金 鑫，杜振中

(浙江眾益制藥股份有限公司，浙江 麗水 323000)

氨酚羥考酮片為對乙酰氨基酚與鹽酸羥考酮組成的復(fù)方制劑，臨床上主要用于各種原因引起的中、重度，急、慢性疼痛?，F(xiàn)行氨酚羥考酮片標準收載于美國藥典和中國生物制品檢定所進口藥品復(fù)核標準(28)中，上述標準中均未對有關(guān)物質(zhì)進行控制。本文參考相關(guān)文獻，建立了檢測氨酚羥考酮片有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜法。結(jié)果表明，此方法準確可靠、重復(fù)性好、專屬性強，有利于更好地控制該藥品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，DAD檢測器。氨酚羥考酮片(浙江眾益制藥股份有限公司，批號分別為 130104，130105，130106);鹽酸羥考酮對照品(浙江省食品藥品檢驗所，含量為99．5%);甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀、氫氧化鉀、正壬胺、磷酸均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5．0 μm);流動相:磷酸鹽溶液[(1 000 mL水中，加入950 mg磷酸二氫鉀，加1 mL磷酸，振搖溶解，加入1 mL正壬胺，振搖得澄清溶液，用氫氧化鉀試液調(diào) pH 至(4．9±0．1)]-甲醇(90∶10);柱溫:40℃;檢測波長:214 nm;流速:1．0 mL/min;進樣量:10 μL。

2．2 測定方法

取樣品粉末適量(約相當于羥考酮5 mg)，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相適量超聲使其完全溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液;另精密量取供試品溶液1 mL置100 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。精密量取對照溶液10 μL注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰高約為滿量程的10%～25%，再精密量取上述2種溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜至對主峰保留時間的2倍，供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰(扣除輔料峰)，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積(1．0%)。

2．3 專屬性試驗

圖1 氨酚羥考酮片有關(guān)物質(zhì)高效液相色譜圖

稱取空白輔料(按處方配比混合)適量，置100 mL容量瓶中，加流動相適量，超聲使其溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得空白輔料溶液。稱取樣品粉末適量(約相當于羥考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加流動相適量超聲使其溶解完全并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得未破壞供試品溶液。稱取樣品粉末適量(約相當于羥考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加入1 mol/L鹽酸溶液5 mL放置約4 h，另加1 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL中和后，加流動相適量超聲使其溶解完全并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得酸破壞溶液。稱取樣品粉末適量(約相當于羥考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加入1 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL放置約4 h，另加1 mol/L鹽酸溶液5 mL中和后，加流動相適量超聲使其溶解完全并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得堿破壞溶液。稱取樣品粉末適量(約相當于羥考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加入5%過氧化氫溶液5 mL放置約4 h，加流動相適量超聲使其溶解完全并稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得氧化破壞溶液。取供試品溶液，水浴90 min，濾過，即得高溫破壞溶液。取供試品溶液，強光(4 500 lx)下照射24 h，濾過，即得光照破壞溶液。

分別取上述濾液各10 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，本品主藥與其降解物質(zhì)的分離效果令人滿意，輔料在此條件下無干擾?？梢?，此法可將氨酚羥考酮片與其有關(guān)物質(zhì)及可能降解的雜質(zhì)完全分離。

2．4 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，12 h 時進樣測定。計算峰面積的 RSD為1．32%。表明本品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2．5 檢出限確定

取鹽酸羥考酮對照品制成1 g/L的溶液依次稀釋后進樣測定，鹽酸羥考酮質(zhì)量濃度為0．005 μg/mL時，信噪比 S/N≈3．0，最低檢出限為0．05 ng。

2．6 樣品含量測定

取樣品粉末適量(約相當于羥考酮5 mg)，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加流動相適量超聲使其溶解完全并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液;另精密量取供試品溶液1 mL置100 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。照擬訂方法測定，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，批號分別為130104，130105，130106的三批樣品總雜質(zhì)含量分別為0．029%，0．025%，0．028%，均小于 1．0% 。

3 討論

取鹽酸羥考酮對照品溶液適量，加流動相稀釋后，在190～300 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果在214 nm處有最大吸收，故選擇214 nm為測定波長。

在流動相條件確定與優(yōu)化時，研究了流動相中pH對主峰出峰時間的影響。結(jié)果顯示，當磷酸鹽溶液(氫氧化鉀試液調(diào)pH至6．0)-甲醇(90∶10)時，主峰出峰時間過快，雜質(zhì)峰不能很好分離;當磷酸鹽溶液(氫氧化鉀試液調(diào)pH至4．0)-甲醇(90∶10)時，主峰出現(xiàn)明顯拖尾現(xiàn)象;當磷酸鹽溶液(氫氧化鉀試液調(diào)pH至4．9)-甲醇(90∶10)時，主峰保留時間適中，雜質(zhì)與主峰分離效果好。因此，最終選定磷酸鹽溶液(氫氧化鉀試液調(diào)pH至4．9)-甲醇(90 ∶10)為流動相。