李瑜 張振新

【摘要】本文分析了聚乙二醇6000-硫酸銨雙水相體系對維生素 B3的最佳萃取條件，并結(jié)合熒光法對其進行測定。且在最佳萃取條件下進行熒光掃描確定最佳激發(fā)/發(fā)射峰為 λex /em=319.0nm/392.0nm。聚乙二醇 6000-硫酸銨雙水相體系對維生素B3的一次性萃取率在 91%～93%之間，線性范圍8.0×10-6～2.0×10-4g/L，檢出限為 1.3×10-7g/L。該方法萃取率高、線性范圍寬、檢出限低，可維生素B3的分析測定。

【關(guān)鍵詞】雙水相萃?。粺晒夥?；維生素【Abstract】

【中圖分類號】R927 【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1004-4949（2013）09-214-01

維生素B3又稱尼克酸、煙酰胺、煙酸。維生素B3能促進血液循環(huán)，降低血壓，降低膽固醇和甘油三酯，減輕胃腸障礙.減輕美尼爾綜合癥的癥狀等。在動物肝臟、腎臟、瘦肉、魚卵、麥芽、全麥制品、花生、無花果等中富含維生素B3。在維生素B3含量測定的方法中，采用雙水相萃取、熒光法測定維生素B3的所占比例很小。本文選用聚乙二醇6000-硫酸銨雙水相萃取、熒光法測定維生素B3，達到提高靈敏度的目的，從而進一步完善了維生素的分析與測定，為雙水相的運用拓展了范圍。

1實驗

1.1儀器和試劑：pHS-3C 數(shù)字型精密酸度計（上海虹益儀器廠）；熒光光度計FP-8500（日本島津）；FA2004型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）

維生素B3標(biāo)準(zhǔn)溶液6.0×10-4g/L（避光保存），聚乙二醇2000；聚乙二醇6000；氯化鈉；硫酸鈉；碳酸鈉；磷酸二氫鈉；硫酸銨；磷酸。聚乙二醇為化學(xué)純，其余所用試劑均為分析純。

1.2實驗與方法：在60.0mL 的分液漏斗中依次加入聚乙二醇 6000 溶液（30%）6.0mL、磷酸-磷酸氫二鈉緩沖液1.0mL、維生素B3標(biāo)準(zhǔn)溶液、硫酸銨1.0g、振蕩1.5min、靜置 8.0min，分離上下相，在 λex/λem=319.0nm/392.0nm 處測量上層水相中維生素B3的熒光值。將熒光值代入回歸方程，計算維生素 B3的含量。

2結(jié)果與討論

2.1熒光光譜：以熒光光度計 FP-8500（激發(fā)/發(fā)射縫寬 5nm/5nm）分別對維生素B3水溶液以及含有維生素B3的雙水相進行掃描，結(jié)果顯示，在聚乙二醇 6000～硫酸氨雙水相體系中維生素B3的激發(fā)/發(fā)射峰并沒有明顯偏移，而維生素B3的熒光值在該體系中明顯增強，這說明聚乙二醇 6000 對維生素B3具有富集作用。如圖所示：A、A'--維生素B3水溶液 ，B、B'-雙水相，由圖可知，利用該體系測定維生素B3的最佳激發(fā)/發(fā)射波長為 λex /λem=319.0nm/392.0nm

【中圖分類號】R927 【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1004-4949（2013）09-214-01

維生素B3又稱尼克酸、煙酰胺、煙酸。維生素B3能促進血液循環(huán)，降低血壓，降低膽固醇和甘油三酯，減輕胃腸障礙.減輕美尼爾綜合癥的癥狀等。在動物肝臟、腎臟、瘦肉、魚卵、麥芽、全麥制品、花生、無花果等中富含維生素B3。在維生素B3含量測定的方法中，采用雙水相萃取、熒光法測定維生素B3的所占比例很小。本文選用聚乙二醇6000-硫酸銨雙水相萃取、熒光法測定維生素B3，達到提高靈敏度的目的，從而進一步完善了維生素的分析與測定，為雙水相的運用拓展了范圍。

1實驗

1.1儀器和試劑：pHS-3C 數(shù)字型精密酸度計（上海虹益儀器廠）；熒光光度計FP-8500（日本島津）；FA2004型電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）

維生素B3標(biāo)準(zhǔn)溶液6.0×10-4g/L（避光保存），聚乙二醇2000；聚乙二醇6000；氯化鈉；硫酸鈉；碳酸鈉；磷酸二氫鈉；硫酸銨；磷酸。聚乙二醇為化學(xué)純，其余所用試劑均為分析純。

1.2實驗與方法：在60.0mL 的分液漏斗中依次加入聚乙二醇 6000 溶液（30%）6.0mL、磷酸-磷酸氫二鈉緩沖液1.0mL、維生素B3標(biāo)準(zhǔn)溶液、硫酸銨1.0g、振蕩1.5min、靜置 8.0min，分離上下相，在 λex/λem=319.0nm/392.0nm 處測量上層水相中維生素B3的熒光值。將熒光值代入回歸方程，計算維生素 B3的含量。

2結(jié)果與討論

2.1熒光光譜：以熒光光度計 FP-8500（激發(fā)/發(fā)射縫寬 5nm/5nm）分別對維生素B3水溶液以及含有維生素B3的雙水相進行掃描，結(jié)果顯示，在聚乙二醇 6000～硫酸氨雙水相體系中維生素B3的激發(fā)/發(fā)射峰并沒有明顯偏移，而維生素B3的熒光值在該體系中明顯增強，這說明聚乙二醇 6000 對維生素B3具有富集作用。如圖所示：A、A'--維生素B3水溶液 ，B、B'-雙水相，由圖可知，利用該體系測定維生素B3的最佳激發(fā)/發(fā)射波長為 λex /λem=319.0nm/392.0nm

2.2雙水相組分的選擇、萃取時間及萃取率：在常見的鹽中，能與聚乙二醇形成雙水相的可溶鹽多為二價陰離子的鹽，如：硫酸鈉、碳酸鈉、硫酸銨，但硫酸鈉形成的雙水相不穩(wěn)定，碳酸鈉的需要量較大，硫酸銨形成的雙水相快且穩(wěn)定。一價陰離子鹽很難形成雙水相，磷酸鹽分相較慢。故本實驗選擇硫酸銨與聚乙二醇形成雙水相體系。

另實驗發(fā)現(xiàn)，在聚乙二醇與硫酸銨形成的雙水相體系中，聚乙二醇 6000～硫酸銨體系對維生素B3的萃取率大于聚乙二醇 2000～硫酸銨雙水相體系。而且，在該體系中聚乙二醇 6000 與硫酸銨的最佳組合為：聚乙二醇 6000 溶液（30%）為6.0mL，硫酸銨1.0g。

當(dāng)其它條件相同時，采用不同的時間萃取，實驗結(jié)果表明，最佳時間條件為：振蕩 1.5min、靜置 8.0min。

2.3酸度：在幾支60mL的分液漏斗中，依次加入6.0mL 30%的聚乙二醇6000溶液、1.0g硫酸銨、等量的維生素B3標(biāo)準(zhǔn)液，加入不同酸度的磷酸-磷酸氫二鈉緩沖液，振蕩 1.5min，靜置 8.0min，分離上下相，在 λex /λem=319.0/392.0nm處測量上層水相中維生素B3的熒光值。實驗結(jié)果表明，在 pH 值為 4.0～5.0 的酸度范圍內(nèi)時維生素B3的熒光值較大且相對穩(wěn)定，因此，本實驗選用 pH=4.5的緩沖液，所用緩沖液體積為 1.0mL。

2.4干擾實驗：實驗發(fā)現(xiàn)，在維生素B3的聚乙二醇6000-硫酸銨雙水相體系中，允許相對誤差為正負5%時，下列物質(zhì)的允許倍數(shù)（維生素B3的濃度為 4×10-5g/L）至少為：葡萄糖、蔗糖、淀粉（1000）；抗壞血酸、酒石酸、檸檬酸、草酸（800）；L-谷氨酸（200）；苯甲酸（400）；水楊酸、維生素 B1、維生素 B2（100）。常見的無機鹽離子不易被有機相萃取，因此不易干擾維生素B3的測定。由此可見，本方法的選擇性較好。

2.5回歸方程和檢出限：在最佳實驗條件下，按實驗方法，分別取不同量的維生素B3標(biāo)準(zhǔn)溶液進行萃取實驗，制作工作曲線。結(jié)果表明，維生素B3量在 8.0×10-6～2.0×10-4g/L 范圍內(nèi)與熒光值呈線性關(guān)系，其線性方程為： ΔF= 19.3732+6.6421C，相關(guān)系數(shù) R= 0.9979檢出限為1.3×10-7g/L。

2.6樣品分析

2.6.1 維生素B復(fù)合片

把一維生素 B 復(fù)合片（0.072g，約含VB310mg），碾碎后用水溶解，并稀釋定容于100mL 的容量瓶中。實驗前，量取2mL的濃溶液定容于100mL的容量瓶中（濃度約為2×10-5 g/L），作為待測液。

2.6.2 花生

稱取8.0g花生，碾碎后加入稀鹽酸、胃蛋白酶、淀粉酶溶解，并在40度水浴中加熱，過濾，定容與250mL容量瓶中。測定結(jié)果見表1

4結(jié)論

本文通過實驗論證了應(yīng)用高聚物～鹽雙水相萃取、熒光測定維生素B3的可行性，在聚乙二醇 6000～硫酸銨雙水相體系中維生素B3的萃取率較高，結(jié)合高靈敏度的熒光法進行測定，能夠滿足痕量維生素B3的測定要求，樣品分析的結(jié)果也明了這一點。與現(xiàn)有的維生素B3測定方法比較，此方法線性范圍較寬、操作簡單、檢出限較低，具有一定的實用價值。

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