粟連秀 張兆明

（廣西醫(yī)科大學(xué)第八附屬醫(yī)院 廣西貴港 537100）

結(jié)直腸癌是人類常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，其發(fā)病率及死亡率在逐年上升。CD10是一種細(xì)胞表面鋅依賴性金屬蛋白酶，它在多種正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞及一些腫瘤組織的間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，調(diào)控著腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移［1、2］。本研究采用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)CD10蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，探討其表達(dá)與結(jié)直腸癌的發(fā)生及其與各臨床病理因素間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 一般資料 收集我院病理科2010年1月至2012年12月手術(shù)切除的結(jié)直腸癌標(biāo)本80例，男56例，女24例?；颊吣挲g28～81歲，平均年齡56.4歲。其中結(jié)腸癌48例，直腸癌32例；按Dukes分期：A期14例，B期18例，C期28例，D期20例；按腫瘤的分化程度：高中分化腺癌62例，低分化腺癌18例；有脈管侵犯者24例，無(wú)脈管侵犯者56例；腫瘤浸透漿膜者66例，未浸透漿膜者14例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者48例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。以同期結(jié)腸癌根治術(shù)標(biāo)本中遠(yuǎn)離癌的正常結(jié)腸黏膜50例作為對(duì)照組。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)，術(shù)前均未行放、化療。

1.2 主要試劑 鼠抗人CD10單克隆抗體、即用型快捷免疫組化MaxVisionTM試劑盒及DAB顯色劑均為福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。

1.3 方法 采用快捷免疫組化MaxVisionTM法。嚴(yán)格按照產(chǎn)品的操作說(shuō)明。具體染色步驟：①石蠟切片脫蠟和水化后，用PBS（PH7.4）沖洗3次，每次3min。②高溫高壓抗原修復(fù)。③3%H2O2室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS沖洗3次，每次3min，除去PBS液。④分別滴加CD10一抗工作液，室溫下孵育60min。⑤PBS沖洗3次，每次5min，除去PBS液，每張切片加1滴即用型 MaxVisionTM試劑，室溫下孵育15min。PBS沖洗3次，每次3min。⑥除去PBS液，每張切片加2滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察5 min。⑦自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，自來(lái)水沖洗返藍(lán)，梯度酒精脫水干燥，中性樹(shù)膠封固。用已知子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞CD10陽(yáng)性的組織切片做陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替-抗做陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷 CD10蛋白免疫染色陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色顆粒，在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上著色。染色結(jié)果判定：按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＞5%為陽(yáng)性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，各組之間率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CD10蛋白表達(dá)情況 在正常結(jié)腸黏膜組織和結(jié)直腸癌組織中，CD10蛋白陽(yáng)性率分別為0（0／50）和30.0%（24／80）。CD10蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性率與正常結(jié)腸黏膜組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 CD10蛋白的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系 結(jié)直腸癌組織中CD10蛋白表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與腫瘤細(xì)胞的分化程度、脈管侵犯、浸潤(rùn)深度、臨床分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 CD10蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

CD10是金屬蛋白酶家族中的一員，是一種細(xì)胞表面鋅依賴性金屬蛋白酶，相對(duì)分子量為100kD左右，在細(xì)胞膜上發(fā)揮生物學(xué)作用。CD10常常作為急性白血病和非霍奇金淋巴瘤分類中的診斷指標(biāo)之一［3］。CD10蛋白廣泛表達(dá)于人類多種細(xì)胞，如前淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、正常骨髓及子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞等。CD10蛋白結(jié)構(gòu)與MMP的間質(zhì)溶解素相似，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生可溶性因子誘導(dǎo)間質(zhì)細(xì)胞分泌CD10，來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖［4］。周春輝［5］等采用原位雜交技術(shù)和體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法研究CD10在胰腺癌中的表達(dá)，研究發(fā)現(xiàn)CD10mRNA表達(dá)與胰腺癌組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系，提示CD10在胰腺癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中有重要作用。白冬雨［6］等研究發(fā)現(xiàn)CD10在乳腺UDH及ADH肌上皮中呈中重度陽(yáng)性著色；在DCIS中呈輕中度陽(yáng)性著色，較ADH表達(dá)水平明顯降低；而在IDC中，癌巢周?chē)匆?jiàn)明顯的CD10著色，提示CD10對(duì)鑒別ADH和DCIS，DCIS和IDC具有一定意義，聯(lián)合運(yùn)用P63和calponin可以提高乳腺良惡性疾病的鑒別診斷。李守賓［7］等研究發(fā)現(xiàn)CD10在正常膀胱黏膜中不表達(dá)，在膀胱癌組織中高表達(dá)，而且在高級(jí)別、臨床分期晚及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中表達(dá)率明顯升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本實(shí)驗(yàn)研究對(duì)正常結(jié)腸黏膜組織及結(jié)直腸癌組織進(jìn)行CD10蛋白的檢測(cè)，結(jié)果顯示：在正常結(jié)腸黏膜組織中CD10蛋白不表達(dá)，在結(jié)直腸癌組織中存在CD10蛋白的高表達(dá)，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示CD10蛋白在結(jié)直腸癌間質(zhì)細(xì)胞的過(guò)度表達(dá)可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生有關(guān)。研究結(jié)果還顯示：結(jié)直腸癌中CD10蛋白的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位無(wú)關(guān)，而與腫瘤細(xì)胞的臨床分期、分化程度、浸潤(rùn)深度、脈管侵犯及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，隨著腫瘤細(xì)胞分化程度下降，CD10蛋白表達(dá)升高；已浸透漿膜組織中CD10蛋白陽(yáng)性率明顯高于未浸透漿膜者；有脈管侵犯病例CD10蛋白陽(yáng)性率明顯高于無(wú)脈管侵犯病例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例CD10蛋白陽(yáng)性率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。本研究提示結(jié)直腸癌組織中CD10蛋白陽(yáng)性可促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移，CD10蛋白可以作為結(jié)直腸癌患者預(yù)后的參考指標(biāo)。

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