王謙，劉敏，李淑萍，蘇巖

（河北大學(xué) 生物技術(shù)研究中心，河北 保定 071002）

毛頭鬼傘 （Coprinuscomatus）俗稱雞腿菇，又名雞腿蘑、刺蘑菇［1－2］，屬真菌門，擔(dān)子菌亞門，層菌綱，傘菌目，鬼傘科，鬼傘屬［3］.毛頭鬼傘子實體蛋白含量高，營養(yǎng)豐富，而且其菌絲體活性成分具有抗腫瘤、提高機體免疫力和降血脂等多種功效［4－5］.近年來，大量研究表明，礦質(zhì)元素和外源激素能夠一定程度地影響食用菌菌絲體的生長.李林輝［6］的研究結(jié)果表明，補充適量的礦質(zhì)元素能夠促進(jìn)雞腿菇菌絲生長.外源激素因其可以提高農(nóng)作物的產(chǎn)量和抗逆性早已被廣泛地應(yīng)用于農(nóng)業(yè).有關(guān)外源激素對食用菌菌絲體生長影響的研究本課題組已經(jīng)開展了很多年，研究結(jié)果表明：外源激素對食用菌如金福菇、大白樁菇等菌絲體的生長具有較為明顯的促進(jìn)作用［7－8］.但是外源激素應(yīng)用到食用菌液體培養(yǎng)上的研究報道還很少.近年來，對于毛頭鬼傘液體培養(yǎng)方面的研究越來越多，液體菌種已被廣泛用于毛頭鬼傘的栽培中，為此，本課題組對外源激素對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響進(jìn)行了研究，探討有利于提高毛頭鬼傘液體菌種培養(yǎng)效率的幾種激素的適宜添加質(zhì)量濃度，以提高其生物量.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌種

毛頭鬼傘菌種為河北大學(xué)食藥用真菌研究所保藏菌種.

1.1.2 主要試劑

吲哚乙酸（IAA），赤霉素（GA），三十烷醇，2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D），萘乙酸（NAA）.

1.1.3 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1 000mL.

一級液體搖瓶培養(yǎng)基：馬鈴薯150g、葡萄糖20g、麩皮5g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、酵母粉2.5g、維生素B11.5mg、水1 000mL.

二級液體搖瓶培養(yǎng)基：馬鈴薯150g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、酵母粉2.5g、水1 000mL，加不同種類不同質(zhì)量濃度的外源激素.

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)方法

將毛頭鬼傘斜面菌種接種到裝液量為100mL的250mL三角瓶中，25℃，160r／min恒溫振蕩培養(yǎng)120h，制得一級液體菌種，備用.

1.2.2 實驗方法

將IAA，GA，三十烷醇3種激素分別設(shè)置0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mg／L的質(zhì)量濃度梯度，將2，4－D，NAA 2種激素分別設(shè)置0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mg／L的質(zhì)量濃度梯度，添加到二級液體培養(yǎng)基中，然后以10%的接種量將一級液體菌種接入100mL的二級搖瓶培養(yǎng)基中（三角瓶規(guī)格為250mL），25℃，160r／min振蕩培養(yǎng)120h.培養(yǎng)結(jié)束后，直接測定菌絲體鮮質(zhì)量.以菌絲體鮮質(zhì)量為主要依據(jù)篩選出適于毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的激素種類及其質(zhì)量濃度［7－8］.菌絲體鮮質(zhì)量測定按照本研究所以往方法進(jìn)行，可以實時檢測發(fā)酵動態(tài)，是較干質(zhì)量測定更為實用的快速測定方法［9］.

2 結(jié)果與分析

不同質(zhì)量濃度的IAA對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見表1和圖1.結(jié)果表明：IAA的加入對毛頭鬼傘菌絲的生長有促進(jìn)作用，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.5mg／L時，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，為35.96g，菌球數(shù)量也最高.菌絲體鮮質(zhì)量提高了15.85%，因此IAA使用時適宜的質(zhì)量濃度為0.5mg／L.

不同質(zhì)量濃度的GA對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見表2和圖2.結(jié)果表明：GA對毛頭鬼傘菌絲的生長促進(jìn)作用很明顯，當(dāng)質(zhì)量濃度為1.5mg／L時，不論菌絲體鮮質(zhì)量還是菌球數(shù)量都達(dá)到最高，菌絲體鮮質(zhì)量為42.59g，較不添加時提高了37.21%，且與其他質(zhì)量濃度存在極顯著性差異，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來越小，因此GA使用時適宜的質(zhì)量濃度為1.5mg／L.

表1 不同質(zhì)量濃度IAA對毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.1 Multiple comparison of different mass concentration IAA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

圖1 不同質(zhì)量濃度的IAA對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.1 Effect of different mass concentration IAA on Coprinuscomatus in liquid culture

圖2 不同質(zhì)量濃度的GA對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.2 Effect of different mass concentration GA on Coprinuscomatus in liquid culture

表2 不同質(zhì)量濃度GA對毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.2 Multiple comparison of different mass concentration GA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

不同質(zhì)量濃度的三十烷醇對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見表3和圖3.結(jié)果表明：當(dāng)三十烷醇質(zhì)量濃度為0.5mg／L時，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，為39.35g，較不添加時提高了26.77%，且與其他質(zhì)量濃度存在顯著性差異，菌球數(shù)量也最高，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來越小.因此，三十烷醇使用時適宜的質(zhì)量濃度為0.5mg／L.

不同質(zhì)量濃度的2，4－D對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見表4和圖4.結(jié)果表明：2，4－D的質(zhì)量濃度在0～0.8mg／L時，隨著質(zhì)量濃度的提高菌絲生長加快，質(zhì)量濃度為0.8mg／L時，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，菌球數(shù)量也高，但與質(zhì)量濃度為0.6mg／L時差異不顯著，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來越小，并且當(dāng)超過1mg／L時，菌絲體鮮質(zhì)量反而比添加激素前低.當(dāng)2，4－D質(zhì)量濃度為0.6mg／L時，菌絲體鮮質(zhì)量提高了7.73%.因此2，4－D使用時適宜的質(zhì)量濃度為0.6mg／L.

表3 不同質(zhì)量濃度三十烷醇對毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.3 Multiple comparison of different mass concentration triacontanol on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

圖3 不同質(zhì)量濃度的三十烷醇對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.3 Effect of different mass concentration triacontanol on Coprinuscomatus in liquid culture

圖4 不同質(zhì)量濃度的2，4－D對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.4 Effect of different mass concentration 2，4－D on Coprinuscomatus in liquid culture

表4 不同質(zhì)量濃度2，4－D對毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.4 Multiple comparison of different mass concentration 2，4－D on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

不同質(zhì)量濃度的NAA對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響見表5和圖5.結(jié)果表明：隨著NAA質(zhì)量濃度的增大，對毛頭鬼傘菌絲的生長促進(jìn)作用明顯，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.4mg／L時，菌絲體鮮質(zhì)量達(dá)到最高，為41.92g，較不添加時提高了35.05%，且與其他質(zhì)量濃度存在顯著性差異，菌球數(shù)量也最高，其后隨著質(zhì)量濃度的增大，促進(jìn)作用越來越小.因此，NAA使用時適宜的質(zhì)量濃度為0.4mg／L.

表5 不同質(zhì)量濃度NAA對毛頭鬼傘菌絲體鮮質(zhì)量影響的多重比較Tab.5 Multiple comparison of different mass concentration NAA on the mycelial biomass of Coprinuscomatus

圖5 不同質(zhì)量濃度的NAA對毛頭鬼傘液體培養(yǎng)的影響Fig.5 Effect of different mass concentration NAA on Coprinuscomatus in liquid culture

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明：在液體培養(yǎng)基中分別添加IAA，GA，三十烷醇，2，4－D，NAA，其對毛頭鬼傘菌絲體的生長有不同程度的影響.當(dāng)液體培養(yǎng)基中IAA，GA，三十烷醇，2，4－D，NAA 的質(zhì)量濃度分別為0.5，1.5，0.5，0.6，0.4mg／L時，菌絲體生物量最大.在5種激素中，當(dāng)GA的質(zhì)量濃度為1.5mg／L時，菌絲體鮮質(zhì)量最大，增幅最大，為37.21%，其次是NAA、三十烷醇.

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