郭美仙，胡亞婷，陸翠芬，柳斌，陳光勇

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

毛大丁草根水煎劑對受試動物的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用

郭美仙，胡亞婷，陸翠芬，柳斌，陳光勇*

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

目的：觀察毛大丁草根水煎劑對受試動物的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用。方法：采用氨水誘咳法分別觀察毛大丁草根水煎劑對小鼠咳嗽次數(shù)及咳嗽潛伏期的影響；酚紅排泌法檢測毛大丁草根水煎劑對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響；離體氣管法觀察毛大丁草根水煎劑對乙酰膽堿（Ach）、組胺（His）誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌收縮的影響。結(jié)果：毛大丁草根水煎劑可減少小鼠咳嗽次數(shù)、延長咳嗽潛伏期；可增加小鼠呼吸道酚紅排泌量；可降低Ach、His誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌的收縮張力。結(jié)論：毛大丁草根水煎劑對受試動物具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用。

毛大丁草根；水煎劑；鎮(zhèn)咳；祛痰；平喘

毛大丁草根為菊科帚菊木族大丁草屬植物毛大丁草Gerbera piloselloides（L.）的根及根莖，產(chǎn)于云南、貴州等地〔1-2〕。主治：清熱解毒，理氣和血〔2〕。治感冒發(fā)熱，咳嗽多痰，用小一枝箭根6～15 g水煎服〔3〕?！顿F陽民間藥草》記載毛大丁草一兩，蒸蜂蜜吃治咳嗽哮喘。遵義藥理學(xué)組〔4〕研究表明毛大丁草水煎劑具有鎮(zhèn)咳、祛痰的作用。唐小江等〔5〕研究表明毛大丁草根部的紅色揮發(fā)性油狀成分具有止咳、祛痰作用。張世武等〔6〕研究表明毛大丁草對組胺誘導(dǎo)的豚鼠窒息有抑制作用。目前，國內(nèi)尚未見毛大丁草根水煎劑鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用的研究報道，為此我們研究了毛大丁草根水煎劑對受試動物的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用，為更好的開發(fā)利用毛大丁草根提供一定科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 動物KM種小鼠，清潔級，雌雄各半，體重18~ 22 g，由昆明醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（滇）2011-0004。豚鼠，普通級，雌雄各半，體重300~320 g，由大理學(xué)院實驗動物中心提供。

1.2 藥品與試劑25~28%氨水（上海試劑三廠，批號：090219）；苯酚紅（上海試劑三廠，批號：850903）；碳酸氫鈉（天津市博迪化工有限公司，批號：20060217）；急支糖漿（太極集團(tuán)重慶涪陵制藥有限公司，批號：11010035）；磷酸組胺（His），（上海如吉生物科技發(fā)展有限公司，批號：100703）；氯化乙酰膽堿（Ach），（上海三愛思試劑有限公司，批號：20061130）；氨茶堿（廣州白云山明興制藥有限公司，批號：20080512）；醫(yī)用氧氣（純度>95%，大理制氧廠）；克氏液（K-H液）〔7〕：NaCl 6.9 g，KCl 0.35 g，CaCl20.28 g，KH2PO40.16 g，MgSO4·7H2O 0.29 g，NaHCO32.10 g，葡萄糖2.00 g，CaCl2另溶，加蒸餾水至1 000 mL，通氧30 min。

1.3 儀器JH-2肌張力傳感器（航天工程醫(yī)學(xué)工程研究所）；HW-400S恒溫平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）；BL-420E+生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；YP3001N電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；721分光光度計（上海第三分析儀器廠）；XK96-A快速混勻器（姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司）。

1.4 樣品樣品采自云南省大理市鳳儀鎮(zhèn)，經(jīng)大理學(xué)院生藥學(xué)周濃副教授鑒定為菊科大丁草屬植物毛大丁草Gerbera piloselloides（L.）的根。將根（生藥）洗凈，晾干，粉碎，取生藥200 g，加蒸餾水1 000 mL，煎煮30 min，過濾除渣，濃縮至500 mL（生藥濃度40%），4℃冰箱保存?zhèn)溆小ＥR用時用蒸餾水稀釋成20%、10%的水煎劑〔4〕。

2 方法

2.1 鎮(zhèn)咳試驗預(yù)熱超聲霧化器后，加入現(xiàn)配的13%氨水50 mL，將小鼠放入1 000 mL的燒杯中，燒杯口用保鮮膜密閉，并開兩個口（其一用于插入超聲霧化器出口管，另一為通風(fēng)小孔）。將超聲霧化器以最大噴霧力度（MAX）持續(xù)通入氨氣60 s后，立即關(guān)閉并迅速打開保鮮膜，使其中氨氣自然擴(kuò)散。在通入氨氣的同時，觀察并記錄3 min內(nèi)小鼠的咳嗽次數(shù)（咳嗽表現(xiàn)：小鼠腹肌收縮，同時張大嘴，有咳嗽聲）和咳嗽潛伏期（首次開始咳嗽的時間）〔5，7〕。

取篩選合格（標(biāo)準(zhǔn)：咳嗽潛伏期小于15 s或大于50 s者均淘汰，3 min內(nèi)咳嗽次數(shù)少于10次或大于80次者均淘汰）的小鼠60只，隨機分為5組，每組12只；蒸餾水組，急支糖漿組，毛大丁草根水煎劑不同劑量組（生藥量2.00、4.00、8.00 g/kg），各組小鼠分別以20 mL/kg的相應(yīng)藥物連續(xù)灌胃14 d，1次/d。末次給藥后1 h造模（方法同前），觀察3 min內(nèi)小鼠的咳嗽次數(shù)和咳嗽潛伏期。

2.2 祛痰試驗稱取酚紅0.05 g，用1 mol/L NaOH溶解后，加pH值8.95的生理鹽水至100 mL，濃度為500.00 ug/mL，然后逐級稀釋成濃度為250.00、125.00、62.50、31.25 ug/mL的酚紅溶液，在546 nm處測定吸光度，以濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸光度（Y）為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線（Y=13.25X-1.623 4，r=0.894 7）。取小鼠60只，分組及給藥同2.1。末次給藥30 min后，各小鼠腹腔注射0.5%酚紅20 mL/kg，1 h后空氣栓塞處死動物，仰臥位固定于蛙板上分離氣管（準(zhǔn)備5 mL的已編號試管，加入5%NaHCO3溶液1.5 mL）。用1 mL注射器吸取5%NaHCO3溶液0.5 mL，注入氣管內(nèi)，反復(fù)來回沖洗呼吸道3次，最后1次將沖洗液收集于相應(yīng)編號試管內(nèi)，按上述方法再重復(fù)2次。合并沖洗液，離心（1 000 rpm，5 min），取上清于546 nm處測定吸光度〔8〕。根據(jù)酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算其酚紅濃度〔5，7-8〕。

2.3 平喘試驗取豚鼠20只，擊頭處死，自甲狀軟骨下剪取全部氣管，浸入通以5%CO2和95%O2混合氣體的克氏液中，剝離氣管周圍組織，將氣管由一端向另一端螺旋形剪成條狀，每2~3個軟骨環(huán)剪成1個螺旋。放入盛有19.5 mL冷克氏液的恒溫平滑肌槽中（pH 7.4，37℃），其一端與肌張力傳感器相連，另一端與通氣鉤相連，持續(xù)通以5%CO2和95%O2混合氣體，給氣管條基礎(chǔ)張力2.00 g，記錄曲線張力變化，每20 min更換1次營養(yǎng)液。平衡60 min后，分別加入蒸餾水、1.2×10-3g/mL氨茶堿及毛大丁草根水煎劑2.0× 10-1、4.0×10-1、8.0×10-1g/mL各0.5 mL，（終濃度分別為氨茶堿3.0×10-5g/mL、毛大丁草根水煎劑5.0×10-2、1.0×10-1、2.0×10-1g/mL），孵育3 min，記錄張力變化（給藥后張力）；接著加入乙酰膽堿（Ach）1.0×10-2g/mL或組胺（His）1.0×10-2g/mL各0.5 mL（終濃度分別為Ach 2.5×10-4g/mL或His 2.5×10-4g/mL），孵育5 min，記錄張力變化（給Ach后張力或給His后張力），用軟件提供的區(qū)間測量方法測量給藥后、給Ach后、給His后3 min的平均張力〔6-9〕。

3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析。

4 結(jié)果

4.1 毛大丁草根水煎劑對小鼠的鎮(zhèn)咳作用結(jié)果顯示（表1）：與蒸餾水組比較，急支糖漿組小鼠咳嗽潛伏期明顯延長（P<0.01）、咳嗽次數(shù)明顯減少（P< 0.05），表明造模成功；與蒸餾水組比較，毛大丁草根水煎劑各劑量組小鼠咳嗽潛伏期明顯延長（P< 0.01）、咳嗽次數(shù)明顯減少（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果表明：毛大丁草根水煎劑能明顯抑制氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽反應(yīng)，且作用較急支糖漿顯著。

表1 毛大丁草根水煎劑對氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽反應(yīng)的影響

表1 毛大丁草根水煎劑對氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽反應(yīng)的影響

注：與蒸餾水組比較：*P<0.05，**P<0.01；與急支糖漿組比較：△△P<0.01。

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4.2 毛大丁草根水煎劑對小鼠的祛痰作用結(jié)果顯示（表2）：與蒸餾水組比較，急支糖漿組小鼠酚紅排泌量明顯增多（P<0.01），表明造模成功；與蒸餾水組比較，毛大丁草根水煎劑中劑量組小鼠酚紅排泌量明顯增多（P<0.05），高劑量組小鼠酚紅排泌量明顯增多（P<0.01）。結(jié)果表明：毛大丁草根水煎劑能顯著增加呼吸道酚紅排泌量，但作用不及急支糖漿。

表2 毛大丁草根水煎劑對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響

表2 毛大丁草根水煎劑對小鼠呼吸道酚紅排泌量的影響

注：與蒸餾水組比較：*P<0.05，**P<0.01；與急支糖漿組比較：△P<0.05。

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4.3 毛大丁草根水煎劑對豚鼠的平喘作用

4.3.1 毛大丁草根水煎劑對Ach誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌收縮張力的影響結(jié)果顯示（表3）：與蒸餾水組比較，氨茶堿組氣管平滑肌給藥后收縮張力明顯降低（P<0.05），給Ach后收縮張力明顯降低（P< 0.01）；與蒸餾水組比較，毛大丁草根水煎劑各劑量組氣管平滑肌給藥后收縮張力無明顯變化（P> 0.05），給Ach后收縮張力明顯降低（P<0.05，P< 0.01）。結(jié)果表明：毛大丁草根水煎劑能顯著抑制Ach誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌的收縮反應(yīng)，且有量效關(guān)系，但作用不及氨茶堿。

表3 毛大丁草根水煎劑對Ach誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌收縮張力的影響

表3 毛大丁草根水煎劑對Ach誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌收縮張力的影響

注：與蒸餾水組比較*P<0.05，**P<0.01；與氨茶堿組比較：△P< 0.05，△△P<0.01。

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4.3.2 毛大丁草根水煎劑對His誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌收縮張力的影響結(jié)果顯示（表4）：與蒸餾水組比較，氨茶堿組氣管平滑肌給藥后收縮張力明顯降低（P<0.05），給His后收縮張力明顯降低（P< 0.01）；與蒸餾水組比較，毛大丁草根水煎劑各劑量組氣管平滑肌給藥后收縮張力無明顯變化（P> 0.05），給His后收縮張力明顯降低（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果表明：毛大丁草根水煎劑能顯著抑制His誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌的收縮反應(yīng)，且有量效關(guān)系，但作用不及氨茶堿。

表4 毛大丁草根水煎劑對His誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌收縮張力的影響

表4 毛大丁草根水煎劑對His誘導(dǎo)的豚鼠離體氣管平滑肌收縮張力的影響

注：與蒸餾水組比較：P<0.05，P<0.01；與氨茶堿組比較：△P<0.05，△△P<0.01。

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5 討論

咳嗽、咳痰、哮喘是呼吸系統(tǒng)疾病（如感冒、急慢性氣管炎、肺炎、哮喘、肺氣腫等）較為常見的臨床癥狀。嚴(yán)重的咳嗽、咳痰、哮喘不僅妨礙人們的工作和休息，而且威脅著人們的健康和生命。目前臨床上常用的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘的藥物有很多，然而絕大部分的藥物均有一定的副作用。中藥鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘有其獨特的優(yōu)勢，療效穩(wěn)定，作用溫和，副作用小。因此鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘的中藥研究開發(fā)也越來越受到人們的重視。

氨水易揮發(fā)，吸入后對小鼠的鼻、喉和肺有刺激作用，引起咳嗽?？人詽摲诘拈L短、咳嗽次數(shù)的多少，可以反應(yīng)出小鼠咳嗽反應(yīng)的輕重。給小鼠腹腔注射酚紅溶液后，酚紅從小鼠呼吸道排泌出來，酚紅排泌量的多少可以反應(yīng)出呼吸道分泌液量的多少，呼吸道分泌液量增多有利于附著呼吸道黏膜的濃痰變稀，容易從氣道壁脫落，起到祛痰作用。氣流受阻是哮喘病理生理改變的核心，由于支氣管平滑肌痙攣收縮、氣道黏膜下水腫、炎癥細(xì)胞浸潤、分泌物增多造成氣流受阻而使哮喘發(fā)作〔10〕，因此抑制支氣管平滑肌收縮，在一定程度上可以減輕哮喘發(fā)作。本研究結(jié)果顯示：毛大丁草根水煎劑可抑制氨水誘導(dǎo)的小鼠咳嗽反應(yīng)，明顯延長咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(shù)；可增加小鼠呼吸道酚紅的排泌量；可抑制Ach、His誘導(dǎo)的離體氣管平滑肌的收縮，機制可能與其阻斷膽堿能受體和組胺受體有關(guān)。本研究結(jié)果表明：毛大丁草根水煎劑對受試動物具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用。

〔1〕程用謙.中國植物志〔M〕.北京：科學(xué)出版社，1996：94-96.

〔2〕江蘇新醫(yī)學(xué)院《中藥大辭典》編寫組.中藥大辭典〔M〕.上海：上海人民出版社，1977：448-449.

〔3〕云南省怒江傈僳族自治州衛(wèi)生局.怒江中草藥〔M〕.昆明：云南科技出版社，1991：237-238.

〔4〕藥理學(xué)組.毛大丁草鎮(zhèn)咳、祛痰作用的實驗研究〔J〕.醫(yī)藥科技資料，1977（1）：31-33.

〔5〕唐小江，黃華容，方鐵錚，等.毛大丁草根止咳祛痰活性成分的研究〔J〕.中國中藥雜志，2003，28（5）：426-428.

〔6〕張世武，劉國雄.毛大丁草“平喘”作用的實驗觀察〔J〕.遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1980，4（1）：7.

〔7〕陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：1182-1183，434-637.

〔8〕楊利娟，王張，孟憲麗，等.基于濃氨水引咳法建立小鼠咳嗽敏感性剔除標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)研究〔J〕.中藥藥理與臨床，2010，26（5）：150-151.

〔9〕孫雪，張義智，李麗，等.安兒寧顆粒的鎮(zhèn)咳祛痰作用〔J〕.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（1）：71-72.

〔10〕桑杲，陳志敏.麻杏石甘湯治療小兒支氣管哮喘的藥理研究及臨床應(yīng)用進(jìn)展〔J〕.浙江中醫(yī)雜志，2006，41（6）：366-368.

（責(zé)任編輯 李楊）

Effect of Gerbera piloselloides Decoction on Preventing Cough,Eliminating Phlegm and Relieving Asthma on Mice

GUO Meixian,HU Yating,LU Cuifen,LIU Bin,CHENG Guangyong*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To observe the effects of antitussive,expectorant and anti-asthmatic of Gerbera piloselloides（L.）cass root on the experimental animals.Methods:Mouse cough model was induced by ammonia water,the times and incubation period of cough on mice was recorded.The phenol red excretion test was applied to detect the amount of phenol red excreted by respiratory tract,and the guinea pig tracheal in vitro was adopted to record the effect of contractive tension of the isolated tracheal smooth muscle induced by acetylcholine（Ach）and histamine（His）.Results:Data showed that the decoction extracted from the Gerbera piloselloides（L.）cass root could reduce the cough times,prolong the cough incubation period of the mice,increase the amount of phenol red excreted by respiratory tract;and reduce the tension of contraction of isolated tracheal smooth muscle induced by Ach and His.Conclusion:The water decoction from Gerbera piloselloides（L.）cass root has effects of preventing cough,eliminating phlegm and relieving asthma on experimental cough animal.

Gerbera piloselloides（L.）cass root;water decoction;antitussive;expectorant;anti-asthmatic

R285.5

A

1672-2345（2013）06-0001-04

10.3969/j.issn.1672-2345.2013.06.001

大理州科技局科研基金資助項目（2060402）；大理學(xué)院大學(xué)生科研基金資助項目（DXSKYY201123）

2013-03-05

2013-03-22

郭美仙，實驗師，主要從事中藥藥理學(xué)研究. *通信作者：陳光勇，副教授.