張 慧 裴志東姜 歡 欒 陽(yáng)

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600

精制冠心滴丸定性定量方法的研究

張 慧 裴志東*姜 歡 欒 陽(yáng)

遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600

目的：建立精制冠心滴丸的定性定量方法。方法：采用TLC法對(duì)方中丹參進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)采用HPLC法測(cè)定制劑中芍藥苷的含量。色譜柱為Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為0.1%磷酸溶液：乙腈（87：13），檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，柱溫30℃。結(jié)果：定性鑒別薄層色譜特征明顯；HPLC測(cè)定質(zhì)量濃度在0.3648～0.8512μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9995），平均回收率為99.74%，RSD 1.53%（n＝6）。結(jié)論：所建質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于制劑的質(zhì)量控制。

精制冠心滴丸；薄層色譜；高效液相色譜；芍藥苷

精制冠心滴丸是由丹參、赤芍、川芎、紅花、降香5味中藥組成。具有活血化瘀等功效。用于瘀血內(nèi)停所致的胸痹，癥見(jiàn)胸悶、心前區(qū)刺痛，冠心病見(jiàn)上述證候者。本品是在其片劑的基礎(chǔ)上改變劑型制成滴丸劑，為控制制劑的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對(duì)原有片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了提高，建立了丹參的TLC定性方法及芍藥苷的HPLC定量方法，現(xiàn)分述如下：

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀；AS3120A超聲波清洗器；薄層層析硅膠G（中國(guó)青島海洋化工集團(tuán)公司出品）；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)110736－201035）、丹參酮ⅡA（批號(hào)110752－200511）、丹參對(duì)照藥材（批號(hào)120923－200610），均為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；精制冠心滴丸自制；甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參的薄層鑒別 取本品粉末2.0g，加乙醚5mL，超聲處理5min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對(duì)照藥材粉末1.0g，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取丹參酮IIA對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取除去丹參外的其它藥材，按滴丸制備工藝及供試品制備方法制成丹參陰性液。照《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VIB薄層色譜法試驗(yàn)［1］，吸取上述4種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯（6：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中。在與對(duì)照藥材相應(yīng)位置顯相同顏色斑點(diǎn)，在與對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同暗紅色斑點(diǎn)，陰性液無(wú)干擾。

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent TC－C18 C18（200× 4.6mm，5um）；流動(dòng)相為0.1%磷酸溶液∶乙腈（87∶13）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流速：1.0ml/min。柱溫：30℃；進(jìn)樣量10μL。

2.2.2 溶液的制備 取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再精密稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，制成供試品溶液。精密稱取芍藥苷對(duì)照品6mg，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，再精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成對(duì)照品溶液。取除去赤芍后處方中其它藥材，照上述供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.3 專屬性試驗(yàn) 取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，分別注入液相色譜儀，繪制液相色譜圖，由色譜圖提示，在對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性液在此峰位無(wú)吸收，表明測(cè)定芍藥苷的含量無(wú)干擾，方法專屬性良好。見(jiàn)圖1。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密量取芍藥苷對(duì)照品溶液（0.608g ·L）0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，回歸方程為：Y＝49504.91X＋887226.34，相關(guān)系數(shù)為r＝0.9990。結(jié)果芍藥苷進(jìn)樣量在0.3648～0.8512μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取本品粉末約0.5g，精密稱定，制備供試液，精密量取同一供試液，分別在0、3、6、9、12小時(shí)間隔，測(cè)定色譜峰面積。結(jié)果提示，供試液制備后12小時(shí)內(nèi)測(cè)定，色譜峰面積無(wú)明顯變化，RSD為1.63%，在此時(shí)間內(nèi)，待測(cè)組分化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.2.6 中間精密度試驗(yàn) 取本品粉末0.5g，共計(jì)6份，分別由三個(gè)實(shí)驗(yàn)人員，分別在不同日期、不同儀器上進(jìn)樣10μL，測(cè)定樣品色譜峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果顯示，中間精密度的RSD為1.93%，符合規(guī)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品粉末0.5g，共計(jì)6份，制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，考察重復(fù)性。結(jié)果顯示，重復(fù)性的RSD為0.74%，符合規(guī)定。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別取已知含量（2.655mg·g）的供試品溶液0.25 g共計(jì)6份，分別置25mL容量瓶中，分別加入對(duì)照品溶液（0.608mg/ml）1.25mL，按“2.2.2供試品溶液的制備方法”制備，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示：本方法回收率在98.72%～101.50%之間，符合有關(guān)規(guī)定。

2.2.9 樣品含量測(cè)定 取三批精制冠心滴丸，研細(xì)，按“2.2.2溶液的制備”方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，并分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定芍藥苷的峰面積。按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果三批樣品的含量分別是2.922、2.846、2.862mg·g。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1 在薄層鑒別中，曾參考《中國(guó)藥典》2010年版一部［1］，對(duì)方中降香、紅花進(jìn)行TCL法鑒別，結(jié)果存在陰性干擾問(wèn)題，因此未建立降香、紅花的TLC鑒別方法。

3.2 在含量測(cè)定中，曾采用流動(dòng)相乙腈－水－磷酸（14∶86∶0.1）［2］、0.1%磷酸溶液：乙腈（80：20）、0.05 mol/L磷酸二氫鉀∶甲醇（60∶40）［3］，結(jié)果分離效果欠佳，因此選擇本文中流動(dòng)相。

3.3 對(duì)含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行了考察。取芍藥苷對(duì)照品加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，在200－400nm的紫外波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描。結(jié)果顯示，對(duì)照品在230nm下有最大吸收，為此本品的含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)確定為230nm。

［1］中國(guó)藥典.一部［S］.2010：213；141.

［2］黃道秋，賀鋼民，李柏群，等.芩術(shù)四物湯中黃芩苷和芍藥苷的含量測(cè)定［J］.成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35（3）：45－47.

［3］謝清春，呂竹芬，陳燕忠，等.補(bǔ)肺活血膠囊中芍藥苷的含量測(cè)定［J］.2012，35（8）：1335－1336.

表1 加樣回收試驗(yàn)測(cè)量結(jié)果（n＝6）

2.9 樣品測(cè)定 按供試液的制備及檢測(cè)方法，測(cè)定3批清感穿心蓮軟膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯含量（mg/粒）分別為1.46、1.37、1.52。

3 討論

3.1 對(duì)脫水穿心蓮內(nèi)酯對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果其在254nm處有最大吸收，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。參照文獻(xiàn)［1，2］脫水穿心蓮內(nèi)酯含量測(cè)定方法，以甲醇－水為流動(dòng)相，考察多個(gè)比例，最后確定甲醇－水（62∶38）的比例較為適合。

3.2 采用超聲處理30min、加熱回流1h、索氏提取2h進(jìn)行提取方法考察，結(jié)果三者提取結(jié)果相差不大，但超聲處理更簡(jiǎn)便、快捷，故采用超聲處理法。采用甲醇、50%甲醇、無(wú)水乙醇作提取溶劑進(jìn)行考察，用甲醇提取所得含量比高，且雜質(zhì)較少，故采用甲醇作為提取溶劑。以超聲處理15min、30min、45min，進(jìn)行提取時(shí)間考察，超聲處理15min，測(cè)得結(jié)果較低，超聲處理30min、45min，兩者無(wú)明顯差別，故超聲處理時(shí)間定為30min。

參考文獻(xiàn)

［1］張靜，琚小龍，李治坤.HPLC法測(cè)定穿心蓮軟膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2003，7（6）：453－454.

［2］田軍，陸宇.HPLC測(cè)定消炎利膽軟膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量［J］.中成藥，2006，28（3）：451－452.

（收稿日期：2013.01.26）

Study on the Quality and Quantity Methods of Jingzhi Ganxin Dripping Pills

ZHANG Hui，PEI Zhi-dong，JIANG Huan，LUAN Yang
（The Liaoning Universitiy of Chinese Traditional Medicine，Dalian 116600，China）

Objective：To establish the methods for the quantification and quantitation of Jingzhi Ganxin dripping pills.Method：Salviae Miltiorrhizae radix was identified by TLC.The content of paeoniflorin was determined by HPLC.HPLC method was performed on a Agilent TC－C18（4.6mm×250mm，5μm）column with a mobile phase of 0.1%phosphoric acid solution－acetonitrile（87：13）.The wavelength of detector was 230 nm and the column temperature was set at 30℃.Result：Characteristics of identification were very obviously.The linear range of paeoniflorin was 0.3648～0.8512μg（r＝0.9995）with an average recovery of 99.74%（RSD1.53%，n＝6）.Conclusion：The method can be used for the quality and quantity control of Jingzhi Ganxin dripping pills.

Jingzhi Ganxin dripping pills；TLC；HPLC；Paeoniflorin

R284.1

A

1007－8517（2013）06－0019－02

2013.02.05）

張慧（1970－），女（漢族），吉林通化人，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，博士/博士后，研究方向：中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)。