徐冀文，王紅愛(ài)，李 曼

(廣東省第二人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東 廣州 510317)

4-氨基水楊酸鈉為傳統(tǒng)的抗?jié)冃越Y(jié)腸炎藥物5-氨基水楊酸鈉的同分異構(gòu)體，原為古老的抗結(jié)核藥物，20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)其也有抗炎功能，用來(lái)治療潰瘍性結(jié)腸炎，療效與5-氨基水楊酸鈉相當(dāng)。4-氨基水楊酸鈉不僅價(jià)格遠(yuǎn)低于5-氨基水楊酸鈉，而且療效更穩(wěn)定，不良反應(yīng)更低，患者的耐受性較好[1]。潰瘍性結(jié)腸炎是結(jié)腸部位的炎癥性病變，為治療這類疾病，研制的口服結(jié)腸定位包衣片不僅要能定位準(zhǔn)確，而且最好要持續(xù)釋放有效成分，從而保持較高的局部藥物濃度。按照這一思路，利用pH依賴緩釋雙重控制原理，設(shè)計(jì)了4-氨基水楊酸鈉結(jié)腸定位包衣片，并根據(jù)體外釋放結(jié)果，篩選包衣片的最佳處方及工藝。完成此試驗(yàn)，可得到符合制劑要求的最佳處方，為體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)打好基礎(chǔ)。筆者采用反相高效液相色譜法測(cè)定4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片的體外溶出曲線，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀。4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片(自制，批號(hào)分別為 20120301，20120302，20120303，規(guī)格為每片0．5 g);4-氨基水楊酸鈉對(duì)照品(純度99．8%，上海生研生物科技有限公司，批號(hào)為20110201);甲醇、乙腈(美國(guó)迪馬化學(xué)試劑有限公司)為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(35∶65);流速:1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20 μL。在此條件下，供試品中4-氨基水楊酸鈉峰能達(dá)到基線分離，理論板數(shù)按4-氨基水楊酸鈉峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。色譜圖見(jiàn)圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取4-氨基水楊酸鈉對(duì)照品27．78 mg置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解，并稀釋至刻度，得到0．555 6 g/L 的 4-氨基水楊酸鈉對(duì)照品溶液。采用2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄溶出度測(cè)定法第二法(即槳法)，設(shè)轉(zhuǎn)速為100 r/min，溶出介質(zhì)分別為 900 mL 的 pH=1．2的鹽酸溶液和 pH=6．5，7．0，7．4 的磷酸鹽溶液，在 2，3，4，5，6，7，8，9，10，12 h 時(shí)分別取樣10 mL并同時(shí)補(bǔ)充等量介質(zhì)，濾過(guò)，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液、對(duì)照品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，測(cè)定4-氨基水楊酸鈉的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算每個(gè)時(shí)間點(diǎn)4-氨基水楊酸鈉的溶出量。按處方中的輔料，制備空白包衣片，然后按供試品溶液的配制方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取0．555 6 g/L的對(duì)照品溶液5，10，15，20，30，50 μL 注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0．002 8 X ＋1．09(r=0．999 8)。表明 4-氨基水楊酸鈉進(jìn)樣量在2．778～27．78 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

陰性干擾試驗(yàn):照上述色譜條件，取上述3種溶液，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定輔料在主藥出峰的保留時(shí)間處是否出峰。結(jié)果顯示，對(duì)照品溶液在4-氨基水楊酸鈉的保留時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾，可達(dá)基線分離。表明此法專屬性強(qiáng)。

濾膜吸附試驗(yàn):分別取4-氨基水楊酸鈉對(duì)照品溶液、4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片在4個(gè)介質(zhì)中的溶出液，取尼龍66(孔徑 0．45 μm)作為過(guò)濾頭，分別作高速離心(4 000 r/min，5 min)，過(guò)濾棄去3，5 mL后取濾出液作為供試品溶液，然后測(cè)定4-氨基水楊酸鈉的峰面積，觀察同一濃度值峰面積的變化情況。結(jié)果表明與高速離心相比，此過(guò)濾頭對(duì)4-氨基水楊酸鈉對(duì)照品溶液、4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片溶出液過(guò)濾棄去3 mL后，不會(huì)形成對(duì)主藥的吸附影響。所以可采用尼龍66(孔徑0．45μm)作為過(guò)濾頭過(guò)濾4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片的溶出液與對(duì)照品溶液。

穩(wěn)定性試驗(yàn):分別取4-氨基水楊酸鈉對(duì)照品溶液、4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片在4個(gè)介質(zhì)中相當(dāng)于完全溶出時(shí)10%，100% 溶出量的溶出液，分別在 0，1，2，4，8，12，24 h 時(shí)測(cè)定4-氨基水楊酸鈉的峰面積，觀察峰面積的變化情況。結(jié)果顯示，與0 h比較，4-氨基水楊酸鈉的峰面積在24 h內(nèi)的變化均小于2%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):分別制備4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片在4個(gè)介質(zhì)溶出度測(cè)定的溶出杯中，連續(xù)取樣6份，測(cè)定其4-氨基水楊酸鈉的溶出量。結(jié)果顯示，4-氨基水楊酸鈉的溶出量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，表明此法測(cè)定4-氨基水楊酸鈉溶出度重復(fù)性良好。

圖1 高效液相色譜圖

回收率試驗(yàn):分別配制4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片在4個(gè)介質(zhì)中相當(dāng)于累計(jì)溶出10%，50%，100%的溶出液，每個(gè)濃度配制3份，測(cè)定4-氨基水楊酸鈉的溶出量，計(jì)算其回收率。結(jié)果顯示，4-氨基水楊酸鈉3個(gè)濃度的回收率均在95%～105%間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，表明此法測(cè)定4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片溶出度的回收率高。

2．4 溶出曲線測(cè)定

分別取4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片6片(批號(hào)為20120301)，按上述溶出條件，測(cè)定其溶出曲線，結(jié)果見(jiàn)圖2?？梢?jiàn)，4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片在pH=1．2鹽酸溶液中2 h幾乎不溶出，在pH=6．5磷酸鹽溶液中繼續(xù)運(yùn)轉(zhuǎn)12 h溶出不超5%，而在pH=7．0，7．4磷酸鹽溶液均顯緩慢溶出。

圖2 4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片的溶出曲線

3 討論

測(cè)定藥物在多pH介質(zhì)中的溶出曲線，而非1個(gè)介質(zhì)、1個(gè)時(shí)間點(diǎn)、1個(gè)限度的測(cè)定，采用此手段來(lái)評(píng)價(jià)口服固體制劑，可指示出不同來(lái)源同一制劑的品質(zhì)差距，從而為臨床療效的差距提供佐證。

本研究以腸溶型和滲透型丙烯酸樹(shù)脂制備pH依賴的緩釋結(jié)腸定位給藥系統(tǒng)，這一制劑的體外評(píng)價(jià)方法可根據(jù)胃腸道各區(qū)段pH的不同選擇釋放介質(zhì)，根據(jù)制劑在各區(qū)段的停留時(shí)間選擇釋放時(shí)間。Gupta等[2]建立了pH和時(shí)間雙重機(jī)制控制的結(jié)腸定位給藥系統(tǒng)，其體外評(píng)價(jià)方法為將制劑在pH=1．2的鹽酸中釋放2 h，再分別于 pH=6．5，7．0，7．5 的磷酸鹽緩沖液中繼續(xù)釋放12 h。傅崇東等[3-4]制備了pH和時(shí)間雙重控制的結(jié)腸靶向微丸和時(shí)控型結(jié)腸靶向微丸，模擬胃腸道各區(qū)段最高和最低pH變化的釋藥條件進(jìn)行微丸的釋放研究。本研究參考以上原理制備了pH和時(shí)間雙重控制的4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片。

采用高效液相色譜法測(cè)定4-氨基水楊酸鈉口服結(jié)腸定位包衣片的溶出曲線，結(jié)果表明，此制劑的腸溶效果符合預(yù)期，在pH=1．2鹽酸溶液、pH=6．5磷酸鹽溶液中2 h溶出甚少，而在pH=7．0，7．4 磷酸鹽溶液中緩慢溶出。

[1]溫忠慧，歐陽(yáng)欽．4-氨基水楊酸治療潰瘍性結(jié)腸炎[J]．中華內(nèi)科雜志，1997，36(7):470-471．

[2]Gupta VK，Beckert TE，Price JC．A novel pH and time-based multi-unit potential colonic drug delivery system．I．Development[J]．Int J Pharm，2001，213(1-2):83-91．

[3]傅崇東，徐惠南，張 瑜．pH依賴-緩釋型美沙拉秦結(jié)腸靶向小丸的制備與體外評(píng)價(jià)[J]．中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2000，31(12):541．

[4]傅崇東，徐惠南，張 瑜．5-氨基水楊酸結(jié)腸定位給藥時(shí)控微丸的制備與體外釋放[J]．藥學(xué)學(xué)報(bào)，2000，35(5):389．