曹 陽(yáng) 王艷杰 謝 鑫 田振國(guó)

（1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，沈陽(yáng)110032；2遼寧省肛腸醫(yī)院，沈陽(yáng)110001）

四神丸對(duì)結(jié)腸炎誘發(fā)的小鼠結(jié)腸癌CD133蛋白表達(dá)的影響

曹 陽(yáng)1王艷杰1謝 鑫1田振國(guó)2*

（1遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，沈陽(yáng)110032；2遼寧省肛腸醫(yī)院，沈陽(yáng)110001）

目的 觀察四神丸對(duì)結(jié)腸炎性病變后誘發(fā)結(jié)腸癌的化學(xué)預(yù)防作用和對(duì)CD133蛋白表達(dá)的影響。方法 80只ICR小鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、四神丸低劑量給藥組和四神丸高劑量給藥組四組。以40mg／kg 1，2-二甲肼（DMH）腹腔注射、20g／L右旋葡聚糖苷鈉（DSS）飲用水誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸癌。低劑量給藥組和高劑量給藥組分別給予0.2ml四神丸浸膏劑（生藥濃度分別為2g／ml、4g／ml），共21周后，觀察各組成瘤率和腫瘤數(shù)目，并通過(guò)免疫組化檢測(cè)結(jié)腸組織CD133蛋白表達(dá)。結(jié)果 與模型組相比，高、低劑量四神丸組可以明顯降低成瘤率和腫瘤數(shù)量。高、低劑量四神丸組CD133蛋白表達(dá)量小于模型組，并有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但高、低劑量組之間區(qū)別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 四神丸對(duì)小鼠結(jié)腸誘發(fā)的結(jié)腸癌有抑制作用；其原因可能與降低CD133蛋白表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞分化有關(guān)。

四神丸；結(jié)腸炎性病變后誘發(fā)結(jié)腸癌；化學(xué)預(yù)防；CD133蛋白表達(dá)

結(jié)腸炎誘發(fā)的結(jié)腸癌是結(jié)腸炎患者的重要死亡原因，化學(xué)預(yù)防是指在目標(biāo)人群中使用天然、合成或生化的藥物進(jìn)行干預(yù)治療從而預(yù)防、抑制和減緩腫瘤的發(fā)生與發(fā)展［1］。其是目前結(jié)腸癌防治研究的重點(diǎn)。目前，在結(jié)腸癌化學(xué)預(yù)防領(lǐng)域的藥物，有很多不盡如人意的地方，研究人員將目光投向了中醫(yī)中藥。四神丸作為治療泄瀉的經(jīng)典方劑，尤其對(duì)粘膜傷害較重的潰瘍性結(jié)腸炎具有很好的療效［2］，現(xiàn)代研究亦證明其主要成分如吳茱萸堿等對(duì)結(jié)腸癌具有一定的治療和抑制作用［3］。大部分學(xué)者認(rèn)為，CD133可作為結(jié)直腸癌肝細(xì)胞鑒定的特異標(biāo)記物，其與腫瘤細(xì)胞分化密切相關(guān)，CD133的過(guò)度表達(dá)使結(jié)腸炎患者發(fā)展成結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)提高。在此基礎(chǔ)上，我們對(duì)四神丸在結(jié)腸炎誘發(fā)的結(jié)腸癌化學(xué)預(yù)防中作用展開(kāi)研究。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物及分組取ICR小鼠80只，雌雄各半。隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組、模型組、四神丸低劑量組和四神丸高劑量組。

1.2試劑1，2-二甲肼（DMH），購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；右旋葡聚糖苷鈉（DSS），購(gòu)于美國(guó)ICN公司；CD133單克隆抗體和免疫組化試劑盒由北京鼎國(guó)公司提供；四神丸由由肉豆蔻、補(bǔ)骨脂、五味子、吳茱萸、生姜、大棗六位藥組成，全部購(gòu)買(mǎi)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房，嚴(yán)格按照原方組方、配比、劑量，經(jīng)煎煮、回流、再打粉備用。使用時(shí)加入煉蜜制成浸膏劑，生藥濃度2g／ml和4g／ml。

2 方法

2.1動(dòng)物給藥及模型復(fù)制除正常對(duì)照組外，其余各組給予含20g／L右旋葡聚糖苷鈉（DSS）的飲用水，一周后按照40 mg／kg1，2-二甲肼（DMH）的標(biāo)準(zhǔn)給予小鼠腹腔注射含1，2-二甲肼（DMH）的生理鹽水，隔天一次，共三次，兩周后停止飲用DSS飲用水。低劑量和高劑量四神丸組從第四周開(kāi)始，每天給予灌胃0.2ml（其中，低劑量組生藥含量2g／ml，高劑量組4g／ml）四神丸浸膏，直到處死。

1.3指標(biāo)評(píng)價(jià)21周后，從肛門(mén)向上截取結(jié)腸8cm，觀察形成腫瘤數(shù)目。切片脫蠟至水，3%過(guò)氧化氫甲醇阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，封閉30分鐘，加一抗4℃過(guò)夜，PBS漂洗后加二抗，加SABC，每一步驟后都加PBS漂洗三次，最后加DAB顯色劑。顯微鏡下觀察，出現(xiàn)棕黃色顆粒即為陽(yáng)性，拍照后通過(guò)軟件計(jì)算光密度值。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件處理，結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較使用F檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1四神丸對(duì)成瘤率和腫瘤數(shù)目的影響經(jīng)過(guò)21周，模型組小鼠在結(jié)腸炎的基礎(chǔ)上大多形成了結(jié)腸癌，成瘤率是85%，且腫瘤數(shù)目不止一個(gè)，小腸和其他器官未見(jiàn)腫瘤發(fā)生，而使用了四神丸進(jìn)行干預(yù)的小鼠成癌率明顯偏低，切成瘤率較小，與模型組區(qū)別明顯（表1）。

表1 四神丸對(duì)成瘤率影響（%）

2.2四神丸對(duì)CD133蛋白表達(dá)的影響各組經(jīng)免疫組化SABC法處理后，出現(xiàn)棕黃色顆粒即為陽(yáng)性，從圖1中可以看出正常對(duì)照組小鼠結(jié)腸組織CD133蛋白幾乎沒(méi)有表達(dá)，而模型組則可見(jiàn)大量的棕黃色顆粒，低劑量四神丸組和高劑量四神丸組則明顯少于模型組。

圖1 各組結(jié)腸組織CD133蛋白免疫組化染色情況

鏡下分析高、低劑量四神丸組均小于模型組光密度值，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），但高、低劑量四神丸組見(jiàn)表光密度值之間雖有差異，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），如表2。

表2 各組結(jié)腸組織CD133蛋白免疫組化光密度值比較

3 討論

根據(jù)中醫(yī)“治未病”思想和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)化學(xué)預(yù)防的理論，我們?cè)诒緦?shí)驗(yàn)中對(duì)四神丸對(duì)小鼠結(jié)腸炎誘發(fā)的結(jié)腸癌化學(xué)預(yù)防作用展開(kāi)了研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明四神丸降低可成瘤率和腫瘤數(shù)目，說(shuō)明四神丸能夠明顯抑制DMH+ DSS誘導(dǎo)小鼠由結(jié)腸炎向結(jié)腸癌轉(zhuǎn)變。

目前，大部分學(xué)者認(rèn)為，CD133可作為結(jié)直腸癌肝細(xì)胞鑒定的特異標(biāo)記物，CD133的過(guò)度表達(dá)使結(jié)腸炎患者發(fā)展成結(jié)腸癌的風(fēng)險(xiǎn)提高。Ricci-Vitiani等［4］將CD133+細(xì)胞注射到免疫缺陷小鼠身上，可迅速?gòu)?fù)制出原腫瘤細(xì)胞，CD133-細(xì)胞在同等條件下卻不能形成腫瘤。我們發(fā)現(xiàn)四神丸可以降低組織中CD133蛋白的表達(dá)，進(jìn)而影響細(xì)胞分化，還需進(jìn)一步研究。相信有中醫(yī)藥的參與，癌癥的化學(xué)預(yù)防一定會(huì)迎來(lái)春天。

［1］Velayos FS，Liu L，Lewis JD，et al.PPrevalence of colorectal cancer surveillance for ulcerative colitis in an integrated health care delivery system［J］.Gastroenterology，2010，139：1511-1518.

［2］劉端勇，管詠梅，趙海梅，等.四神丸不同途徑給藥對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞周期及脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的改善作用［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（5）：1168-1171.

［3］張醇，楊雪，范霞等.吳茱萸堿對(duì)人結(jié)腸癌lovo細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2010，23（8）：866-870.

［4］Ricci-Vitian L，Lombardi DG，Pilozzi E，et al.Identication and expansion of human colon-center-initiating cells［J］.Nature 2007，445（7123）：111-115.

檉柳——發(fā)散痧疹之王

【歌訣】

發(fā)散痧疹檉柳王，

辛平發(fā)汗透疹暢，

祛風(fēng)除濕止痛癢，

熏洗擦摩沐浴湯。

【釋義】 中藥用于治療痧疹外出不暢首選檉柳。檉柳味辛性平，最善發(fā)汗而透痧疹。又因其辛散，功善祛風(fēng)除濕，能治風(fēng)濕痹痛，肢節(jié)疼痛。臨床上常用其煮水外洗肌膚治療痧疹以及外洗關(guān)節(jié)治療關(guān)節(jié)痹痛。

【藥解】 檉柳為檉柳科植物檉柳Tamarix chinensis Lour.的嫩枝葉。

性味歸經(jīng)：辛，平。歸肺、胃、心經(jīng)。

功效：發(fā)表透疹，祛風(fēng)除濕。

主治：①用于麻疹不透，風(fēng)疹瘙癢。②用于風(fēng)濕痹痛。

用法用量：煎服，9～15g?；蛉胪?、散。

各家論述：

1.《本草備要》：“治痧疹不出，喘嗽悶亂?！?/p>

2.《本經(jīng)逢原》：“去風(fēng)。煎湯浴風(fēng)疹身癢效。”

【常用藥類(lèi)】 胡荽性溫，發(fā)表之力強(qiáng)，但其透疹之力不及檉柳，其還兼能開(kāi)胃消食；升麻性涼，長(zhǎng)于疏散風(fēng)熱而發(fā)表透疹，其還能升陽(yáng)舉陷；葛根長(zhǎng)于解太陽(yáng)經(jīng)之風(fēng)熱，頭項(xiàng)強(qiáng)痛，功善解肌而透疹；檉柳性平，透麻疹之力不及升麻與葛根，但其最善于透痧疹，且還能祛風(fēng)除濕。

【臨證應(yīng)用】 檉柳辛散發(fā)表，用于麻疹初起，疹出不暢，或表邪外束，疹毒內(nèi)陷，常與牛蒡子、蟬蛻、竹葉等透疹藥同用，如竹葉柳蒡湯。亦可用此一味，煎湯外洗。治療風(fēng)濕痹痛時(shí)，檉柳常與祛風(fēng)濕藥秦艽、羌活、獨(dú)活等藥同用。

——摘編自人民軍醫(yī)出版社《臨證藥王歌訣》

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.08.099

1672-2779（2013）-08-0145-02

韓世輝

2013-03-24）

*通訊作者