的實(shí)際含量。計(jì)算揮發(fā)油利用率和包合物含油率。結(jié)果見表2～3。

計(jì)算公式：揮發(fā)油利用率=包合物中實(shí)際油量（mL）/加入油量（mL）×100%；包合物含油率=提出油量（mL）/包合物質(zhì)量（g）×100%；綜合得分=揮發(fā)油利用率得分×0.7+含油率得分×0.3。

方差分析結(jié)果表明，以揮發(fā)油利用率為指標(biāo)，B＞A＞C，A2B2C3為最佳因素水平組合；以包合物含油率為指標(biāo)，A＞C＞B，A1B1C1為最佳因素水平組合；綜合評(píng)分，B＞A＞C，A2B2C3為最佳因素水平組合。因該正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的水平較接近，結(jié)果無顯著性差異。確定最佳工藝條件為，揮發(fā)油與環(huán)糊精的投料量比為1:8，包合溫度40℃，包合時(shí)間3h。

2.4 包合工藝的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按上述最佳工藝條件制備3份揮發(fā)油包合物，提取揮發(fā)油，得揮發(fā)油平均利用率為87.5%。

2.5 空白回收實(shí)驗(yàn) 在200mL純化水中加入薄荷、荊芥穗揮發(fā)油2mL，按包合物揮發(fā)油提取方法提取揮發(fā)油，重復(fù)3次，結(jié)果空白回收率均值為97.5%。

2.6 紫外分光光度法驗(yàn)證包合物 分別制備同劑量的揮發(fā)油飽和水溶液、β-環(huán)糊精水溶液、揮發(fā)油與β-環(huán)糊精的物理混合水溶液、包合物水溶液。將樣品進(jìn)行紫外掃描，掃描圖譜結(jié)果表明：揮發(fā)油與物理混合物在258nm附近均有一個(gè)明顯的紫外吸收峰，而β-環(huán)糊精和包合物在此沒有紫外吸收，說明揮發(fā)油已經(jīng)進(jìn)入β-環(huán)糊精的空腔，被充分包合，形成包合物。結(jié)果見圖1。

2.7 TLC法鑒別揮發(fā)油包合物 分別取包合前后的揮發(fā)油各0.02mL，加入石油醚（60～90℃）2mL，各取5μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-乙酸乙酯（9:6:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)清晰，置氨蒸氣中熏至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果表明揮發(fā)油包合前后TLC色譜完全一致，說明包合前后揮發(fā)油未發(fā)生變化。結(jié)果見圖2。

3 討 論

銀翹清感片中揮發(fā)油經(jīng)過β-環(huán)糊精包合后，穩(wěn)定性得到提高，使藥物質(zhì)量的穩(wěn)定得到有效控制，保證藥物療效。在揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合的正交試驗(yàn)中，我們以揮發(fā)油利用率、包合物含油率為指標(biāo)綜合評(píng)分，考察各因素對(duì)包合作用的影響，確定最佳的包合工藝為，揮發(fā)油與環(huán)糊精的投料量比為1:8，包合溫度40℃，包合時(shí)間3h。

文獻(xiàn)報(bào)道有用到差示量熱掃描法、熱重分析法、紅外光譜法和氣相色譜法對(duì)包合物進(jìn)行表征分析[2-3]，本文通過紫外分光光度法和TLC法進(jìn)行包合物的驗(yàn)證和包合前后揮發(fā)油的鑒別試驗(yàn)，確定形成了揮發(fā)油包合物，且包合前后揮發(fā)油成分基本一致，該方法簡(jiǎn)便可行。

β-環(huán)糊精包合揮發(fā)油常用的方法有飽和水溶液法、超聲波法、研磨法等，而飽和水溶液法操作簡(jiǎn)便，設(shè)備要求不高。為了適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)的需求，本研究采用飽和水溶液法進(jìn)行揮發(fā)油的包合，結(jié)果表明包合工藝簡(jiǎn)便、穩(wěn)定，包合率高，所得揮發(fā)油包合物增強(qiáng)了穩(wěn)定性，減少了揮發(fā)性，便于制劑生產(chǎn)與貯存，保證療效。

［1］國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典2010版（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1088-1089

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Study on the Process ofβ-cyclodextrin Inclusion Com pound w ith M int and Schizonepeta Spike Essential Oils in Yinqiaoqinggan Tablets

YANG Zhaoli，HE Jiajing，LIN Yanfang，et al.Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou(510405),China

Objective:To study the optimal process ofβ-cyclodextrin inclusion compound with mint and schizonepeta spike essential oils in Yinqiaoqinggan tablets.Methods:Inclusion compound was prepared with satu?rated water.L9（34）orthogonal test was used to examine how the inclusion compound compositions,inclusion tem?perature,and inclusion time effected the utilization of the oils and inclusion rate of oil.Results:The best inven?tory rating was 1 to 8 ml/g for oils andβ-cyclodextrin.The compound was best included at the temperature of 40℃ for 3 h.Conclusion:The preferred inclusion process has the advantages of simple operation,stable pro?cess,can be used for mass production.

mint schizonepeta spike β-cyclodextrin inclusion compound orthogonal test

2012-12-31

國家自然科學(xué)基金：（No.81274161，81001307），浙江省自然科學(xué)基金（No.Y2090918），浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究基金計(jì)劃項(xiàng)目（No.2012RCA046），杭州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（No.20080333Q28）

馬紀(jì)林，Tel：13634129626；E-mail:majilin0808@sohu.com