朱光怡　王翠媛　朱丹

摘要：采用與臨床應(yīng)用相同的給藥途徑對小鼠和大鼠分別灌胃給予復(fù)方銀紅滴丸，測定其急性毒性和最大耐受量。結(jié)果表明，在急性毒性試驗中，受藥液濃度及灌胃容積的限制而未能測出半數(shù)致死量（LD50），測定復(fù)方銀紅滴丸對大鼠的的最大耐受量（MTD）為279 g/kg。說明在本試驗條件下，復(fù)方銀紅滴丸對受試動物未見明顯的急性毒性，按急性毒性分類，屬無毒級，表明該制劑具有良好的安全性。

關(guān)鍵詞：復(fù)方銀紅滴丸；最大耐受量；急性毒性

中圖分類號：S853.9 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2013）09-0013-02

復(fù)方銀紅滴丸是根據(jù)中醫(yī)藥學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論，精選紅花、金銀花等道地藥材，經(jīng)現(xiàn)代工藝技術(shù)提煉精制而成的復(fù)方中藥制劑，其應(yīng)用簡單、經(jīng)濟，對治療奶牛乳房炎有獨特療效。為客觀、科學(xué)地評價復(fù)方銀紅滴丸的安全性，并為該產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)，現(xiàn)對其進行急性毒性研究。

1 材料與方法

1.1 受試藥物

復(fù)方銀紅滴丸，自制（生產(chǎn)批號：YH-001、YH-002、YH-003），每克含生藥干膏0.63 g。臨用前用蒸餾水配成最大濃度（0.667 g生藥/mL）的混懸液。

1.2 受試動物

健康KM種小鼠20只，清潔級，體重（20.0±2.0 ）g，雌雄各半，由佳木斯大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：19-082。

健康Wistar大鼠20只，清潔級，體重（200.0±10 .0）g，雌雄各半，由佳木斯大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：19-085。

1.3 動物飼料

配方的營養(yǎng)成分組成：水分8.53%，粗蛋白25.10%，精蛋白24.6%，粗脂肪7.33%，粗灰分7.50%，精纖維21.4%，無氮浸出物48.4%，能量18.17 MJ/kg。

1.4 飼養(yǎng)條件

空調(diào)動物室，溫度（22±2）℃，相對濕度（60±5）%，動物每籠5只，定時定量添加飼料，自由飲水，每周更換墊料3次。

1.5 試驗方法

試驗在空調(diào)恒溫實驗室進行，室內(nèi)恒溫25 ℃，光線充足，排風(fēng)扇排風(fēng)，空氣流通良好，環(huán)境安靜，清潔，對試驗結(jié)果影響較小。試驗前1周購進小鼠，強化飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境。

1.5.1 測定復(fù)方銀紅滴丸對小鼠的半數(shù)致死量（LD50） 選取健康小鼠20只雌雄各半，給藥前禁食14 h，不禁水。按文獻方法[1，2]隨機分組，實驗動物灌胃給予復(fù)方銀紅滴丸，以藥物的最大濃度（50%）和動物能耐受的最大容積（0.8 mL/20 g）在24 h內(nèi)連續(xù)灌胃給藥2次（每日上午8：00、下午14：00各灌胃一次），每次0.4 mL。嚴密觀察小鼠給藥后的反應(yīng)，逐日觀察并記錄小鼠的行為活動、步態(tài)、皮毛、呼吸、大小便、食欲及攝食量、體重、鼻、眼、口腔有無異常分泌物等情況及動物死亡數(shù)，試驗后即刻及連續(xù)觀察7日，求出半數(shù)致死量，并確定急性毒性分級。

1.5.2 測定復(fù)方銀紅滴丸對大鼠的的最大耐受量（MTD） 選取健康大鼠20只雌雄各半，給藥前禁食12 h，不禁水。按文獻方法[3]隨機分組，實驗動物灌胃給予復(fù)方銀紅滴丸，最大體積2 mL/20 g（劑量279 g/kg，相當于臨床日用藥劑量的386.2倍），上下午各灌胃1次。給藥后觀察動物的體征、行為活動、精神狀態(tài)等，連續(xù)觀察16 d，定期稱重，計算體重變化，并同對照組作比較。于第16天處死動物，尸檢，肉眼觀察主要臟器的外觀變化。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差表示，用統(tǒng)計軟件SPSS 12.0處理。

2 結(jié)果與分析

試驗觀察中可見，小鼠灌胃給予復(fù)方銀紅滴丸后，出現(xiàn)自主活動減少、閉眼、臥伏等現(xiàn)象，食欲有所下降，糞便呈褐色，所有體征在給藥2 h后基本恢復(fù)正常。在連續(xù)7 d中一般情況良好，無明顯異常癥狀；步態(tài)活動、行為、精神狀態(tài)正常，毛色光亮，攝食飲水情況良好，無震顫、扭體及翹尾，鼻、眼、口腔無異常分泌物，未顯現(xiàn)呼吸興奮及抑制現(xiàn)象，大小便正常。7 d內(nèi)小鼠無一例死亡，亦未見明顯毒性反應(yīng)；7 d后斷頸處死實驗小鼠，經(jīng)解剖和尸檢未發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟器官異常。

大鼠在灌胃給予復(fù)方銀紅滴丸后，亦出現(xiàn)自主活動減少的現(xiàn)象，然后進入閉眼、靜臥不動狀態(tài)，食欲有所下降，呼吸無明顯變化，糞便呈褐色，所有體征在給藥1 h后基本恢復(fù)正常。同對照組比較，大鼠在給藥后1～16 d內(nèi)的體重變化無顯著性差異（表1）。16 d內(nèi)無動物死亡，經(jīng)解剖和尸檢未發(fā)現(xiàn)大鼠主要臟器因毒性作用引起的改變。

3 小結(jié)與討論

小鼠灌胃給予復(fù)方銀紅滴丸未引起明顯的毒性反應(yīng)，無動物死亡，按急性毒性分級標準規(guī)定，該受試物屬于無毒級。大鼠灌胃給予復(fù)方銀紅滴丸的最大耐受量為279 g/kg（折合原生藥總量計），相當于臨床用量386.2倍。急性毒性試驗結(jié)果表明復(fù)方銀紅滴丸的毒性低，臨床用藥安全。

參考文獻：

[1] 謝秀瓊.中藥新制劑開發(fā)與應(yīng)用[M].第二版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000.540.

[2] 陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].第一版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993.112-130.

[3] 張均田.現(xiàn)代藥理實驗方法學(xué)[M].第一版.北京：北京醫(yī)科大學(xué)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998.1816-1821.