李獻(xiàn)軍 繆竟成

【摘要】 目的 本研究主要就基質(zhì)金屬蛋白酶9在小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊血管中的具體表達(dá)情況展開分析討論。方法 選擇5周齡的雄性SPF級(jí)C57BL/6J小鼠8只作為對照組，另選8只周齡、性別，等級(jí)相同的載脂蛋白E基因（Apo-E）被敲除的小鼠作為觀察組，將本研究的所有小鼠利用高脂食物分別喂到15周，20周時(shí)來對其進(jìn)行取材檢測。結(jié)果 兩組小鼠的血清總膽固醇含量、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的陽性表達(dá)、mRNA的平均光密度、蛋白平均光密度等情況存在明顯的差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，兩組小鼠的體重存在一定的差異，具有可比性，但不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。結(jié)論 在高脂喂食的Apo-E被敲除的小鼠模型中，MMP-9的陽性表達(dá)可能與小鼠體內(nèi)的膠原纖維含量明顯降低、動(dòng)脈粥樣化斑塊形成等因素有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 基質(zhì)金屬蛋白酶9；動(dòng)脈粥樣硬化；載脂蛋白E基因敲除

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.137 文章編號(hào)：1004-7484（2013）-08-4229-01

所謂的基質(zhì)金屬蛋白酶是一種依賴于鋅元素的細(xì)胞外基質(zhì)降解分子，同時(shí)它還是一種可以參與到細(xì)胞外基質(zhì)監(jiān)管以及重塑的信號(hào)，它可以直接導(dǎo)致慢性炎癥的形成。本研究將對基質(zhì)金屬蛋白酶9在小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊血管中的具體表達(dá)情況進(jìn)行對比分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇5周齡的雄性SPF級(jí)C57BL/6J小鼠8只作為對照組，另選8只周齡、性別，等級(jí)相同的載脂蛋白E基因（Apo-E）被敲除的小鼠作為觀察組，將本研究的所有小鼠利用高脂食物分別喂到15周，20周時(shí)來對其進(jìn)行取材檢測。

1.2 方法 ①取血：對所有小鼠進(jìn)行稱重后，用戊巴比妥鈉來對小鼠進(jìn)行麻醉處理，待麻醉起效后，摘除小鼠的眼球取血。將收集到的血液滴入含有抑肽酶的抗凝管中，然后對其進(jìn)行離心處理后放入相應(yīng)的試管中，并放入零下20℃的冰箱中保存。②血管標(biāo)本的提?。盒∈笤谌⊙瓿珊?，將其固定在操作臺(tái)上，在對其皮膚進(jìn)行消毒后，將其腹腔、胸腔打開，并將其心臟暴露在視野下。利用凍生理鹽水將其心臟以及肝臟清洗到白色時(shí)，將其心臟發(fā)出的主動(dòng)脈到主動(dòng)脈分叉處的血管一同取下，對其進(jìn)行清洗后，制成標(biāo)本，并放置在零下80℃的條件下存儲(chǔ)備用。③血清總膽固醇的測定采用全自動(dòng)生化分析儀來完成。主動(dòng)脈血管標(biāo)本在零下80℃的條件下放置1周后，利用熒光定量PCR技術(shù)來對免疫組化檢測MMP-9蛋白以及MMP-9mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS18.0軟件對本研究的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，計(jì)數(shù)資料的對比用X2檢驗(yàn)，而計(jì)量資料的對比用t檢驗(yàn)，P<0.05說明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 觀察組小鼠的AS模型評(píng)價(jià) 經(jīng)過15周、20周的喂養(yǎng)后，觀察組小鼠的體重為（29.10±2.49）kg，對照組小鼠的體重為（33.20±5.21）kg，兩組小鼠的體重存在一定差異，具有可比性，但不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。兩組小鼠的血清總膽固醇分別為（13.52±1.60）mEq/L和（2.12±0.39）mEq/L，他們之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

2.2 MMP-9蛋白以及MMP-9mRNA的表達(dá) 見表1。

3 討 論

本研究采用了逆轉(zhuǎn)錄聚合酶與免疫組織化學(xué)來對載脂蛋白E基因被敲除的小鼠體內(nèi)的MMP-9的表達(dá)情況進(jìn)行研究。本研究的結(jié)果顯示，在采用高脂來對其進(jìn)行喂食的Apo-E被敲除的小鼠模型中，存在十分典型的AS斑塊，其體內(nèi)的膠原纖維也出現(xiàn)了明顯減少的情況，其MMP-9在蛋白水平以及mRNA的相關(guān)表達(dá)上均出現(xiàn)了明顯上調(diào)的情況。此外，本研究的結(jié)果還表明，小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化的斑塊中，小鼠的MMP-9的表達(dá)也出現(xiàn)了明顯升高的情況。由此可見，在高脂喂食的Apo-E被敲除的小鼠模型中，MMP-9的陽性表達(dá)可能與小鼠體內(nèi)的膠原纖維含量明顯降低、動(dòng)脈粥樣化斑塊形成等因素有關(guān)。

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