■徐述亮 劉曉東 魏建軍 馬立周 孫作為

（山東和實集團，山東青島 266100）

發(fā)酵豆粕是利用現(xiàn)代生物工程發(fā)酵技術(shù)，以優(yōu)質(zhì)豆粕為主要原料，將大豆蛋白降解為小分子蛋白和小肽，并將抗原蛋白降解為抵抗原蛋白，同時在發(fā)酵過程中產(chǎn)生大量的有機酸、有益菌代謝產(chǎn)物等，因此發(fā)酵豆粕被認為是幼齡動物飼料的理想植物蛋白。但由于目前市場上各個發(fā)酵豆粕生產(chǎn)廠家使用的菌種、發(fā)酵工藝和烘干工藝均有所差異，因此市場上各個生產(chǎn)廠家的發(fā)酵豆粕的質(zhì)量也存在一定的差異。本試驗的目的是研究不同發(fā)酵豆粕在乳豬教槽料中飼喂的效果，為生產(chǎn)應用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

發(fā)酵豆粕A：日照東維飼料有限公司生產(chǎn)；發(fā)酵豆粕B：B公司生產(chǎn)；46%豆粕(對照組)：全部配合飼料均為粉料。

1.2 抗原蛋白電泳

對不同的發(fā)酵豆粕進行SDS-PAGE電泳方法[1，2-4]分析。

1.3 試驗設(shè)計

選擇胎次、體重相近、出生日齡一致、健康狀況良好的杜×長×大7日齡三元雜交仔豬72頭，公母各半。采用隨機分組設(shè)計，試驗包括3個處理(見表1)，即對照組、試驗A、B組，每個處理3個重復，每個重復8頭豬。試驗在山東省敬宗高繁種豬培育基地進行，試驗從2013年6月1號開始，于6月28號結(jié)束。

表1 試驗分組

1.4 試驗飼養(yǎng)管理

所有仔豬從7日齡開始誘食飼喂自配粉料，21日齡斷奶。按照飼養(yǎng)場的免疫程序進行免疫，飼養(yǎng)場地定期進行消毒，以確保飼養(yǎng)條件。試驗仔豬自由飲水，每天飼喂5次，從早上7:30到晚上9:30每3 h飼喂1次。

1.5 檢測指標及方法

每天記錄日采食量，在試驗的第0、14、28 d，每天早上7:00～9:00對試驗豬空腹稱重，統(tǒng)計每個重復耗料量；觀察仔豬腹瀉等健康狀況；試驗結(jié)束后每組隨機抽取3頭仔豬，采用頸靜脈放血的辦法處死采樣；對各組進行經(jīng)濟效益分析。

表2 試驗配方

1.5.1 平均日增重=（試驗末平均體重-初期平均體重）/試驗天數(shù)。

1.5.2 平均日采食量=（試驗末采食量-試驗初期采食量）/試驗天數(shù)。

1.5.3 料肉比=平均日采食量/平均日增重。

1.5.4腹瀉率（%）=（腹瀉頭數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（豬頭數(shù)×試驗天數(shù)）×100。

1.5.5 仔豬腸道系統(tǒng)的形態(tài)學觀察

仔豬剖殺均在剖殺日齡當日進行。剖殺前12 h停食，隨機從各處理組中選3頭，采用頸靜脈放血的辦法處死，打開腹腔，立即結(jié)扎賁門瓣、幽門瓣、直腸遠端，將消化道及消化腺取出，小心剝離開，小腸按解剖位置分成十二指腸、空腸、回腸三段。在十二指腸近端(5 cm處)、空腸中端、回腸近段分別用利剪連續(xù)取下近1 cm的腸管三段,迅速放入備用10%中性福爾馬林固定液中，搖勻，待做組織切片。24 h后將10%中性福爾馬林固定液中的標本經(jīng)水洗、透明、浸蠟、包埋等處理后，在室溫下切成4 μm的切片，蘇木精-伊紅染色[5]，封片。所用拍攝儀器為Lenovo-Motic BA210數(shù)碼互動成像設(shè)備，切片機為YD-1508R輪轉(zhuǎn)式(浙江金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠)。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)均以X±SD表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，多重比較采用Duncan's法。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗原蛋白電泳圖譜（見圖1）

圖1 不同發(fā)酵豆粕電泳圖譜

大豆抗原蛋白中組分為7S球蛋白（亞基分子量為76、72、53 kD）和11S球蛋白（亞基分子量為35～40、22 kD），圖1電泳結(jié)果顯示，3泳道中A組發(fā)酵豆粕11S在20～35 kD之間有一條明顯的條帶，但顏色較普通豆粕變淺，在45～116 kD之間基本無蛋白抗原殘余；4泳道中發(fā)酵豆粕B 11S在20～35 kD之間有兩條明顯的條帶，在45～116 kD之間有3條明顯的條帶,發(fā)酵豆粕B的11S和7S基本沒有降解。通過電泳試驗可以看出發(fā)酵豆粕A抗原蛋白降解的更徹底，但非零抗原蛋白。

2.2 發(fā)酵豆粕對仔豬生產(chǎn)性能的影響（見表3）

由表3可以看出：7、21日齡仔豬平均體重差異不顯著（P＞0.05），35日齡時，試驗A、B組仔豬平均體重明顯高于對照組，分別提高3.81%、2.65%，差異極顯著（P＜0.01），且試驗A組明顯高于試驗B組，提高了1.13%，差異顯著（P＜0.05）；7～21日齡3組仔豬平均日增重差異不顯著（P＞0.05），22～35日齡試驗A、B組平均日增重高于對照組，分別提高了12.32%、9.07%，差異極顯著（P＜0.01），且試驗A組明顯高于試驗B組，提高了2.99%，差異顯著（P＜0.05）；22～35日齡仔豬日均采食量試驗A組均高于對照組和試驗B組，分別提高了8.17%、1.58%，試驗A組與對照組相比差異顯著（P＜0.05），與試驗B組相比差異不顯著（P＞0.05），試驗B組與對照組相比差異顯著（P＜0.05），提高了6.49%；22～35日齡試驗A、B組仔豬料肉比均低于對照組，分別降低了3.79%（P＜0.01）、2.38%（P＜0.05），且試驗A組明顯低于試驗B組，降低了1.45%，差異顯著（P＜0.05）；22～35日齡仔豬腹瀉率試驗A、B組均低于對照組，分別降低了33.33%、18.07%。

表3 不同發(fā)酵豆粕對仔豬生產(chǎn)性能的影響

2.3 發(fā)酵豆粕對仔豬腸道形態(tài)的影響

在仔豬教槽料中使用普通豆粕（見圖2～圖13），發(fā)現(xiàn)仔豬十二指腸腸絨毛黏膜斷裂，腸黏膜結(jié)構(gòu)有不同程度的損傷，絨毛固有層內(nèi)有大量的紅細胞和嗜酸性粒細胞，黏膜肌肉層平滑肌腫脹（見圖2、圖5、圖8、圖11）。使用發(fā)酵豆粕B仔豬的腸黏膜上皮也出現(xiàn)細胞萎縮，結(jié)構(gòu)不完整，十二指腸腸絨毛黏附在一起，絨毛固有層內(nèi)有少量的紅細胞和嗜酸性粒細胞，淋巴細胞數(shù)增多，黏膜肌肉層平滑肌輕微腫脹（見圖4、圖7、圖10、圖13）。使用發(fā)酵豆粕A仔豬，小腸黏膜上皮細胞輪廓清晰，排列規(guī)則，結(jié)構(gòu)完整，黏膜肌肉層平滑肌肌纖維走向、細胞核清晰，絨毛固有層內(nèi)有少量嗜酸性粒細胞和紅細胞，淋巴細胞數(shù)增多（見圖3、圖6、圖9、圖12）。

圖2 飼喂普通豆粕組仔豬十二指腸絨毛固有層內(nèi)的結(jié)締組織結(jié)構(gòu)松散、斷裂，部分消失，有大量的紅細胞（×100）

圖3 飼喂發(fā)酵豆粕A組仔豬十二指腸絨毛固有層內(nèi)結(jié)締組織與表面的柱狀細胞連接緊密，能清晰看到中央乳糜管（×100）

圖4 飼喂發(fā)酵豆粕B組仔豬十二指腸絨毛內(nèi)中央乳糜管不清晰，絨毛固有層內(nèi)有大量的紅細胞（×100）

圖5 飼喂普通豆粕組仔豬十二指腸黏膜固有層內(nèi)有大量的嗜酸性粒細胞（×400）

圖6 飼喂發(fā)酵豆粕A組仔豬十二指腸絨毛固有層內(nèi)淋巴細胞增多，有少量嗜酸性粒細胞（×100）

圖7 飼喂發(fā)酵豆粕B組仔豬十二指腸絨毛固有層內(nèi)淋巴細胞增多；與發(fā)酵豆粕A組相比，嗜酸性粒細胞量增多（×100）

圖8 飼喂普通豆粕組仔豬小腸黏膜肌肉層嚴重水腫，肌纖維走向和細胞核不清晰（×100）

圖9 飼喂發(fā)酵豆粕A組仔豬小腸黏膜肌肉層肌纖維走向清晰，細胞核明顯（×100）

圖10 飼喂發(fā)酵豆粕B組仔豬小腸黏膜肌肉層肌纖維輕微水腫，細胞核不清晰（×100）

圖11 飼喂普通豆粕組仔豬十二指腸絨毛斷裂，絨毛內(nèi)杯狀細胞數(shù)量減少（×400）

圖12 飼喂發(fā)酵豆粕A組仔豬十二指腸絨毛結(jié)構(gòu)完整，有大量的杯狀細胞（×400）

圖13 飼喂發(fā)酵豆粕B組仔豬十二指腸絨毛斷裂，腸絨毛黏在一起，杯狀細胞數(shù)量減少（×400）

2.4 效益分析（見表4）

表4 經(jīng)濟效益分析

由表4可知，在仔豬斷奶后14 d的試驗期內(nèi)，試驗A組仔豬分別比對照組和試驗B組仔豬每頭多獲益3.76元和1.37元。

以600頭母豬場為例：35日齡年出欄豬=600×2.0×20=24 000頭，保育豬成活率為97%，即每年保育豬出欄為23 280頭，與對照組和試驗B組相比，試驗A組每年可多收入87 532元和31 894元。

3 討論分析

3.1 發(fā)酵豆粕對仔豬生長性能的影響

本次試驗結(jié)果表明，在仔豬教槽料中使用發(fā)酵豆粕可顯著提高斷奶仔豬的平均日增重和采食量，這與劉春雪等（2006）研究結(jié)果一致[6]。Kiers[7]等研究發(fā)現(xiàn)Rhizopussubtilis發(fā)酵豆粕飼喂仔豬能顯著提高仔豬的日增重和采食量。大豆蛋白經(jīng)發(fā)酵后，大分子的大豆蛋白被酶解成大量的小肽，這些小肽提高了機體蛋白質(zhì)的合成和飼料氨基酸的利用率，從而提高了斷奶仔豬的日增重。同時，豆粕經(jīng)微生物發(fā)酵后產(chǎn)生一定的乳酸，使得發(fā)酵豆粕具有特殊的香味，提高了飼料的適口性和仔豬的采食量。

由于試驗中仔豬21日齡進行斷奶，乳豬采食量都較少，營養(yǎng)基本上都來自母乳[8]，而試驗的母豬均較正常健康，使得母乳對乳豬的增重基本保持在同一水平上，所以21日齡前日增重差異不顯著。表明哺乳期的“補料”，不可能對斷奶應激期（斷奶后7 d左右）的生產(chǎn)性能構(gòu)成很大影響，斷奶應激期的成績能較真實反映本試驗料在斷奶應激期的飼養(yǎng)效果。

3.2 發(fā)酵豆粕可降低仔豬腹瀉率

由于豆粕經(jīng)發(fā)酵酶解處理后有效降低大豆蛋白中的抗營養(yǎng)因子，尤其是發(fā)酵酶解產(chǎn)生大量小分子多肽，有利于日糧蛋白質(zhì)的消化吸收而呈現(xiàn)出降低斷奶仔豬腹瀉率的良好效果。仔豬斷奶應激會導致腸道受損、消化功能紊亂、消化酶活性降低，導致蛋白質(zhì)不能很好的被消化吸收，繼而在大腸發(fā)生腐敗，產(chǎn)生的氨和胺類物質(zhì)對腸道黏膜有毒性作用，使腹瀉加重[9]。小肽特別是2～3肽，可被仔豬完整而有效地吸收，從而減少大腸后段氨氣和有毒胺類的產(chǎn)生。同時，能維持消化道正常的功能，降低腹瀉率[10]。此外，發(fā)酵豆粕A中的乳酸含量≥3.5%，還含有大量的有益菌代謝產(chǎn)物，可以認為斷奶仔豬腹瀉率的降低是豆粕經(jīng)特殊工藝發(fā)酵后形成的獨特品質(zhì)和多種有益生物代謝產(chǎn)物綜合作用的結(jié)果。

3.3 發(fā)酵豆粕對仔豬腸道形態(tài)的影響

小腸絨毛是仔豬消化吸收養(yǎng)分的主要部位，絨毛形態(tài)的變化可導致絨毛表面積的改變，影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。對照組仔豬小腸黏膜結(jié)構(gòu)不完整，絨毛斷裂，絨毛固有層內(nèi)出現(xiàn)大量嗜酸性粒細胞和紅細胞，黏膜肌肉層水腫。結(jié)果表明：普通豆粕中含有的大豆蛋白抗原能夠不同程度地破壞斷奶仔豬腸絨毛的形態(tài)結(jié)構(gòu)，從而導致了腸道吸收功能的障礙，使仔豬對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率降低，進而導致生產(chǎn)性能下降。

與飼喂發(fā)酵豆粕B組仔豬相比，飼喂發(fā)酵豆粕A組仔豬的腸黏膜上皮結(jié)構(gòu)更加完整，細胞輪廓更清晰，排列更規(guī)則，細胞間結(jié)合更加緊密，腸絨毛固有層內(nèi)嗜酸性粒細胞和紅細胞減少，黏膜肌肉層肌纖維和細胞核更清晰。這說明發(fā)酵豆粕A與發(fā)酵豆粕B相比，其抗原性更低，抗原蛋白降解的更徹底，這與抗原蛋白電泳結(jié)果相一致。在兩試驗組中，腸絨毛固有層中都出現(xiàn)嗜酸性粒細胞和紅細胞，這可能與配方中未完全使用發(fā)酵豆粕，其中還使用一部分普通豆粕有關(guān)，另外，與發(fā)酵豆粕A中抗原蛋白為抵抗原蛋白而非零抗原蛋白也有關(guān)。

由于不同生產(chǎn)廠家在豆粕的發(fā)酵過程中使用的菌種不同，菌種接種量不同、發(fā)酵、烘干的方式也不同，生產(chǎn)出來的發(fā)酵豆粕營養(yǎng)指標也不相同，特別是小肽和有益代謝產(chǎn)物（有機酸、乳酸菌素）的含量差異較大。因此不同廠家生產(chǎn)的發(fā)酵豆粕在仔豬教槽料中使用對仔豬生產(chǎn)性能的影響差異較大。

4 結(jié)論

在飼料中的應用研究發(fā)現(xiàn)，在仔豬教槽料中添加發(fā)酵豆粕能顯著提高仔豬的平均日增重，降低料肉比，減輕抗原蛋白對仔豬腸道絨毛和黏膜的損傷。但由于不同發(fā)酵豆粕發(fā)酵過程中使用的菌種、菌種接種量不同，發(fā)酵、烘干的方式也不同，生產(chǎn)出來的發(fā)酵豆粕營養(yǎng)指標也不相同，特別是小肽和有益代謝產(chǎn)物（有機酸、乳酸菌素）的含量差異較大。因此不同發(fā)酵豆粕在仔豬教槽料中使用對仔豬生產(chǎn)性能的影響差異較大。