程　鵬，李光遠(yuǎn)，王　蕾，李　旭，張　紅，李毅敏

(1.天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津　300020；　2.天津和杰醫(yī)療器械有限公司，天津　300384)

為保障婦女的生殖健康，對宮內(nèi)節(jié)育器進(jìn)行臨床前安全性評價(jià)，是宮內(nèi)節(jié)育器應(yīng)用于臨床前的重要內(nèi)容。通過對動(dòng)物進(jìn)行生殖毒性實(shí)驗(yàn)觀察，考查了解固定式宮內(nèi)節(jié)育器對動(dòng)物性功能、發(fā)情周期、交配行為、受孕、分娩、授乳和斷乳的影響，以及固定式宮內(nèi)節(jié)育器對子代生長發(fā)育及對幼鼠發(fā)病率、死亡率的影響，判斷固定式宮內(nèi)節(jié)育器是否具有潛在的生殖毒性，以降低臨床研究受試者和節(jié)育器上市后使用人群的使用風(fēng)險(xiǎn)。

1　材料與方法

1.1材料

1．1．1試驗(yàn)樣品含吲哚美辛硅橡膠的固定式宮內(nèi)節(jié)育器，由天津和杰醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)，用生理鹽水制備樣品浸提液，每1 ml生理鹽水浸提樣品量為：高劑量組0.2 g，中劑量組0.02 g，低劑量組1.90 mg，置37 ℃ 浸提72 h。

1．1．2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，購于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部，SPF級(jí)，鼠齡4～5周齡，體重17～23 g，未交配，雌性120只，雄性60只。

1.2實(shí)驗(yàn)步驟按體重分層隨機(jī)分配的方法將小鼠分為空白對照組、高劑量組(10 g/kg)、中劑量組(1 g/kg)和低劑量組(95.0 mg/kg，為臨床人體用量的等效劑量)。各劑量組雌、雄小鼠于合籠前8周在飲用水中按劑量以50 ml/kg加入浸提液，對照組給予同量的生理鹽水。全部動(dòng)物正常飼養(yǎng)并每日觀察，每周稱重1次，每周稱量飼料消耗量，雌、雄小鼠飼喂8周后，各組小鼠按2只雌鼠、1只雄鼠合籠，次日檢查陰栓，發(fā)現(xiàn)陰栓后放另盒飼養(yǎng)，并標(biāo)記檢出陰栓日期，定為妊娠0日。共合籠3周。合籠后雄性小鼠繼續(xù)給予浸提液至交配后3周，雌性小鼠至子代出生后3周斷乳為止。3周后處死雄鼠做大體解剖，觀察主要臟器及生殖器官，取睪丸、附睪、儲(chǔ)精囊和前列腺組織固定，做病理學(xué)觀察。根據(jù)一代生殖試驗(yàn)(OECD 415)的要求，應(yīng)保證各組有16～20只孕鼠，本項(xiàng)試驗(yàn)按照查出陰栓的先后次序，各組取前20只孕鼠繼續(xù)給予受試液，待孕鼠生產(chǎn)、母鼠哺乳，直至仔鼠生長到第21 d。將全部母鼠處死，做大體解剖，觀察主要臟器及生殖器官。取母鼠陰道、子宮、卵巢組織固定，做病理學(xué)觀察。

1.3觀察指標(biāo) 雄鼠和雌鼠體重增長情況，孕鼠體重增長情況、受孕率、生育率，幼仔出生存活率、幼鼠哺育成活率、雌雄比率和仔鼠體重變化。

1.4統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，對空白對照組、三個(gè)樣品劑量組雌雄小鼠的受孕率、生育率、仔鼠個(gè)數(shù)、活胎率、死胎率及雌雄比率資料用χ2檢驗(yàn)；體重等計(jì)量資料用t檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1合籠前各劑量組雄性動(dòng)物各時(shí)間段的體重增長情況合籠前各劑量組雄性動(dòng)物各時(shí)間段的體重，與對照組相比無明顯差別；高劑量組動(dòng)物在給樣后第6周死亡1只，無法判斷與試驗(yàn)樣品的使用有關(guān)，也可能與動(dòng)物本身的個(gè)體差異有關(guān)，故不考慮是毒性作用所致，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.2合籠前各劑量組雌性動(dòng)物的體重增長情況合籠前各劑量組雌性動(dòng)物的體重隨給樣時(shí)間的持續(xù)，個(gè)別數(shù)值略高于對照組，與對照組間雖有差異(P<0.05或P<0.01)，但不考慮是毒性作用所致，結(jié)果見表2。

表1　合籠前雄性動(dòng)物體重增長情況　g

表2　合籠前雌性動(dòng)物體重增長情況　g

*與對照組比較，P<0.05, **P<0.01

2.3合籠后各劑量組雄性動(dòng)物的生育率比較合籠后各劑量組雄性動(dòng)物的生育率未見與試驗(yàn)樣品相關(guān)的異常改變，與對照組相比無明顯差別, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

2.4合籠后各劑量組雌性動(dòng)物的受孕情況合籠后各劑量組雌性動(dòng)物的受孕率未見與試驗(yàn)樣品相關(guān)的異常改變，與對照組相比無明顯差別, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

2.5各組動(dòng)物活產(chǎn)情況中、高劑量組動(dòng)物的活產(chǎn)率明顯低于空白對照組，與對照組相比有差異(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。

表3　各組雄性動(dòng)物生育率比較

表4　各組雌性動(dòng)物受孕的情況

表5　各組動(dòng)物活產(chǎn)情況

*與對照組比較，P<0.05

2.6各劑量組仔鼠體重變化情況逐漸增加，個(gè)別數(shù)值略高于對照組，與空白對照組間雖有差異(P<0.05或P<0.01)，但不考慮是毒性作用所致，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

2.7病理學(xué)檢查取雄鼠睪丸、附睪、儲(chǔ)精囊、前列腺，母鼠陰道、子宮、卵巢組織固定，病理學(xué)觀察結(jié)果顯示，雄鼠睪丸內(nèi)曲精細(xì)管各級(jí)生精細(xì)胞存在，腔中可見發(fā)育良好的精子細(xì)胞；附睪小管上皮細(xì)胞排列整齊，腔中可見發(fā)育良好的精子細(xì)胞；前列腺各部腺體未見增生，上皮細(xì)胞未見變性或壞死。雌鼠的卵泡及黃體、白體均未見改變；子宮腺體未見增生、萎縮、變性和壞死；陰道上皮細(xì)胞未見變性、壞死，黏膜層的結(jié)締組織未見明顯的充血、水腫。

表6　各組仔鼠體重變化 　g

與對照組比較，*P<0.05, **P<0.01

3　討論

宮內(nèi)節(jié)育器(IUD)因其高效、安全、價(jià)格低廉，已成為我國婦女使用率最高的避孕工具之一。含銅宮內(nèi)節(jié)育器所致的疼痛、出血為其主要副作用，也是影響使用順應(yīng)性的重要原因。吲哚美辛具有抑制前列腺素合成酶、阻止前列腺素(PG) 合成、解熱鎮(zhèn)痛及抗炎作用，提高了IUD使用的子宮相容性。含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器的避孕效果和藥效學(xué)及機(jī)理研究均有大量報(bào)道，且其遺傳毒理學(xué)的安全性均需在上市前進(jìn)行評價(jià)[1]。IUD的使用目的為避孕，但其對使用者生殖功能的影響仍需要進(jìn)行評價(jià)。

本項(xiàng)研究以臨床使用劑量為基礎(chǔ)，依據(jù)毒理學(xué)研究原則設(shè)計(jì)的三個(gè)受試劑量[2，3]，其結(jié)果可最大限度地覆蓋該節(jié)育器的生殖毒性作用。由結(jié)果可以看出，相當(dāng)于在臨床使用劑量(低劑量)下，受試組的各項(xiàng)生殖毒性指標(biāo)均與空白對照組無顯著差異，而中、高劑量(分別相當(dāng)于人體使用等效劑量的10倍和100倍)孕鼠的活產(chǎn)率明顯低于對照組。這除了與劑量遠(yuǎn)高于臨床使用量有關(guān)外，也可能與實(shí)驗(yàn)中每日制備的IUD浸提液相當(dāng)于IUD放置初期銅離子的“爆釋”現(xiàn)象有關(guān)[4]?？傊卷?xiàng)研究的結(jié)果顯示，在相當(dāng)于人體使用劑量的條件下含吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器對生殖過程沒有明顯的毒性作用，具有一定的生殖安全性。

1劉昌官，李恕香，劉曉璦，等. 吲哚美辛宮內(nèi)節(jié)育器的主要藥效學(xué)研究[J].生殖與避孕，2000，20(3)：165

2GB/T 16886.3-2008，醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià)第3部分：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗(yàn)[S].

3袁伯俊，王治喬主編.新藥臨床前安全性評價(jià)與實(shí)踐[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院出版社，1997：117-151

4吳尚純，鄒燕.宮內(nèi)節(jié)育器應(yīng)用現(xiàn)狀與研究進(jìn)展[J]. 中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2009，25(10)：795