王克畏 王元宇 葉再元

Oct4在胃癌組織中的表達及其與胃癌浸潤轉移及預后的關系

王克畏 王元宇 葉再元

目的 探討干細胞標記物Oct4在胃癌組織中的表達及其與胃癌浸潤、轉移及預后的關系。 方法 應用免疫組織化學SP法檢測206例胃癌組織和其中40例癌旁非腫瘤胃黏膜Oct4的表達,并對Oct4表達水平與胃癌臨床病理參數(shù)及患者生存率的關系作統(tǒng)計分析。 結果 在40例非腫瘤胃黏膜組織中，13例（32.5%）Oct4表達陽性，均為低表達。在206例胃癌組織中，155例（75.2%）存在Oct4表達，其中高表達126例（61.17%），Oct4在胃癌組織中的表達水平明顯高于癌旁非腫瘤胃黏膜組織（P＜0.05）。Oct4蛋白的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移及TNM分期有關（均P＜0.05），而與患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小和組織學類型無關（均P＞0.05）。I、Ⅱ和Ⅲ期Oct4高表達胃癌患者5年生存率顯著低于Oct4低表達者（均P＜0.05），Ⅳ期胃癌患者的5年生存率與Oct4表達水平無關（均P＞0.05），多變量分析表明Oct4表達、淋巴結轉移、遠處轉移和TNM分期是胃癌患者獨立的預后因素。 結論 Oct4的表達與胃癌淋巴結和遠處轉移及預后相關，Oct4可以作為胃癌預后判斷有價值的分子標記物。

胃癌 Oct4 進展 預后

胃癌發(fā)病率踞世界各類腫瘤的第4位，死亡率踞第2位。盡管外科手術和放化療技術不斷發(fā)展，我國胃癌的病死率仍居于各種腫瘤之首，5年生存率仍低于40%，大多數(shù)患者確診時已經是Ⅲ或Ⅳ期，淋巴結轉移率高達50%～75%，轉移是導致胃癌患者死亡的主要原因[1]。Octamer-4（Oct4）是一種轉錄因子，在胚胎和成人干細胞表達，并且與胚胎干細胞和生殖細胞的多潛能性、增殖潛力和自我更新特性相關[2]。Oct4在生殖細胞腫瘤表達的研究已有報道[3]，但是在實體腫瘤的表達的研究仍很少。本研究使用免疫組織化學技術分析Oct4在胃癌及非腫瘤胃黏膜組織中的表達，明確Oct4在胃癌及非腫瘤胃黏膜組織中的表達情況及其與胃癌臨床病理參數(shù)和患者預后的關系。

1 對象和方法

1.1 研究對象 收集本院2001-01—2005-12收治的胃癌患者206例，診斷均經病理檢查證實，術前未經任何治療。其中男142例，女64例，男女比例為2.22∶1；年齡30～85歲，中位年齡為62歲；腫瘤位于賁門42例，胃體77例，胃竇87例；腫瘤直徑＜5cm 99例，≥5cm 107例。按WHO 2002年胃癌分類標準診斷為乳頭狀腺癌5例，管狀腺癌147例，黏液腺癌15例，印戒細胞癌39例；高、中分化腺癌65例，低、未分化癌141例；TNM分期Ⅰ期胃癌9例，Ⅱ期胃癌54例，Ⅲ期胃癌116例，Ⅳ期胃癌27例；有遠處轉移27例，無遠處轉移179例。并取其中40例患者的距癌邊緣5 cm以上的無增生或不典型增生的非腫瘤胃黏膜作為對照。隨訪起止日期為2001-01—2010-12，生存期的計算從手術日期到隨訪截止日期，或由于復發(fā)、轉移而死亡的日期為止。本研究得到醫(yī)院倫理委員會同意和患者知情同意。

1.2 檢測材料 山羊抗人Oct4抗體（SC-8629）購于Santa Cruz公司，廣譜二抗試劑盒及DAB顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 免疫組織化學染色方法和結果判定 按文獻[4]進行，Oct4以細胞質和細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，根據(jù)染色程度和染色細胞百分率進行評定和分析：基本不著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者為2分，著色深者為3分；著色細胞占計數(shù)細胞的百分率≤5%記0分，6%～25%記1分，26%～50%記2分；≥51%記3分。將每張切片的染色程度與染色細胞百分率得分相乘，其乘積為最后得分。0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～6分為中等陽性（++），＞6分為強陽性（+++）。在統(tǒng)計分析中，將表達-或+劃分為低表達組，++～+++劃分為高表達組。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率檢驗，對生存數(shù)據(jù)采用Kaplan-Meier法分析并繪制生存曲線，差異性采用Log-rank檢驗，并用Cox風險模型進行獨立預后因素分析。

2 結果

2.1 Oct4在正常胃黏膜組織和胃癌組織中的表達 在40例非腫瘤胃黏膜組織中，13例（32.5%）Oct4表達陽性，均為低表達。206例胃癌組織中，155例（75.2%）Oct4表達陽性，其中高表達126例（61.17%），主要在細胞核和細胞質表達（圖1）。

圖1 免疫組織化學檢測Oct4在非腫瘤胃黏膜及胃癌組織中的不同表達強度（A：非腫瘤胃黏膜組織陰性表達；B：中分化胃腺癌陽性表達；C：低分化胃腺癌陽性表;SP法，×100）

2.2 Oct4表達與胃癌臨床病理指標的關系 見表1。

由表1可見，Oct4的表達強度與胃癌分化程度、浸潤深度、相關淋巴結轉移及遠處轉移相關（均P＜0.05），而與患者的性別、腫瘤部位、腫瘤直徑大小、組織學類型無關（均P＞0.05）。T3和T4、有淋巴結轉移、有遠處轉移、Ⅲ期和Ⅳ期胃癌組織Oct4表達明顯強于T1和T2、無淋巴結轉移、無遠處轉移、Ⅰ期和Ⅱ期胃癌組織的表達。

2.3 Oct4表達與患者預后的關系 由于Ⅰ期患者太少，行生存分析時將Ⅰ、Ⅱ期合并，Ⅰ期和Ⅱ期Oct4低表達患者5年生存率為71.43%（25/35），高表達者為53.57%（15/28），兩者的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，圖2）；Ⅲ期Oct4低表達患者5年生存率為33.3%（13/39），高表達者為9.09%（7/77），兩者的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，圖3）；Ⅳ期Oct4低表達患者5年生存率為0（0/6），高表達者為4.76%（1/21），兩者的差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。獨立預后因素分析表明，Oct4表達、淋巴結轉移、遠處轉移和TNM分期均為胃癌的獨立預后因素（均P＜0.05）。

3 討論

Oct4是含POU同源結構域蛋白家族的成員之一，參與胚胎干細胞和生殖細胞的多潛能性、特異細胞類型終末分化和胚胎的早期形成[5]。Oct4在成人干細胞高表達，并參與了腫瘤的形成[6]。Okamoto等[7]研究表明，Oct4蛋白高表達與鼠胚胎干細胞源行腫瘤惡性潛能呈正相關。Oct4在化生的胰腺導管表達顯著高于正常胰腺腺泡和胰腺癌組織（P＜0.05）[8]。Oct4高表達導致生長因子的不平衡激活、促進細胞增殖，最終導致惡性轉化[9]。Oct4的表達與良性前列腺疾病和高級別前列腺上皮內瘤變顯著相關，而與前列腺癌無關[10]。Oct4在不同的組織存在不同程度的表達，在有些腫瘤組織中高表達，也有一些腫瘤組織中低表達。本研究表明Oct4在胃癌組織中高表達（206例中126例陽性，達61.17%)，并主要在細胞核和細胞質表達。

表1 Oct4表達與臨床病理指標間的關系[例（%）]

圖2 Ⅰ期和Ⅱ期胃癌患者生存曲線

圖3 Ⅳ期胃癌患者生存曲線

目前關于Oct4在腫瘤組織中的表達與腫瘤的分化、浸潤、轉移的研究很多，各研究結果之間存在著很大的差異。Oct4A mRNA在肝癌組織中高表達，其表達水平與腫瘤浸潤表型顯著相關，Oct4A表達是肝癌獨立預后因素之一[11]。Oct4在膀胱癌組織中表達，Oct4陽性率與腫瘤分級、復發(fā)和轉移無顯著相關性[12]。上述研究表明Oct4在腫瘤組織中高表達，其表達與腫瘤的分化、浸潤和轉移相關。本研究結果表明，Oct4的表達強度與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移及TNM分期相關，Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ期Oct4低表達患者5年生存率顯著高于高表達者，而在Ⅳ期，Oct4表達與患者的預后無相關性；TNM分期是影響預后的主要因素，由于本研究Ⅳ期例數(shù)比較少，Oct4表達與Ⅳ期患者的預后有無相關性有待進一步大樣本量來進行驗證。Oct4在胃癌組織中的表達及其臨床意義的研究也有文獻報道，認為Oct4在胃癌組織中的表達水平顯著高于配對的非腫瘤組織、萎縮性胃炎和胃潰瘍組織的表達水平，Oct4在胃癌組織中的表達與腫瘤的分化相關，而與患者的性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期、浸潤深度和淋巴結轉移不相關，Oct4是腫瘤發(fā)生、進展和分化的潛在標記物[13]。這一結論與我們的研究結果存在差異，原因可能是他們研究的例數(shù)較少。但是Saigusa等[14]和Zhang等[15]的研究結果表明，Oct4與腫瘤分化、分期、復發(fā)和預后相關，與我們的結果一致。Saigusa等[14]的研究結果表明，Oct4的表達可以預測術前接受放化療直腸癌患者遠處復發(fā)和不良預后。Oct4的表達水平在正常上皮（卵巢上皮和輸卵管上皮）、良性和交界性囊腺瘤以及漿膜下卵巢癌逐漸增加，Oct4高表達與漿膜下腺癌FIGO分期和組織學分級相關，Oct4的表達參與了漿膜下卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展，有可能成為診斷和預測漿膜下卵巢癌的標記物[15]。

綜上所述，Oct4在胃癌分化及浸潤轉移過程中起重要作用，并與胃癌患者的預后密切相關，理論上可作為胃癌診斷和預后判斷的分子標記物。

[1]詹文華，韓方海.我國胃癌外科治療的現(xiàn)狀和思考[J].實用腫瘤雜志, 2008,23(8):91-93.

[2]Nichols J,Zevnik B,Anastassiadis K,et al.Formation of pluripotent stem cells in the mammalian embryo depends on the POU transcription factor Oct4[J].Cell,1998,95(3):379-391.

[3]Looijenga L H,Stoop H,de Leeuw H P,et al.POU5F1(OCT3/4) identifies cells with pluripotent potential in human germ cell tumors[J].Cancer Res,2003,63(9):2244-2250.

[4]Fukuoka J,Fujii T,Shih J H,et al.Chromatin remodeling factors and BRM/BRG1 expression as prognostic indicators in nonsmall cell lung cancer[J].Clin Cancer Res,2004,10:4314.

[5]Cheng L,Sung M T,Cossu-Rocca P,et al.OCT4:biological functions and clinical applications as a marker of germ cell neoplasia[J].J Pathol,2007,211(1):1-9.

[6]Tai M H,Chang C C,Kiupel M.Oct4 expression in adult human stem cells:evidence in support of the stem cell theory of carcinogenesis[J].J Pathol,2005,26(2):495-502.

[7]Okamoto K,Okazawa H,Okuda A,et al.A novel octamer binding transcription factor is differentially expressed in mouse embryonic cells[J].Cell,1990,60(3):461-472.

[8]Wen J,Park J Y,Park K H,et al.Oct4 and Nanog expression is associated with early stages of pancreatic carcinogenesis[J]. Pancreas,2010,39(5):622-626.

[9]Hochedlinger K,Yamada Y,Beard C,et al.Ectopic expression of Oct-4 blocks progenitor-cell differentiation and causes dysplasia in epithelial tissues[J].Cell,2005,121(3):465-477.

[10]Ugolkov A V,Eisengart L J,Luan C,et al.Expression analysis of putative stem cell markers in human benign and malignant prostate[J].Prostate,2011,71(1):18-25.

[11]Huang P,Qiu J,Li B,et al.Role of Sox2 and Oct4 in predicting survival of hepatocellular carcinoma patients after hepatectomy [J].Clin Biochem,2011,44(8-9):582-589.

[12]Xu K,Zhu Z,Zeng F.Expression and significance of Oct4 in bladder cancer[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci, 2007,27(6):675-677.

[13]Chen Z,Xu W R,Qian H,et al.Oct4,a novel marker for human gastric cancer[J].J Surg Oncol,2009,99(7):414-419.

[14]Saigusa S,Tanaka K,Toiyama Y,et al Correlation of CD133, OCT4,and SOX2 in rectal cancer and their association with distant recurrence after chemoradiotherapy[J].Ann Surg Oncol,2009,16(12):3488-3498.

[15]Zhang J,Li Y L,Zhou C Y,et al.Expression of octamer-4 in serous and mucinous ovarian carcinoma[J].J Clin Pathol,2010, 63(10):879-883.

Expression of Oct4 in gastric cancer and its clinicopathological significance

WANG Kewei,WANG Yuanyu,YE Zaiyuan.Department

of Surgery,Zhejiang Provincial People’s Hospital,Hangzhou 310014,China

【 Abstract】 Objective To investigate the expression of Octamer-4(Oct4)in gastric cancer and its relationship with tumor invasion,metastasis and prognosis. Methods Immunohistochemistry was used to analyze the expression of Oct4 in 206 cases of gastric cancer. Results Oct4 protein was detected in 75.2% (155/206)of gastric cancer cases,including 61.17%(126/206) with high expression;while Oct4 was detected in 32.5%(13/40)non-cancerous mucosa,and was expressed in low levels.Compared to non-cancerous tissue the Oct4 expression was higher in gastric cancer tissue(P＜0.05).The expression of Oct4 was correlated with histological differentiation,depth of invasion,lymph node metastasis,distant metastasis and TNM stage of gastric cancer.In stages I,II and III cancer,the 5-year survival rate of patients with a high expression of Oct4 was significantly lower than those with low expression.In stage IV,Oct4 expression was not correlate with the 5 year survival rate of patients.Multivariate analysis suggested that lymph node metastasis,distant metastasis,TNM stage,and up-regulation of Oct4 expression were independent prognostic indicators for the disease. Conclusion Expression of Oct4 in gastric cancer is significantly associated with lymph node metastasis,distant metastasis and poor prognosis.Oct4 may be an useful markers for progression and prognosis of the cancer.

Gastric carcinoma Oct4 Progression Prognosis

2011-12-02）

（本文編輯：沈叔洪）

310014 杭州，浙江省人民醫(yī)院肝膽胰外科

王克畏，E-mail:wangkewei560818@126.com