楊惠婷 姚 鵬 張曉娟

睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子與堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷后功能變化的影響

楊惠婷 姚 鵬 張曉娟

目的觀察球后注射神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子Ciliary neurotrophicfactor,CNTF）和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)大鼠視神經(jīng)損傷后視覺誘發(fā)電位變化的研究。方法將45只健康成年大鼠、體重200～225g、Wistar大鼠隨機(jī)分成三組，對(duì)照組、CNTF治療組和bFGF治療組，比較三組間大鼠F-VEP。結(jié)果視神經(jīng)急性損傷后F-VEP波幅變得低而寬，對(duì)照組21d時(shí)誘導(dǎo)不出典型波形。結(jié)論CNTF治療組有視神經(jīng)保護(hù)作用，bFGF治療組對(duì)視神經(jīng)有保護(hù)作用，二者差異無顯著性。

bFGF；CNTF；視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞；視神經(jīng)損傷；視神經(jīng)保護(hù)

目前睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子CNTF及其受體廣泛存在于神經(jīng)系統(tǒng)能夠促進(jìn)多種神經(jīng)細(xì)胞的存活，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、分化和損傷修復(fù)中對(duì)中樞神經(jīng)再生的意義越來越引起人們的重視。因此本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步印證和比較兩種藥物對(duì)視神經(jīng)功能恢復(fù)的效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取健康成年SD大鼠45只，雄性，體重200～225g，由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組將實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、CNTF治療組、bFGF治療組。各組又分為7、14、21d三個(gè)時(shí)間，每組5只大鼠，每只動(dòng)物進(jìn)行單眼實(shí)驗(yàn)，另一眼作為正常對(duì)照。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組視神經(jīng)夾挫傷后，傷眼球后立即注射0.9%生理鹽水注射液0.1ml、CNTF 0.1ml、bFGF 0.1ml(2000u)，雙眼分別行F-VEP檢查。分別于傷后7、14、21d隨機(jī)處死動(dòng)物取材，每次5只，處死前雙眼分別行F-VEP檢查。

1.2.2 觀察方法閃光視覺誘發(fā)電位（F-VEP）：0.6%戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，Mydrin-p（日本參天制藥公司）散瞳；采用銀針電極，阻抗＜2kΩ，暗適應(yīng)后在暗室內(nèi)用全視野閃光刺器，先后分別刺激左、右眼，刺激頻率1.7Hz，通頻帶寬1～100Hz，分析時(shí)間400ms，疊加200次，連續(xù)測(cè)量至少3次。得出F-VEP波形圖。

2 結(jié)果

2.1 視覺誘發(fā)電位（F-VEP）正常大鼠F-VEP潛伏期短，電位幅值陡直。視神經(jīng)急性損傷時(shí)測(cè)得的F-VEP波形變得低而寬。視神經(jīng)損傷21d以后對(duì)照組對(duì)刺激無應(yīng)答，誘導(dǎo)不出典型波形；CNTF治療組F-VEP波形幅值較正常低緩，隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸接近于正常組；bFGF治療組F-VEP波形與CNTF治療組F-VEP波形接近，幅值較正常平緩，隨用藥時(shí)間延長(zhǎng)逐漸接近于正常組。

2.2 F-VEP潛伏期及幅值變化視神經(jīng)急性損傷后，N1P1波形顯著降低，P1峰潛時(shí)明顯延長(zhǎng)，與正常組比較有極顯著差異性（P＜0.001），見表1。

表1 視神經(jīng)急性損傷組與正常組F-VEP比較

2.3 治療21d后各組間F-VEP比較CNTF治療組和bFGF組的P1峰潛時(shí)及N1P1波幅與對(duì)照組比較，各組間行t檢驗(yàn)，差異均有顯著性（P＜0.05）；而CNTF治療組的P1峰潛時(shí)及N1P1波幅與bFGF組相比較差異無顯著性（P＞0.05），見表2。

表2 治療21d后各組間F-VEP比較

3 討論

CNTF對(duì)神經(jīng)作用的研究已較成熟。CNTF缺陷型鼠到成年期后運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元大量丟失，說明CNTF對(duì)體內(nèi)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的生長(zhǎng)和發(fā)育起到重要作用[1]。外源性CNTF恰能激活其效應(yīng)細(xì)胞膜上的受體，形成具有生物活性的CNTF受體化合物，通過軸漿逆向運(yùn)輸至胞體，發(fā)揮保護(hù)神經(jīng)元與促進(jìn)軸突再生的作用[2]。bFGF是近年來研究較為廣泛而又深入的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，國(guó)內(nèi)外大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)bFGF對(duì)促進(jìn)中樞神經(jīng)的再生有確切意義，并且小部分應(yīng)用于臨床，比如治療視神經(jīng)疾病。視神經(jīng)損傷的部位對(duì)RGCs軸突再生長(zhǎng)度有影響，一般來講，視神經(jīng)損傷部位離眼越遠(yuǎn)，RGCs軸突再生能力越低，bFGF能促進(jìn)發(fā)育期或成熟RGCs的存活，它們僅能促進(jìn)軸突分枝和發(fā)芽，而不是長(zhǎng)距離的再生。但是bFGF同時(shí)還是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，具有很強(qiáng)的促血管壁細(xì)胞增生的作用。

視神經(jīng)夾挫傷模型是視神經(jīng)的不完全損傷模型，能較相似地模擬臨床。視神經(jīng)受到相當(dāng)程度的損傷后，如不能及時(shí)施加保護(hù)因素將導(dǎo)致不可逆性損害。F-VEP能真實(shí)地反映視神經(jīng)的功能狀態(tài)，于節(jié)細(xì)胞和神經(jīng)纖維的形態(tài)學(xué)改變相互印證了CNTF與bFGF對(duì)視神經(jīng)損傷有保護(hù)作用，二者之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

[1] Awai H, Clarke DB, Kittlerova P, et al. Brain-derived neurotrophic factor andneurotrophin-4/5 stimulate growth of axonal branches from regenerating retinal ganglion cells[J]. J Neurosci, 1996,16：3887-3894.

[2] Mata M, Jin CF, Fink DJ. Axotomy increases CNTF recepter mRNA in rat spinal cord[J]. Brain Res, 1993(610)：162-165.

R774.6

A

1673-5846(2013)02-0141-02

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