楊素娟，趙志明，郝桂敏，尹桂然

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，河北石家莊050000；2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北石家莊050000）

·論 著·

原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者免疫治療前后血清中趨化因子水平變化

楊素娟1，趙志明1，郝桂敏1，尹桂然2

（1.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，河北石家莊050000；2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，河北石家莊050000）

目的研究主動(dòng)免疫治療前后血清中單核細(xì)胞趨化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）、正常T細(xì)胞活化后所表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)蛋白（regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted，RANTES）和白細(xì)胞介素8（interlukin-8，IL-8）水平變化，探討其在原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）發(fā)病中的作用。方法2011年4月—2012年5月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科就診的URSA患者40例為研究組，正常非孕及正常妊娠組各20例為對(duì)照組。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)免疫治療前后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平。結(jié)果URSA患者治療前血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平均明顯低于正常非孕組與正常妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而正常非孕組與正常妊娠組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。URSA患者免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平明顯上升，與免疫治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。40例URSA患者根據(jù)免疫治療后是否持續(xù)妊娠分為持續(xù)妊娠組27例和非持續(xù)妊娠組13例。持續(xù)妊娠組免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增長(zhǎng)率明顯高于非持續(xù)妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論主動(dòng)免疫治療可提高URSA患者血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平，在持續(xù)妊娠組升高明顯，尤其是RANTES具有封閉抗體效應(yīng)，更有利于妊娠的持續(xù)發(fā)展。

流產(chǎn)，習(xí)慣性；趨化因子類(lèi)；免疫；治療

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)。其發(fā)病原因復(fù)雜多樣，有遺傳、內(nèi)分泌、解剖、感染等方面的原因，總體的發(fā)生率約為5％。原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）是指患者發(fā)病原因不明，占40％～60％［1］。研究發(fā)現(xiàn)，URSA與同種免疫有關(guān)，學(xué)者們?cè)谠擃I(lǐng)域做了許多研究，但確切的機(jī)制尚待闡明。為探討趨化因子導(dǎo)致流產(chǎn)的可能機(jī)制，本研究報(bào)告40例URSA患者免疫治療前后的血清中正常T細(xì)胞活化后所表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)蛋白（regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted，RANTES）、白細(xì)胞介素8（interleukin-8，IL-8）和單核細(xì)胞趨化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）水平的變化。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象：URSA組為2011年4月—2012年5月在河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院就診的URSA患者40例，年齡23～35歲，平均26.9歲。自然流產(chǎn)均≥2次，排除染色體、解剖、內(nèi)分泌異常，無(wú)生殖道感染，男方精子無(wú)異常，也無(wú)自身免疫性疾病。所有病例均接受主動(dòng)免疫治療［1-2］。根據(jù)妊娠結(jié)局，即是否持續(xù)妊娠，分為持續(xù)妊娠組（27例）和非持續(xù)妊娠組（13例）。正常非孕組為20例同期門(mén)診要求放置宮

內(nèi)節(jié)育器婦女，年齡23～36歲，平均27.6歲。既往均有妊娠史，但無(wú)自然流產(chǎn)、死胎或死產(chǎn)史等。正常妊娠組為20例同期門(mén)診因孕40～49d要求人工流產(chǎn)的正常妊娠婦女，年齡22～34歲，平均27.9歲，既往無(wú)不良孕育史及上述疾病史，人工流產(chǎn)前無(wú)流產(chǎn)先兆。

1.2 方法：抽取研究對(duì)象空腹肘靜脈血3mL，置無(wú)菌試管室溫下待其自然凝固，2 000r/min離心10min，分離血清后置-70℃冰箱待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平。測(cè)定過(guò)程中嚴(yán)格按試劑盒（RB美國(guó)）說(shuō)明書(shū)操作，且為一次檢測(cè)，以減少批間誤差和操作誤差。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以±s表示，分別采用方差分析和t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 URSA患者主動(dòng)免疫治療前與正常非孕組、正常妊娠組血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平的比較：URSA患者主動(dòng)免疫治療前血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平明顯低于正常非孕組和正常妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而正常非孕組與正常妊娠組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 URSA患者主動(dòng)免疫治療前后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平的比較：URSA患者主動(dòng)免疫治療后血清中3種趨化因子水平均明顯上升，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1 免疫治療前血清中3種趨化因子濃度比較Table 1 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in serum before immunotherapy（±s，ng/L）

表1 免疫治療前血清中3種趨化因子濃度比較Table 1 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in serum before immunotherapy（±s，ng/L）

*P＜0.05 vs URSA group by q testURSA：unexplained recurrent spontaneous abortion；MCP-1：monocyte chemotactic protein-1；RANTES：regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted；IL-8：interleukin-8

MCP-1 RANTES IL-8 URSA 40 130.771±133.351 228.379±187.936 351 Groups n .927±274.142 Non-pregnant 20 285.888±224.458*534.138±341.035*566.220±374.232*Pregnancy 20 232.418±183.086*416.043±408.000*539.745±340.786*

表2 URSA患者免疫治療前后血清中3種趨化因子水平比較Table 2 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in URSA patients before and after immunotherapy（n=40，±s，ng/L）

表2 URSA患者免疫治療前后血清中3種趨化因子水平比較Table 2 The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in URSA patients before and after immunotherapy（n=40，±s，ng/L）

MCP-1：monocyte chemotactic protein-1；RANTES：regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted；IL-8：interleukin-8

Time MCP-1 RANTES IL-8 Before immunotherapy 130.771±133.351 228.379±187.936 351.927±274.142 After immunotherapy 287.276±199.793 425.429±270.616 525.107±269.259 t＜0.05＜0.05＜0.05 4.121 3.782 2.850 P

2.3 持續(xù)妊娠組與非持續(xù)妊娠組主動(dòng)免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增長(zhǎng)率的比較：持續(xù)妊娠組主動(dòng)免疫治療后血清中MCP-1、RANTES、IL-8水平增長(zhǎng)率均較非持續(xù)妊娠組明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 持續(xù)妊娠組與非持續(xù)妊娠組主動(dòng)免疫治療后血清中3種趨化因子增長(zhǎng)率的比較Table 3 Com parison of grow th rates of MCP-1，RANTES，IL-8 levels after immunotherapy between ongoing pregnancy group and non ongoing pregnant group（％）

3 討 論

妊娠成功對(duì)于生殖免疫來(lái)說(shuō)，是一種半同種移植。妊娠失敗、流產(chǎn)的常見(jiàn)原因有染色體、解剖、內(nèi)分泌異常等，此外還存在同種免疫型復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，是一種同種免疫現(xiàn)象，屬于免疫排斥［3］。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，1次流產(chǎn)后再次流產(chǎn)的發(fā)生率為17％，2次流產(chǎn)后再次流產(chǎn)率為24％，3次流產(chǎn)后再次流產(chǎn)率為40％～50％［3］。對(duì)于胚胎染色體檢查正常，而找不到病因的流產(chǎn)患者來(lái)說(shuō)，隨著流產(chǎn)次數(shù)的增加，其發(fā)生的比例亦增加［4］。

3.1 正常妊娠與趨化因子的關(guān)系：母體免疫在正常妊娠時(shí)，可能傾向輔助T淋巴細(xì)胞（Th）2型免疫應(yīng)答而偏離Th1型細(xì)胞免疫，即向著Th2方向傾斜，以體液免疫為主。細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞在各期胎盤(pán)階段均可分泌Th1型細(xì)胞因子IL-8、IL-10。IL-8參與胚胎植入的調(diào)控，促進(jìn)宮頸成熟，還可加重宮內(nèi)感染。

RANTES與相應(yīng)的受體結(jié)合后主要是特異性趨化T細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞，并能殺傷T細(xì)胞的活性，還參與宮頸成熟與分娩發(fā)動(dòng)機(jī)制。最近研究［5］發(fā)現(xiàn)，RANTES水平低下時(shí)可導(dǎo)致流產(chǎn)，其原理是胎兒被當(dāng)作異物被母體免疫系統(tǒng)排斥，因而RANTES具有封閉抗體效應(yīng)，對(duì)成功妊娠起著重要作用。

在母體激素分泌調(diào)控下，MCP-1可與其受體相結(jié)合，在胚胎植入子宮內(nèi)膜的整個(gè)過(guò)程中起著重要的作用［6］。妊娠早期滋養(yǎng)葉細(xì)胞即產(chǎn)生少量的MCP-1，妊娠中、晚期則產(chǎn)生較多的MCP-1，參與宮頸成熟與分娩發(fā)動(dòng)機(jī)制。

本研究在免疫治療前檢測(cè)URSA組、正常非孕組、正常妊娠組患者血清中的RANTES、IL-8、MCP-1濃度。結(jié)果表明，URSA組3種趨化因子濃度明顯低于正常非孕組和正常妊娠組，而正常非孕組與正常妊娠組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明3種趨化因子濃度對(duì)胚胎植入的調(diào)控可能起著重要作用。

3.2 URSA與趨化因子的關(guān)系：鑒于上述血清中3種趨化因子在正常妊娠全過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用。倘若趨化因子的濃度發(fā)生變化，將對(duì)胚胎植入產(chǎn)生不利影響而致流產(chǎn)。研究［7］表明，與對(duì)照組比較，URSA組Th1型細(xì)胞因子水平升高，而Th2型細(xì)胞因子水平降低；URSA患者血清中白細(xì)胞介素10水平明顯降低，打破了Th1型與Th2型細(xì)胞因子的平衡關(guān)系，不能抑制Th1型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而向Th1型細(xì)胞因子方向傾斜，最終導(dǎo)致流產(chǎn)。

若患者對(duì)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixed leukocytes reaction，MLR）反應(yīng)過(guò)強(qiáng)，說(shuō)明母體對(duì)胎兒產(chǎn)生排斥

反應(yīng)也強(qiáng)，而RANTES發(fā)揮封閉抗體的效應(yīng)則正是通過(guò)抑制母體與配體間的MLR。如若RANTES水平低下，封閉抗體缺失或不足最終容易導(dǎo)致流產(chǎn)發(fā)生［7］。MCP-1對(duì)單核細(xì)胞有較強(qiáng)的趨化能力，雖然對(duì)自然殺傷（natural killer，NK）不具有趨化能力，但當(dāng)不需要穿過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)也可激活NK細(xì)胞的殺傷功能。

本研究結(jié)果表明，血清中3種趨化因子URSA組均低于正常非孕組、正常妊娠組，說(shuō)明3種趨化因子，尤其是RANTES濃度的改變對(duì)URSA患者起著重要作用。

3.3 免疫治療與趨化因子的關(guān)系：URSA與免疫因素密切相關(guān)，倘要母體血清中缺乏抑制MLR的封閉因子，則母體可能會(huì)對(duì)攜帶父系抗原的胎兒產(chǎn)生排斥反應(yīng)導(dǎo)致流產(chǎn)。3種趨化因子中能夠介導(dǎo)母體耐受主要是RANTES。研究［8］表明，URSA組與正常妊娠組比較，血清中MLR偏低，且其反應(yīng)水平隨妊娠次數(shù)增加而升高。體外MLR實(shí)驗(yàn)顯示RANTES能抑制母體對(duì)父系抗原的排斥反應(yīng)，從而說(shuō)明RANTES是通過(guò)免疫抑制來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)胎兒保護(hù)作用的。增加孕酮的水平，可使子宮內(nèi)膜中T細(xì)胞表達(dá)RANTES水平亦增高［9］，說(shuō)明T細(xì)胞產(chǎn)生RANTES能力的下降，可能與URSA的發(fā)生有關(guān)。

研究證實(shí)，血清中RANTES水平明顯低的URSA患者，在接受配偶的淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療后，MLR反應(yīng)強(qiáng)度較前顯著下降，RANTES水平較前顯著升高，且有80％再次妊娠成功［10］。

本研究結(jié)果顯示，主動(dòng)免疫治療后血清中3種趨化因子均上升，尤其是持續(xù)妊娠組比率顯著上升，表明主動(dòng)免疫治療方法對(duì)URSA患者的持續(xù)妊娠的維持是可行的。

［1］楊素娟，江靜，郝桂敏，等.主動(dòng)免疫治療原因不明習(xí)慣性流產(chǎn)的臨床研究［J］.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2007，23（5）：300-302.

［2］楊素娟，尹桂然，劉慈，等.原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的免疫治療［J］.河北醫(yī)藥，2010，32（24）：3486-3487.

［3］王文娟，邱麗華，林其德，等.連續(xù)2次原因不明自然流產(chǎn)免疫治療必要性的探討［J］.中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2010，26（2）：122-124.

［4］SUGIURA M，OZAKI Y，KATANO K.Diagnosis and treatment methods in recurrent miscarriage［J］.Nihon Rinsho，2010，68（12）：2351-2356.

［5］FRACCAROLI L，ALFIERI J，LAROCCA L，et al.A potential tolerogenic immunemechanism in a trophoblast cell line through the activation of chemokine-induced T cell death and regulatory T cellmodulation［J］.Hum Reprod，2009，24（1）：166-175.

［6］KIM NY，CHO HJ，KIM HY，et al.Thyroid autoimmunity and its association with cellular and humoral immunity in women with reproductive failures［J］.Am JReprod Immunol，2011，65（1）：78-87.

［7］司馬玲，蔡霞.反復(fù)流產(chǎn)免疫因素的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2011，19（6）：7-10，24.

［8］劉秀芝，李偉毅.趨化因子與生殖免疫［J］.生殖與避孕，2009，29（3）：172-175.

［9］RAMHORSTRE，PATEL R，CORIGLIANO A，et al.Induction of maternal tolerance to fetal alloantigens by RANTES production［J］.Am JReprod Immunol，2006，56（5/6）：302-311.

［10］LIN QD，QIU LH.Pathogenesis，diagnosis，and treatment of recurrent spontaneous abortion with immune type［J］.Front Med China，2010，4（3）：275-279.

（本文編輯：劉斯靜）

·病例報(bào)告·

LEVELSOF SERUM CHEMOKINES BEFORE AND AFTER INITIATIVE IMMUNOTHERAPY IN UNEXPLAINED RECURRENT SPONTANEOUS ABORTIONWOMEN

YANG Sujuan1，ZHAO Zhiming1，HAO Guimin1，YIN Guiran2
（1.Center of Reproductive Medicine，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，
China；2.Department of Gynaecology and Obstetrics，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

Objective The serum levels of three chemokines monocyte chemotactic protein-1（MCP-1），regulated upon activation nomal T cell expressed and secreted（RANTES），interleukin-8（IL-8）before and after active immunotherapy were studied for the effect in the unexplained recurrent spontaneous abortion（URSA）pathogenesis.Methods Forty URSA patients in the hospital from April 2011 to May 2012 were enrolled in study group，with 20 normal non-pregnant，20 normal pregnancy women were included in control groups.The levels of MCP-1，RANTES and IL-8 were determined using enzyme linked immunosorbent assay.Results The levels of MCP-1，RANTES，IL-8 of URSA patients before treatmentwere significantly lower than those of normal non-pregnant group and normal pregnancy group，the differences were statistically significant（all P＜0.05），while the differences between the normal non-pregnant group and the normal pregnancy group had no statistical significance（P＞0.05）.

abortion，habitual；chemotactic factors；immunity；therapy

R711.6

A

1007-3205（2013）06-0649-04

2013-04-01；

2013-05-16

2012年河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題計(jì)劃（20120305）

楊素娟（1971-），女，河北肅寧人，河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院主管檢驗(yàn)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事生殖醫(yī)學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.06.011

The levels ofMCP-1，RANTES，IL-8 in serum were significantly increased in URSA patients after immune treatment compared with before treatment，the differences were statistically significant（P＜0.05）. According to whether to continue pregnancy after immunotherapy，40 cases of URSA patientswere divided into the ongoing pregnancy group with 27 cases，and the non ongoing pregnant group with 13 cases.The growth rates of MCP-1，RANTES，IL-8 levels after treatment in the ongoing pregnancy group were higher than those of the non ongoing pregnant group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe levels of MCP-1，RANTES，IL-8 in patients with URSA can be improved after active immunotherapy，especially in the ongoing pregnancy group.RANTESwith a blocking antibody effect，may bemore conducive to the sustainable development of pregnancy.