賈競夫，忻 娜，王 燕，趙亞平*

(上海交通大學化學化工學院，上海 200240)

脂質(zhì)體(liposome)是由單層或多層脂質(zhì)雙分子層膜包封而成的微球體，其主要成分為磷脂和膽固醇，結(jié)構(gòu)類似于生物膜，雙分子層內(nèi)外可分別包封脂溶性和水溶性成分。脂質(zhì)體最初是在20世紀60年代由英國學者將磷脂分散在水中進行電鏡觀察時發(fā)現(xiàn)的，并在20世紀70年代初開始被用于藥物載體。脂質(zhì)體具有獨特的兩親性，以及良好的生物相容性和可降解性，因此在藥物和食品領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景[1]。脂質(zhì)體作為藥物載體，克服了不溶性藥物難以被人體利用的問題，同時還有提高藥物靶向作用、延緩藥物作用時間、提高療效、降低毒性、改變給藥途徑等優(yōu)點[2]；但由于其通常以懸浮液狀態(tài)存在，在物理、化學方面具有不穩(wěn)定性，如團聚、沉降、降解、磷脂水解或氧化等，限制了脂質(zhì)體的廣泛應(yīng)用。

近年來，人們提出固體脂質(zhì)納米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)[3]、納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(nanostructured lipid carriers，NLC)[4]等來代替脂質(zhì)體，以克服脂質(zhì)體穩(wěn)定性差的缺點。然而，SLN存在載藥量過低、貯存過程中粒徑增長、藥物降解和突釋效應(yīng)等缺陷；NLC在SLN基礎(chǔ)上采用液態(tài)油或混合脂質(zhì)代替固體脂質(zhì)，一定程度上提高了載藥量，但其物理穩(wěn)定性仍然欠佳，且不具備脂質(zhì)體的雙分子膜仿生結(jié)構(gòu)，在生物相容度方面存在不足。相比之下，脂質(zhì)體前體(proliposomes，PL)[5]則具有明顯的優(yōu)勢，既保留了脂質(zhì)體自身的優(yōu)點，又提高了貯藏穩(wěn)定性。

脂質(zhì)體前體的概念最早由Payne等[6]在1986年提出，被定義為具有良好流動性的固體粉末狀微粒，可作為藥物載體，且在水中可迅速水化形成脂質(zhì)體。之后，有學者將某些可在水相中短時間內(nèi)形成脂質(zhì)體的其他形態(tài)的脂質(zhì)體系也稱為脂質(zhì)體前體，如磷脂的濃縮乙醇溶液[7]、混合膠體態(tài)[8]、液晶形態(tài)[9]等。與傳統(tǒng)脂質(zhì)體相比，脂質(zhì)體前體不僅在物理、化學穩(wěn)定性方面顯著提升[10]，同時在保持給藥過程中微粒的完整性、提高藥物溶解性、促進藥物胃腸吸收、促進藥物膜滲透能力、藥物動力學[11]以及提高生物利用度等方面也表現(xiàn)出巨大的潛力。鑒于脂質(zhì)體前體獨特的優(yōu)勢，有關(guān)其作為藥物或食品載體系統(tǒng)的研究逐年增多，本文就近幾年脂質(zhì)體前體的制備方法及其應(yīng)用進行綜述，以期為脂質(zhì)體前體的研究提供一定的參考。

1 脂質(zhì)體前體的制備

目前粉末狀脂質(zhì)體前體的制備主要有載體沉積法、超臨界流體法以及將傳統(tǒng)脂質(zhì)體制備方法同冷凍干燥或噴霧干燥技術(shù)相結(jié)合的方法；而液態(tài)或半固態(tài)的脂質(zhì)體前體制備主要采用乙醇濃縮法。

1.1 載體沉積法

為了獲得固體粉末狀的脂質(zhì)體前體，較簡單的方法是可以將脂質(zhì)體懸液進行加熱以蒸干溶劑，即薄膜蒸發(fā)法。但脂質(zhì)體懸液若直接經(jīng)過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，會在燒瓶內(nèi)壁形成薄膜狀態(tài)，不易收集，且在缺少振動或超聲等條件下無法在水溶液中迅速水化形成脂質(zhì)體。因此，一些多孔載體的加入被用來承載和分散脂質(zhì)顆粒以獲得流動性好、易水合的粉末狀脂質(zhì)體前體。具體過程是：首先將帶有藥物的脂質(zhì)在一定溫度條件下溶于有機溶劑；然后將此有機溶液分步加入到含有載體粉末的燒瓶中，并且在每次加入脂質(zhì)有機溶液后，通過真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑并使溶質(zhì)沉積在載體上，重復(fù)進行直至所有溶液加入；在最后一次蒸干后放于干燥器中過夜，之后過篩得到脂質(zhì)體前體[12]。其中載體是指具有空間孔洞結(jié)構(gòu)的水溶性物質(zhì)，目的是增加脂質(zhì)在水化形成脂質(zhì)體時的分散性，常用的載體有山梨醇、氯化鈉、甘露醇、β-環(huán)糊精等。

載體沉積法在合適的條件下可制得水化后脂質(zhì)體粒徑在300nm以下的脂質(zhì)體前體。如宋金春等[13]采用這種方法，以卵磷脂和膽固醇為脂質(zhì)材料，分別優(yōu)選甲醇、乙醚體積比為1：1的混合液和山梨醇作為溶劑和載體，并加入VE作為抗氧化劑制備了葛根素的脂質(zhì)體前體，所得脂質(zhì)體前體水化后可迅速形成平均粒徑為278nm的單室或多室脂質(zhì)體。使用載體沉積法制備脂質(zhì)體前體的過程中，為了使有機溶劑去除充分以避免毒性，需要在旋蒸過程中少量分步加入脂質(zhì)有機溶液，且通常在旋蒸完畢后要在干燥器中過夜。鑒于這一步驟的繁瑣，Xu Hongtao等[14]以乙醇代替其他高毒性有機溶劑，對載體沉積法進行了改進，大大簡化了制備步驟，制得的脂質(zhì)體前體水合后平均粒徑為300nm，包封率達到86.3%，且該脂質(zhì)體前體具有較高的穩(wěn)定性，氮氣環(huán)境條件下室溫保藏6個月后無明顯變化。值得注意的是，載體沉積法制備的脂質(zhì)體前體的外觀(有無濕結(jié)成塊、流動性等)和水化效果(水化難易、脂質(zhì)體形貌等)與載體的選擇密切相關(guān)。這是由于不同載體的空間結(jié)構(gòu)、比表面積以及載體與脂質(zhì)之間的作用力都存在差異，因此選擇合適的載體對于脂質(zhì)體前體的性質(zhì)具有很大影響。另外，載體在使用前往往需要經(jīng)過研磨、過篩等操作來達到合適的粒徑，一般為幾百微米，并需要進行干燥處理。

1.2 冷凍干燥法

冷凍干燥法主要是在傳統(tǒng)的脂質(zhì)體制備方法基礎(chǔ)上，加入凍干保護劑，將脂質(zhì)體冷凍干燥脫水后得到固體粉末脂質(zhì)體前體。脂質(zhì)體制備的方法包括乙醇注入法[15]、薄膜分散法[16]、載體沉積法制備脂質(zhì)體前體后水合。凍干保護劑常用甘露醇、海藻糖、蔗糖、葡萄糖等糖類物質(zhì)。冷凍干燥法又分為乙醇注入-冷凍干燥法、薄膜分散-冷凍干燥法、載體沉積-冷凍干燥法等。

1.2.1 乙醇注入-冷凍干燥法

該法將乙醇注入法制備脂質(zhì)體的方法同冷凍干燥相結(jié)合，具體過程是：首先將脂質(zhì)加入到無水乙醇中溶解，然后將含有凍干保護劑的水溶液加入到脂質(zhì)溶液中，振蕩混勻或超聲，最后經(jīng)過冷凍干燥獲得固態(tài)粉末狀脂質(zhì)體前體[17]。在這一方法中，也有學者[18]使用叔丁醇代替乙醇，制備出了性能良好的脂質(zhì)體前體。

1.2.2 薄膜分散-冷凍干燥法

該法將薄膜分散法制備脂質(zhì)體的方法同冷凍干燥相結(jié)合，具體過程是：先將脂質(zhì)、包埋物等溶于有機溶劑，然后在梨形瓶內(nèi)旋蒸蒸發(fā)去除有機溶劑得到薄膜狀物質(zhì)，再加入水或緩沖水溶液振動得到脂質(zhì)體懸液，最后超聲處理后加入凍干保護劑，經(jīng)冷凍干燥制得脂質(zhì)體前體[19]。

1.2.3 載體沉積-冷凍干燥法

該法是在載體沉積法的基礎(chǔ)上進一步結(jié)合冷凍干燥技術(shù)二次制備脂質(zhì)體前體的方法。首先使用載體沉積法制備出脂質(zhì)體前體，然后加入到磷酸緩沖液中水合形成脂質(zhì)體，最后進行凍干處理，再次得到脂質(zhì)體前體。有學者[20]研究指出在制備藥物阿米卡星脂質(zhì)體前體時，這種方法得到的脂質(zhì)體前體水合后包封率比載體沉積法有顯著提高，且兩種方法包封率又均高于薄膜分散法制得的脂質(zhì)體。該研究認為，脂質(zhì)體雙分子層的形成效率與脂質(zhì)水合表面積的大小正相關(guān)。當干燥的脂質(zhì)體前體與水接觸時，載體物質(zhì)(多孔糖類)溶解，使得脂質(zhì)獲得了更大的水合表面積，因此載體沉積法比薄膜分散法包封率更高；而經(jīng)過冷凍干燥后，脂質(zhì)進一步形成了膨脹、泡沫狀的結(jié)構(gòu)，更容易發(fā)生水合作用，從而獲得了更高的包封率。盡管目前關(guān)于載體沉積-冷凍干燥法的報道不多，但這種將多種制備方法相結(jié)合的辦法，在脂質(zhì)體前體制備方面提供了更廣闊的思路。

在冷凍干燥法制備脂質(zhì)體前體的方法中，凍干保護劑的使用非常重要，直接關(guān)系到脂質(zhì)體前體水合重建脂質(zhì)體后的粒徑和包封率等。關(guān)于凍干保護劑的作用機理目前存在兩種假說[21]：一種是Crowe提出的“水代替假說(water replacement hypothesis)”，即生物體中大分子均被一層水膜保護著，干燥過程中若有凍干保護劑可與脂質(zhì)體磷脂的極性基團形成氫鍵，脫水后代替水作為脂質(zhì)體的穩(wěn)定劑，保持膜的完整性。另一種是Koster等提出的玻璃化作用(vitrification)，認為保護劑的存在降低磷脂的相轉(zhuǎn)變溫度，阻止其從凝膠態(tài)向液晶態(tài)轉(zhuǎn)變中發(fā)生藥物的泄漏。凍干保護劑種類的選擇也至關(guān)重要，因為不同保護劑的性質(zhì)及其與所用脂質(zhì)之間的作用力均不盡相同，在骨架作用和促進脂質(zhì)體前體在水中的再分散方面都會帶來不同影響。一般來說，凍干保護劑需要滿足兩個要求：1)產(chǎn)品外觀上應(yīng)飽滿致密，可以形成一定硬度的餅狀物；2)需要有玻璃態(tài)存在，保護脂質(zhì)體膜不致受到結(jié)晶的機械破壞。Liu Yang等[22]在制備載基因納米陽離子脂質(zhì)體前體的過程中，對9種凍干保護劑從成型性、復(fù)溶情況、粒徑、載藥量等方面進行了考察，得出海藻糖、甘露醇、甘氨酸效果較好，其中海藻糖復(fù)溶后澄清透明、載藥量最高。

1.3 噴霧干燥法

與冷凍干燥法類似，噴霧干燥法也是在傳統(tǒng)脂質(zhì)體制備方法基礎(chǔ)上，配合噴霧干燥技術(shù)得到固體粉末狀的脂質(zhì)體前體，有時需要在噴霧干燥前加入熱保護劑。主要有乙醇注入-噴霧干燥法、薄膜蒸發(fā)-噴霧干燥法、流化床法等方法。

1.3.1 乙醇注入-噴霧干燥法

該法首先將脂質(zhì)加入到無水乙醇中溶解，然后將緩沖水溶液加入到脂質(zhì)溶液中，振蕩混勻或超聲，最后經(jīng)過噴霧干燥獲得固態(tài)粉末狀脂質(zhì)體前體。在有效克服噴霧熱效應(yīng)的情況下，該方法制得的脂質(zhì)體前體水合后可形成粒徑達到納米級的脂質(zhì)體，包封率可達到80%以上[23]。

1.3.2 薄膜蒸發(fā)-噴霧干燥法

該法是先將脂質(zhì)、包埋物等溶于有機溶劑，然后在梨形瓶內(nèi)旋蒸蒸發(fā)去除有機溶劑得到薄膜狀物質(zhì)，再加入水或緩沖水溶液振動得到脂質(zhì)體懸液，最后超聲處理后經(jīng)噴霧干燥制得脂質(zhì)體前體。

1.3.3 流化床法

該法是將脂質(zhì)有機溶液，用流化床轉(zhuǎn)動切噴的方式噴于多孔載體粉末上，然后干燥一段時間，取出篩分即得固體粉末狀脂質(zhì)體前體。所用載體與載體沉積法中載體材料類似。Lei Guofeng等[24]以山梨醇為載體，用流化床法制得了顆粒流動性好、粒徑分布較均勻(98nm)的燈盞花素脂質(zhì)體前體，包封率為(63.1±2.8)%，并考察了載體、藥脂比、進口溫度、噴霧速率和噴霧風量對脂質(zhì)體前體制備的影響，證明了流化床法制備燈盞花素脂質(zhì)體前體是可行的。

在將脂質(zhì)體進行噴霧干燥處理時，會有短暫的高溫過程，這一過程產(chǎn)生的熱效應(yīng)可能會對脂質(zhì)體的雙層膜結(jié)構(gòu)造成破壞，從而影響脂質(zhì)體的完整性和包封率。另外，盡管脂質(zhì)的存在可以在一定程度上對包埋物形成保護，但對于一些熱敏性強的藥物或食品營養(yǎng)素，也有可能受熱發(fā)生不利變化。因此，在采用噴霧干燥法制備脂質(zhì)體前體時，有時需要額外加入一些熱保護劑來克服噴霧熱效應(yīng)。熱保護劑通常是具有親水性的聚合物，如甘露醇、蔗糖等，在脂質(zhì)膜中其穩(wěn)定作用的水分子氣化脫離時，可與脂質(zhì)的極性基團相互作用，從而起到穩(wěn)定膜結(jié)構(gòu)的作用[25]。也有研究認為，由于噴霧干燥過程中高溫狀態(tài)持續(xù)時間很短，且大部分熱量均被水的相變過程吸收，故脂質(zhì)與包埋物幾乎不會受到影響；而所加入的親水性物質(zhì)更主要的是作為賦形劑起作用，以保證形成分散性好、粒徑均勻的球形微粒[26]。

1.4 乙醇濃縮法

乙醇濃縮法被用來制備非固態(tài)脂質(zhì)體前體，目前已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用，具體過程[7]是：將脂質(zhì)、包埋物等通過加熱、振蕩等手段溶解于最少量乙醇中，形成澄清溶液，即得液態(tài)或半固態(tài)脂質(zhì)體前體。乙醇也可使用其他與水相容的有機溶劑如丙二醇[27]、乳酸乙酯[28]等代替。由于乙醇濃縮法操作簡便，以及非固態(tài)脂質(zhì)體前體在貯藏穩(wěn)定性方面也表現(xiàn)較好，這一方法受到了很多學者的青睞。Jukanti等[9]采用該法制備了依西美坦脂質(zhì)體前體，與脂質(zhì)體相比，大大提高了貯藏穩(wěn)定性，在4℃條件下貯藏30d后，脂質(zhì)體前體的形貌及水合后形成脂質(zhì)體的尺寸、包封率及藥物緩釋都沒有發(fā)生明顯變化，形成脂質(zhì)體為440～700nm的多層囊泡結(jié)構(gòu)。目前已經(jīng)有一些空白非固態(tài)脂質(zhì)體前體作為商品在市場上出現(xiàn)，如Pro-lipo 3080 S、Prolipo C、Prolipo S等。

1.5 超臨界流體法

該法主要利用超臨界二氧化碳技術(shù)，以天然粉末磷脂和氫化磷脂為壁材原料，采用超臨界微囊制備技術(shù)制備出固態(tài)粉末狀脂質(zhì)體前體。超臨界二氧化碳是一種綠色技術(shù)，整個制備過程是一步反應(yīng)，工藝流程簡單、溶劑殘留量低，適用于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。

Kunnastitchai等[29]以氣溶膠萃取法(ASES)制備了咪康唑脂質(zhì)體前體，但該前體水合后形成的脂質(zhì)體有明顯的團聚現(xiàn)象，尺寸為微米級。我們實驗室采用超臨界加強溶劑分散法(SEDS)分別制備了輔酶Q10[30]、VD3[31]及葉黃素[32]的脂質(zhì)體前體，經(jīng)過水合后都得到了較小粒徑的脂質(zhì)體，且具有令人滿意的包封率。

1.6 各種方法的比較

從脂質(zhì)體前體的形態(tài)方面看，乙醇濃縮法用于非固態(tài)脂質(zhì)體前體的制備，在制備和使用方面具有簡便易行的優(yōu)點；但與固態(tài)脂質(zhì)體前體相比，非固態(tài)脂質(zhì)體前體在穩(wěn)定性方面仍相對較差，且有機溶劑含量較高，在食品藥品方面的應(yīng)用上會受到限制。在固態(tài)脂質(zhì)體前體的制備方法中，載體沉積法的步驟較為繁瑣，這是由于該方法中有機溶劑的不易去除造成的；冷凍干燥法在選擇合適的凍干保護劑的情況下，可得到性能良好的脂質(zhì)體前體；噴霧干燥法需要選擇有效的熱保護劑，在熱敏性物質(zhì)的包埋上有所限制；超臨界流體法過程簡便，易于去除有機溶劑殘留，同樣可得到效果良好的脂質(zhì)體前體，但目前研究較少。從工業(yè)生產(chǎn)的角度，載體沉積法和冷凍干燥法只適用于實驗研究領(lǐng)域，不宜用于大規(guī)模生產(chǎn)；而超臨界流體法工藝流程簡單，可連續(xù)性操作，具有工業(yè)化生產(chǎn)的潛力。

2 脂質(zhì)體前體的應(yīng)用

脂質(zhì)體前體在物理化學穩(wěn)定性、給藥過程中微粒的完整性、加強藥物溶解性和生物利用度、促進藥物胃腸吸收、促進藥物膜滲透能力、藥物動力學等方面巨大的潛力，使其在食品和藥品包埋方面有著越來越多的應(yīng)用。理論上，脂質(zhì)體既可以將親脂性物質(zhì)包埋于雙分層子內(nèi)部的疏水空間，也可以將親水性物質(zhì)包埋于雙分子層外、單層囊泡之內(nèi)或多層囊泡磷脂層之間。脂質(zhì)體這一特點使得脂質(zhì)體前體可廣泛地應(yīng)用于水溶性、脂溶性以及雙親性蛋白質(zhì)、酶類、維生素、抗生素、風味物質(zhì)、營養(yǎng)物等的包埋、運輸及緩釋。下面主要綜述脂質(zhì)體前體在疏水性和水溶性活性物方面的應(yīng)用。

2.1 疏水性物質(zhì)

疏水性物質(zhì)由于其在水中不溶或難溶，如直接進入人體消化道，不易被腸道直接吸收，從而造成生物利用率低的現(xiàn)象。而脂質(zhì)體由于其雙分子層結(jié)構(gòu)與生物細胞膜的高度相似性，容易滲透進入細胞內(nèi)，因此利用脂質(zhì)體前體技術(shù)包埋運送疏水性物質(zhì)，可以增加營養(yǎng)素或藥物的生物利用度。

2.1.1 薏仁籽油脂質(zhì)體前體的制備

Bai Chunqing等[23]采用乙醇注入-噴霧干燥法制備了薏仁籽油脂質(zhì)體前體，水合后脂質(zhì)體粒徑為211.9nm。該實驗于噴霧干燥前，在脂質(zhì)體前體表面包覆了一層羧甲基殼聚糖(CMCS)，以克服噴霧熱效應(yīng)對脂質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的破壞；同時添加了抗氧化劑來防止活性成分和磷脂被氧化。從包封率、緩釋性等角度考察對比了包覆和不包覆CMCS的脂質(zhì)體前體，結(jié)果表明在噴霧干燥時，未包覆CMCS的脂質(zhì)體前體膜結(jié)構(gòu)被嚴重破壞。另外，包覆CMCS也增加了脂質(zhì)體前體的穩(wěn)定性，4℃條件下貯存6個月后，薏仁籽油脂質(zhì)體前體仍能保持松散、均勻、流動性良好的性狀，且水合后粒徑與最初相當，載藥量流失率約為9.3%，而不包覆CMCS的脂質(zhì)體前體相同條件下流失率為40%。研究認為，CMCS與內(nèi)界面依靠氫鍵作用結(jié)合，可防止噴霧干燥時的熱破壞、團聚并提高機械強度。

2.1.2 維生素及其衍生物(脂溶性)脂質(zhì)體前體的制備

孫珊珊等[33]以山梨醇為載體，乙醇為溶劑，大豆卵磷脂、膽固醇為原料，用載體沉積法制備了包封率較高的全反式維甲酸脂質(zhì)體前體。楊靜文等[34]也采用乙醇注入-冷凍干燥法，以乳糖為凍干保護劑，制備了全反式維甲酸的脂質(zhì)體前體，包封率為95.2%，粒徑約為170nm，乙醇殘留量為3.98%，并對釋藥性和穩(wěn)定性進行了考察。陳建明等[35]選擇甘露醇做凍干保護劑，用乙醇注入-冷凍干燥法制備了VA的脂質(zhì)體前體，所得脂質(zhì)體前體水合后呈單室脂質(zhì)體，平均粒徑為0.615μm，藥物包封率為98.5%，在40℃貯存3個月后無明顯變化。

本研究團隊[33]采用超臨界抗溶劑法，以氫化磷脂為脂質(zhì)原料制備了VD3的脂質(zhì)體前體?？疾炝藴囟?、壓力和成分組成等條件，所得脂質(zhì)體前體可迅速水合形成脂質(zhì)體，脂質(zhì)體包封率達到98.5%，粒徑約為1μm。此外還對該方法制得的脂質(zhì)體前體水合形成脂質(zhì)體的機理進行了闡述，認為脂質(zhì)體前體在這一過程中先后經(jīng)歷了固態(tài)、液晶態(tài)，然后形成了雙層膜結(jié)構(gòu)，并通過自組裝最終形成了脂質(zhì)體。

2.1.3 牛血清蛋白脂質(zhì)體前體的制備

Ishikawa等[36]以大豆和蛋黃卵磷脂為原料，用乙醇濃縮-離心法制備了牛血清蛋白的脂質(zhì)體前體。與一般乙醇濃縮法不同，該實驗在制得液態(tài)脂質(zhì)體前體、水合形成脂質(zhì)體后，又通過離心手段獲得了脂質(zhì)體前體膠囊。另外，還同時采用薄膜分散-離心的方法制備了脂質(zhì)體前體膠囊。得到的脂質(zhì)體前體包封率最多達41.9%，當添加一定量海藻糖后，包封率提高至61.5%。脂質(zhì)體前體膠囊在pH5和pH7條件下穩(wěn)定，但在pH3條件下易降解，牛血清蛋白大量泄漏。然而，當使用大豆卵磷脂中可溶于乙醇的部分為脂質(zhì)原料時，脂質(zhì)體前體在pH3條件下穩(wěn)定性大大提高，37℃貯存2h后牛血清蛋白仍保留74.5%，且對類似于胃部的酸性(pH1.2)條件下也表現(xiàn)出高穩(wěn)定性，但在膽汁鹽存在的情況下會快速降解。這一結(jié)果顯示出該脂質(zhì)體前體膠囊可用于營養(yǎng)成分的腸道靶向輸送。

2.1.4 輔酶Q10脂質(zhì)體前體的制備

祝青哲等[37]采用乙醇注入-冷凍干燥法制備了輔酶Q10的脂質(zhì)體前體，水合后所得脂質(zhì)體平均粒徑為508nm，包封率達75%。考察比較了蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖及山梨醇作為凍干保護劑的不同效果，最終優(yōu)選了海藻糖，認為海藻糖作為非還原性二糖，可在無水條件下保護生物膜功能，使脂質(zhì)體在完全脫水時保持完整形態(tài)。還利用紅外光譜分析認為，海藻糖與磷脂P=O基團之間形成氫鍵作用，且保護劑作用機制與“水代替假說”相符合。

本研究團隊[32]利用超臨界抗溶劑法，也對輔酶Q10脂質(zhì)體前體的制備進行了研究。以膽固醇和大豆卵磷脂為脂質(zhì)原料，在8.0MPa、35℃的超臨界條件下，所得脂質(zhì)體前體水合后包封率為82.28%，平均粒徑為50nm。

2.2 親水性物質(zhì)

親水性營養(yǎng)素或藥物由于其水溶性，易被胃部吸收，通常在以腸道為靶向的口服給藥途徑方面存在障礙。利用脂質(zhì)體前體技術(shù)，可對親水性物質(zhì)起到有效的保護作用，從而增加營養(yǎng)素或藥物的穩(wěn)定性。

2.2.1 酶類(親水性)脂質(zhì)體前體的制備

Ishikawa等[38]以大豆卵磷脂為原料，用乙醇濃縮-離心的方法對2種酶類(半乳糖苷酶、堿性磷酸酶)脂質(zhì)體前體膠囊的制備進行了研究，在酶和大豆卵磷脂質(zhì)量為1：10時，所得脂質(zhì)體前體膠囊包封率達到最高，分別為57.3%和53.0%。前體膠囊在pH5條件下穩(wěn)定，但在pH3時不穩(wěn)定。當使用少量殼聚糖包覆時，脂質(zhì)體前體膠囊在pH3時穩(wěn)定性顯著提升。

2.2.2 VE

Zhao Liping等[39]首先使用薄膜分散法制備了VE脂質(zhì)體，然后在脂質(zhì)體表面包覆聚乙二醇(PEG)，最后以海藻糖為凍干保護劑進行冷凍干燥，得到VE脂質(zhì)體前體。所得脂質(zhì)體前體水合后平均粒徑為164.2nm，包封率為83.87%。實驗認為，PEG與脂質(zhì)間以氫鍵結(jié)合，提高了脂質(zhì)體前體的穩(wěn)定性。4℃條件下貯存15d后，VE保留率為89.81%。另外，VE的緩釋性可通過pH值進行調(diào)節(jié)。

2.2.3 黃酮類

宋金春等[13]采用載體沉積法，以大豆卵磷脂和膽固醇為原料，山梨醇為載體，甲醇/乙醚為溶劑，加入VE作為抗氧化劑，制備了葛根素脂質(zhì)體前體。所得脂質(zhì)體前體水合后形成圓形或橢圓形脂質(zhì)體，呈單室或多室，平均粒徑為278nm，包封率約為43.5%，在磷酸鹽緩沖液(PBS)中24h后葛根素釋放量為72.2%。對不同載體進行了對比，發(fā)現(xiàn)山梨醇作載體得到的脂質(zhì)體前體流動性好、易于水合；而甘露醇、氯化鈉、β-環(huán)糊精有濕結(jié)現(xiàn)象。此外，還對影響包封率的因素進行了考察，認為按影響程度從大到小依次為：藥物-脂質(zhì)比＞膽固醇-脂質(zhì)比＞溫度。

2.2.4 鮭降鈣素

Song等[40]分別使用山梨醇和卵磷脂為載體和脂質(zhì)，加入?；悄懰徕c(NaTDC)，用載體沉積法制備了鮭降鈣素脂質(zhì)體前體。在大鼠活體實驗表面，適量NaTDC的加入，能夠使鮭降鈣素的生物利用度增加7.1倍。同時，加入NaTDC還可以使脂質(zhì)體前體水合后粒徑從56.2nm顯著減小(23.2nm)，且包封率增大2.8倍(從19.9%增大到54.9%)。作者認為，生物利用率的增加一方面是由于膽汁鹽可以增加膜的流動性；另一方面則是由于NaTDC和鮭降鈣素可通過脂質(zhì)體前體的形式運送到腸道吸收位點，并形成陽離子復(fù)合物與該位點發(fā)生作用。除上述物質(zhì)外，關(guān)于葉黃素[34]、莪術(shù)油[41]、丹皮酚[42]、丹參酮[43]、肉蓯蓉總苷[29]等的脂質(zhì)體前體制備也有報道。

從現(xiàn)階段的研究結(jié)果看，水溶性物質(zhì)的包埋比脂溶性物質(zhì)更加困難，通常難以達到高于80%的包封率，而在脂質(zhì)體外層包覆一層其他物質(zhì)(如PEG、殼聚糖等)，可能是一個很好的改進方法。

3 結(jié) 語

脂質(zhì)體前體克服了脂質(zhì)體的物理不穩(wěn)定性，可以解決脂質(zhì)體中包埋物的滲漏、粒子的團聚、磷脂的氧化水解等問題，為脂質(zhì)體在提高食品活性物的生物利用度和應(yīng)用提供了一個有效的途徑。目前脂質(zhì)體前體的制備方法已經(jīng)有了很大的發(fā)展，脂質(zhì)體前體在食品營養(yǎng)物方面的應(yīng)用成為研究的熱點之一，但目前大多仍然處于實驗研究階段?，F(xiàn)有的研究工作主要集中在制備粒子的粒徑、包封率、體外緩釋以及工藝參數(shù)方面，而對脂質(zhì)體前體形成脂質(zhì)體的深層機理的研究尚不足。同時，關(guān)于脂質(zhì)體前體生物利用度的體內(nèi)實驗多見于藥物類，在食品應(yīng)用方面的研究并不多見。另外，多數(shù)制備方法如載體沉積法、冷凍干燥法等雖然可制備效果較好的脂質(zhì)體前體，但無法應(yīng)用于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)，而超臨界流體技術(shù)的應(yīng)用有可能解決這一技術(shù)難題。

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