司道文　楊鵬　郭艷華　孫敬宇　趙金芝　羅曉燕　程勇　栗占營　李云

【摘要】目的：觀察孕酮對大鼠腦損傷PGE2表達(dá)的影響。方法：雄性SD大鼠制作腦損傷模型，免疫組織化學(xué)法觀察腦組織PGE2的表達(dá)變化。結(jié)果：腦損傷組大鼠皮質(zhì)PGE2陽性細(xì)胞數(shù)顯著增加，孕酮治療組PGE2表達(dá)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：孕酮可降低腦損傷后PGE2的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】孕酮；腦損傷；前列腺素

【中圖分類號】R453【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1004-4949（2013）09-217-01

孕酮（Progesterone，PROG）是一種婦科用藥，近年來發(fā)現(xiàn)具有的腦保護藥物[1-2]，但是作用機制尚不明確。由于腦損傷后炎癥反應(yīng)是引起繼發(fā)性損傷的重要因素；而且炎癥反應(yīng)中環(huán)氧化酶（COX-2）代謝產(chǎn)物前列腺素（PGE2）是重要的炎癥因子，孕酮對腦損傷后PGE2的表達(dá)變化報道較少。因此，本實驗利用免疫組織化學(xué)方法檢測大鼠腦組織PGE2表達(dá)，探討孕酮對腦損傷的保護作用。

1 材料和方法

1.1 材料：健康雄性SD大鼠36只，體質(zhì)量280～300g（購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司），隨機分為假手術(shù)組、腦損傷組和孕酮治療組，每組12只。孕酮注射液（天津金耀氨基酸有限公司），兔抗人PGE2多克隆抗體（美國Cayman公司），免疫組織化學(xué)試劑盒 （福州邁新生物）。

1.2 方法

1.2.1 動物模型：采用Feeney's自由落體硬腦膜外撞擊方法建立模型。大鼠10%水合氯醛腹腔麻醉，在矢狀縫后1.5mm，中線旁2.5mm處打開一直徑5mm骨窗，用40g的擊錘從25cm 處自由墜落沖擊撞桿造成腦損傷。假手術(shù)組開同樣大小骨窗而不造成腦挫傷。孕酮治療組傷后1h、6h腹腔注射孕酮16mg/kg。假手術(shù)組和腦損傷組在相同時相腹腔注射等量生理鹽水。

1.2.2 免疫組織化學(xué)檢測：于傷后24小時，對大鼠腦組織取材固定切片。免疫組化檢測按照試劑盒說明進行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理，各組間比較采用方差分析，P< 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

假手術(shù)組大鼠皮質(zhì)偶見PGE2表達(dá)（3.4±0.28）。腦損傷組傷灶周圍皮質(zhì)可見大量PGE2陽性細(xì)胞的表達(dá)（46.2±2.76）；而孕酮治療組腦損傷周圍皮質(zhì)PGE2陽性細(xì)胞顯著減少（31.5±2.17），與腦損傷組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

腦損傷致殘率和致死率高，而腦損傷后炎癥反應(yīng)對繼發(fā)性損傷具有重要作用。腦損傷后，通過膠質(zhì)細(xì)胞增生，巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤，激活炎性因子如TNF-α、IL-6、iNOS和COX-2等釋放，從而誘發(fā)和加重腦損傷。前期實驗已經(jīng)證實孕酮可以抑制腦損傷后炎性因子iNOS和COX-2的表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)過程[3]。本實驗進一步檢測COX-2的反應(yīng)產(chǎn)物前列腺素PGE2在腦組織中的表達(dá)變化。結(jié)果顯示，腦損傷24h腦組織中PGE2含量明顯升高；孕酮干預(yù)后，明顯減低腦組織PGE2的表達(dá)，提示孕酮可能通過抑制PGE2的表達(dá)降低腦內(nèi)炎癥反應(yīng)。

在具體機制方面，孕酮通過減輕腦水腫、保護血腦屏障、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、減少自由基的產(chǎn)生、減輕鈣超載、抑制興奮性神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、抑制炎癥反應(yīng)等多種生物學(xué)作用，發(fā)揮神經(jīng)保護作用[2]。而且，孕酮可保護發(fā)育的胎兒免遭氧化應(yīng)激和免疫炎癥的侵害，在神經(jīng)元-膠質(zhì)通訊和正常神經(jīng)元發(fā)育中起關(guān)鍵性作用；因此可以設(shè)想孕酮在成人中樞神經(jīng)元損傷修復(fù)中，許多過程實際重復(fù)了胚胎發(fā)育的關(guān)鍵步驟，從另一個角度提示孕酮腦保護作用[1]。本實驗從孕酮抑制腦損傷后炎癥反應(yīng)方面，也證實了孕酮具有腦保護功能。另外，孕酮有較寬的治療窗，能夠迅速通過血腦屏障，具有使用方便、安全、價格低廉等特點，使得孕酮治療腦損傷成為可能。

參考文獻(xiàn)

[1] Stein DG. Progesterone exerts neuroprotective effects after brain injury. Brain Res Rev，2008，57（2）：386-97.

[2] Feeser VR，Loria RM. Modulation of traumatic brain injury using progesterone and the role of glial cells on its neuroprotective actions. J Neuroimmunol，2011，237（1-2）：4-12.

[3] 司道文，王茜，張廷才，等. 孕酮對大鼠腦損傷后大腦皮質(zhì)及海馬CA1區(qū)環(huán)氧合酶-2和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響[J]. 解剖學(xué)雜志，2010，33（4）：488-491.