林金麗 梁玉潮 梁衛(wèi)橋 馮婉麗 李銀鳳

金黃色葡萄球菌是常見(jiàn)的食物中毒病原菌之一，為有效控制病原菌的發(fā)生和擴(kuò)散，準(zhǔn)確及時(shí)的檢測(cè)手段是預(yù)防和控制金黃色葡萄球菌傳播的關(guān)鍵。目前金黃色葡萄球菌傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法(國(guó)標(biāo)法) 需要分離培養(yǎng)、鏡檢觀察、生化鑒定等多個(gè)步驟，檢測(cè)周期長(zhǎng)，整個(gè)過(guò)程大約需要4～7 d，且操作復(fù)雜，已不能滿足細(xì)菌性食物中毒中病原菌快速檢測(cè)的現(xiàn)實(shí)需要[1]。而金葡菌顯色培養(yǎng)基中添加了針對(duì)金葡菌的選擇性色素，因而具有較高的特異性和靈敏度[2]。而且同常規(guī)培養(yǎng)基相比，能較好地消除假陽(yáng)性。金葡菌顯色培養(yǎng)基僅需通過(guò)單一菌落的典型色彩即可進(jìn)行初步鑒定，大大提高了對(duì)金葡菌的檢出率。為探討顯色法的實(shí)用價(jià)值，本研究在用傳統(tǒng)方法處理細(xì)菌性食物中毒時(shí)，使用金葡菌顯色培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，為金葡菌顯色培養(yǎng)基的應(yīng)用提供借鑒。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2011年3月-2012年3月間廣東省江門市新會(huì)區(qū)124 例可疑細(xì)菌性食物中毒患者作為研究對(duì)象，其中男性患者為73 例，女性患者為51 例，其中年齡最大的患者為72 歲，年齡最小的患者為5 歲。其中兒童患者為12 例。

1.2 材料 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基由法國(guó)科瑪嘉公司提供，快速革蘭氏染色液由環(huán)凱公司提供。

1.3 方法

1.3.1 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基平板制備 稱取一定量的金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基干粉，倒入三角燒瓶中，緩慢倒入一定量的蒸餾水，攪拌均勻至瓊脂粉完全溶解，加熱至100℃,并按常規(guī)不斷攪拌，直至瓊脂完全溶解。將培養(yǎng)基水浴冷卻至48℃，在無(wú)菌操作臺(tái)中將培養(yǎng)基倒入已滅菌的培養(yǎng)皿中，待液體凝固后用封口膜將平皿封好，放置在4℃冰箱留用。

1.3.2 患者嘔吐物等樣品金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)的檢驗(yàn) 將采集送檢食物中毒患者的嘔吐物等樣品用滅菌后的生理鹽水進(jìn)行10 倍遞次稀釋，使用不同稀釋濃度的樣品進(jìn)行劃線接種，放置在37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24 h。肉眼觀察菌落顏色，然后挑取菌落涂片，使用快速革蘭氏染色液染色后進(jìn)行鏡檢和血漿凝固酶試驗(yàn)，進(jìn)一步確認(rèn)結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 中毒患者資料 對(duì)發(fā)生食物中毒的患者資料進(jìn)行整理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在家里就餐中毒的情況比在外邊多，在家里發(fā)生中毒的情況一般是食用了存放過(guò)久的食物造成的中毒，而發(fā)生食物中毒例數(shù)最多的季節(jié)為夏季。見(jiàn)表1。

表1 發(fā)生食物中毒患者的資料

2.2 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基菌落生長(zhǎng)特征及診斷例數(shù) 葡萄球菌在金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)特征各有不同，單個(gè)菌落呈現(xiàn)的顏色也不相同，金黃色葡萄球菌在顯色培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)特征為紫紅色，其他細(xì)菌為藍(lán)色、無(wú)色或奶油色。在124 例細(xì)菌性食物中毒患者中，檢測(cè)到金黃色葡萄球菌的患者例數(shù)為25 例。

2.2.2 血漿凝固酶試驗(yàn)結(jié)果 使用血漿凝固酶試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果，將血漿凝固酶驗(yàn)證試驗(yàn)與金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基方法所得結(jié)果進(jìn)行比較，兩者的準(zhǔn)確率均為100%，可以得出金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基方法準(zhǔn)確率較高，見(jiàn)表2。

表2 血漿凝固酶驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)與顯色培養(yǎng)基方法比較

2.2.3 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基在不同樣品中金葡菌的檢出率 使用金葡菌顯色培養(yǎng)基檢測(cè)細(xì)菌性食物中毒患者的不同樣品，嘔吐物、咽拭子和肛拭子均檢出金葡菌，其中嘔吐物的檢出率最高，見(jiàn)表3。

表3 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基在不同樣品中金葡菌的檢出率

3 討論

使用金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基方法檢測(cè)，金黃色葡萄球菌呈紫紅色，其他細(xì)菌為藍(lán)色、無(wú)色或奶油色，肉眼容易區(qū)分和鑒別，124 例可疑細(xì)菌性食物中毒患者的金葡菌檢測(cè)傳統(tǒng)法與顯色培養(yǎng)基法結(jié)果一致，鑒定的靈敏度和特異性與葡萄球菌血平板法這種常規(guī)檢驗(yàn)方法無(wú)顯著差異。金葡菌顯色培養(yǎng)基對(duì)患者的不同樣品均能檢出，說(shuō)明這種培養(yǎng)基受不同樣品中其他物質(zhì)的干擾較少。這種方法不但簡(jiǎn)化了分離培養(yǎng)鑒定程序，而且加快了檢測(cè)的速度，對(duì)細(xì)菌性食物中毒患者得到及時(shí)和正確的治療爭(zhēng)取了時(shí)間，顯色培養(yǎng)基是有價(jià)值的分離鑒定平板，可以作為傳統(tǒng)平板的補(bǔ)充，顯色培養(yǎng)基在微生物檢測(cè)中的應(yīng)用，可大大提高測(cè)效率，滿足應(yīng)急需要[3-5]。

綜上所述，金葡菌顯色培養(yǎng)基有易于鑒別，選擇性好，優(yōu)勢(shì)遠(yuǎn)大于普通培養(yǎng)基的選擇性，特別是突發(fā)公共衛(wèi)生事件處理中和有混合菌的金葡菌處理中，顯色培養(yǎng)基是首選的，并能取得較好的結(jié)果。將顯色培養(yǎng)基與傳統(tǒng)檢測(cè)方法結(jié)合對(duì)食源性致病菌進(jìn)行快速檢驗(yàn)已成為微生物快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的重要方向。

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