王云俊 牛清華

（山西醫(yī)科大學，山西 太原 030001）

Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達及二者的相關性

王云俊 牛清華

（山西醫(yī)科大學，山西 太原 030001）

目的 探討乳腺癌組織中存活素（survivin）和白介素-8（IL-8）的表達情況及它們之間的相關性。方法 采用免疫組織化學染色法檢測52例乳腺癌組織中survivin和IL-8蛋白的表達情況，并分析它們之間的相互關系。結果 52例乳腺癌組織中survivivn的表達陽性率為71.2%（37/52），IL-8的表達陽性率為61.5%（32/52）。在32例IL-8表達陽性的病例中survivin的陽性表達率為87.5%（28/32），而在20例IL-8表達陰性的病例中survivin的陽性表達率為55%（11/20）。經(jīng)統(tǒng)計學處理分析得出兩者具有相關性P＜0.001，相關系數(shù)r=0.365。結論 survivin 在乳腺癌組織中的表達與IL-8的表達呈正相關，提示survivin與IL-8在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用。

乳腺癌；免疫組織化學；survivin；IL-8

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，病死率非常高。其發(fā)病率近年在世界范圍內均呈上升趨勢，采取積極有效的防治措施以控制其發(fā)生發(fā)展成為當務之急。本文的主要目的是通過檢測乳腺癌組織中的survivin和IL-8的表達情況并且分析這些基因蛋白之間的相互關系以及與臨床病理之間的關系來探討survivin和IL-8在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，為治療腫瘤的藥物作用靶點提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料

本實驗所用的材料均來自山西醫(yī)科大學第二臨床醫(yī)學院2009年8月-2011年8月有完整病例資料經(jīng)手術切除的乳腺癌標本共52例，發(fā)病年齡38～75歲，均為浸潤性非特殊癌，術前均未接受過非甾體類抗炎藥（NSAIDs）治療和放化療。所有組織經(jīng)4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察，病理明確診斷。

1.2 實驗試劑

Survivin兔抗人多克隆抗體、IL-8兔抗人單克隆抗體以及DAB顯色試劑盒均購自于北京中杉金橋試劑公司，免疫組化染色試劑盒（SP-1020）購于武漢博士德試劑公司。

1.3 實驗方法

采用免疫組織化學染色S-P法檢測survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達情況。具體操作步驟按照S-P試劑盒操作說明來進行，用已知陽性標本作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照；觀察survivin及IL-8在乳腺癌組織中免疫組化染色情況。

1.4 結果判定

Survivin的陽性著色位于細胞漿或細胞核。參照文獻[1]采用半定量積分法進行結果判定：400倍光鏡下連續(xù)觀察5個高倍視野，陽性細胞數(shù)＜5%為0分，5%～25%為l分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分。染色強度評分：無染色為0分，淡黃色為1分，黃或深黃色為2分，褐色或棕褐色為3分。兩項積分相乘＞4分為陽性。IL-8陽性反應為胞漿呈棕黃色染色，陽性細胞數(shù)＜或等于10%為陰性，陽性細胞數(shù)＞10%為陽性。

1.5 統(tǒng)計學處理

所有數(shù)據(jù)資料均采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學處理，各組間數(shù)據(jù)及率的比較進行χ2檢驗。

2 結 果

2.1 Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達

survivin在乳腺癌組織中陽性著色定位于細胞漿或細胞核。52例乳癌組織中陽性表達37例、陰性表達15例，陽性率為71.2%。IL-8在乳腺癌石蠟切片中陽性著色定位于細胞漿。52例乳癌組織中陽性表達32例，陰性表達20例，陽性率為61.5%。

2.2 Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達與臨床病理的關系

見表1。

表1 Survivin和IL-8在乳腺癌組織中的表達與臨床病理的關系

2.3 Survivin與IL-8在乳腺癌組織中表達情況之間的關系

在IL-8表達陽性的乳腺癌患者中survivin陽性表達率為87.5%，而在IL-8表達陰性的乳腺癌患者中survivin陽性表達率為55%，經(jīng)統(tǒng)計學處理兩者具有顯著相關性（P＜0.001），相關系數(shù)：r=0.365。

3 討 論

Survivin屬于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族中的一個新成員，除了具有很強的抗凋亡作用之外，它還參與細胞的增殖、分裂以及細胞周期的調控有關[2]。Survivin主要表達于胚胎和發(fā)育中的胎兒組織，在成人終末分化組織（除了睪丸、胎盤和胸腺）通常不表達，而在多種惡性腫瘤組織（如乳腺癌、肺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、結腸癌等）中異常高表達。主要是通過直接或間接抑制Caspase3和Caspase7的活性而阻斷細胞的凋亡過程[3]。被認為是第一個直接將凋亡與細胞惡性度關聯(lián)在一起的分子，具有多重功能，不僅能夠抑制細胞凋亡還能啟動細胞增殖，調節(jié)細胞周期。在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中survivin的過表達促使S期核轉運加速，幫助細胞逃避細胞周期檢測點，加快向S期轉換，抑制G1期阻滯，通過調控有絲分裂促進轉化細胞異常增殖[4]。Survivivn在正常人組織中是一個“關閉”的基因，在腫瘤組織中被激活而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。而且，不同組織中的作用機制不同，因此被看作腫瘤相關因子[5]。

IL-8是一種具有多功能、多細胞來源的趨化性細胞因子，在炎癥反應中發(fā)揮十分重要的作用。近年來發(fā)現(xiàn)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關[6]，可刺激腫瘤細胞增殖誘導腫瘤細胞移動，促進腫瘤的發(fā)生和轉移[7].關于IL-8基因表達的調節(jié)，主要集中于其在轉錄水平的調控。在IL-8啟動子上有兩個區(qū)域對IL-8的轉錄調節(jié)非常重要，它們分別是遠端結合AP-1的位點和近端結合NF-κB及NF-IL-6的位點。在靜息狀態(tài)的情況下，NF-κB 二聚體通過與其抑制物 IκB以非共價結合無活性的三聚體形式存在于細胞漿。當在其受到細胞外信號刺激時，與細胞膜受體特異性結合并改變受體的空間構象，從而激活NIK，NIK再進一步激活IKKs，后者可使無活性的三聚體中的IκBN 端兩個保守的Ser 殘基磷酸化。IκB的磷酸化的結果導致其N端第21位和22位賴氨酸殘基通過泛素連接酶與多個泛素分子共價結合。經(jīng)過磷酸化和泛素化以后，IκB的構象被改變并被ATP依賴性的26S蛋白酶體識別并降解，從而使受 IκB 抑制的NF-κB釋放出來，并成為有活性的二聚體形式進而轉位到胞核，與IL-8基因上的κB序列特異性結合后上調IL-8基因的表達[8,9]進而促進細胞的增殖。

通過誘導TNF受體介導的信號轉導中NF-κB誘導survivin表達，而survivin大量表達可降解IκB，解除I-κB對NF-κB活性的抑制，使細胞免于凋亡。NF-κB的亞單位轉活化的異位表達可誘導促癌基因c-myc啟動區(qū)的激活，p50主要參與基因啟動子增強子κB序列特異性結合[10]，p65轉錄調控survivin的表達[11]，抑制caspase-3和caspase-7的活性，從而阻斷細胞凋亡，共同參與腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展過程。很多研究發(fā)現(xiàn)survivin及IL-8均具有明顯的促腫瘤血管生成的作用，而血管的生成在乳腺癌的發(fā)生、浸潤和遠處轉移過程起到重要作用。由此可推測：二者在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能是通過紛繁交錯的信號轉導途徑對細胞周期的調節(jié)發(fā)揮作用。

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R737.9

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1671-8194（2013）19-0231-02