劉若冰 劉燦輝

（湖南省邵陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 邵陽(yáng) 422000）

減肥類(lèi)保健食品中非法添加鹽酸西布曲明的快速檢測(cè)

劉若冰 劉燦輝

（湖南省邵陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 邵陽(yáng) 422000）

目的 建立檢測(cè)減肥類(lèi)保健食品中非法添加鹽酸西布曲明的快速定性檢測(cè)方法。方法 采用薄層色譜法、高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器法進(jìn)行定性鑒別，并采用高效液相色譜法測(cè)定其中鹽酸西布曲明的含量。結(jié)果 在試驗(yàn)的10種市售樣品（含贈(zèng)品）中，其中8個(gè)品種（含贈(zèng)品）中被檢測(cè)到摻有鹽酸西布曲明。結(jié)論 該方法選擇性強(qiáng)、靈敏度高，可作為分析檢測(cè)減肥類(lèi)保健食品中非法添加鹽酸西布曲明的比較有效的方法。

減肥類(lèi)保健食品；鹽酸西布曲明；薄層色譜法；高效液相色譜法

鹽酸西布曲明是一種非苯丙胺類(lèi)食欲抑制劑[1]，抑制5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取，具有抑制食欲和增強(qiáng)代謝雙重作用，其減肥的原理就是靠著代謝加快，產(chǎn)生熱量、釋放熱量的加快，抑制人的食欲，讓人厭食以達(dá)到減肥的目的，但是，鹽酸西布曲明對(duì)人體有副作用，可出現(xiàn)心動(dòng)過(guò)速、血壓升高、頭痛、失眠、易醒、口干、便秘、易激動(dòng)、皮疹或皮膚干燥等。同時(shí)《食品安全法》規(guī)定：保健食品的功能、成分必須與標(biāo)簽、說(shuō)明書(shū)相一致。但由于中藥制劑所含成分復(fù)雜、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，一些制假者在生產(chǎn)過(guò)程中非法添加化學(xué)成分，夸大宣傳療效，高價(jià)銷(xiāo)售弁取暴利，嚴(yán)重危害人民的身體健康。據(jù)有關(guān)資料顯示，減肥類(lèi)保健食品中非法添加的化學(xué)成分主要有鹽酸西布曲明、酚酞、鹽酸芬氟拉明和奧利司他等。因此，筆者建立了薄層色譜法和高效液相色譜法，可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)減肥類(lèi)保健食品中非法添加的鹽酸西布曲明。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀：LC-20AT泵、SPD-M20A檢測(cè)器、CTO-10AS柱溫箱、SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器、CBM-20A系統(tǒng)控制器；AG-135電子天平、AB204-N電子天平（均為梅特勒（上海）有限公司）；硅膠G預(yù)制板（青島海洋化工廠，批號(hào)20081211）。

甲醇、磷酸和三乙胺為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純；鹽酸西布曲明對(duì)照品（批號(hào)100624-200401）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；10種減肥類(lèi)保健食品為市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)（均標(biāo)示為純中藥制劑）。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜定性鑒別[2]

取供試品1次口服量（含囊殼或茶袋），加入甲醇25mL，超聲處理（250W，40kHz）30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取鹽酸西布曲明對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述二種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-濃氨試液（12∶6∶3∶0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。結(jié)果供試品色譜中，在與鹽酸西布曲明對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯1個(gè)相同的橙紅色斑點(diǎn)說(shuō)明供試品中檢出鹽酸西布曲明（圖1）。

2.2 高效液相色譜-二極管陣列定性鑒別

2.2.1 色譜條件

UltimateMXB-C18色譜柱（250×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（74∶26）；檢測(cè)波長(zhǎng)：223nm；柱溫：35℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL。

圖1 1.2.3.4.6.7.8.9供試品；5.10鹽酸西布曲明對(duì)照品

2.2.2 溶液的配制

2.2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

稱(chēng)取鹽酸西布曲明對(duì)照品約7.87mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻（儲(chǔ)備液），精密吸取3mL，置10mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（0.04722mg/mL）。

2.2.2.2 供試品溶液的制備

取供試品1次口服量，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理（250W，40kHz）30min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.3 流動(dòng)相系統(tǒng)優(yōu)化篩選

試驗(yàn)前我們查閱了有關(guān)文獻(xiàn)和近幾年的藥學(xué)雜志，遴選出以下三個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)。①甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀（用磷酸調(diào)值至pH3.0）（55∶45）[3]。②甲醇-水-三乙胺（75∶25∶0.1）[4]。③甲醇-水（74∶26）。取上述配制的對(duì)照品溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為223nm，分別以上述三種流動(dòng)相系統(tǒng)，進(jìn)樣10μL進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖2～4。

顯然以流動(dòng)相系統(tǒng)③檢出的色譜峰最理想，鹽酸西布曲明色譜峰能達(dá)基線(xiàn)分離，色譜行為良好，出峰時(shí)間在20min以前，理論板數(shù)為8767，供試品鹽酸西布曲明色譜峰與其他雜質(zhì)峰分離度＞1.5，故選此系統(tǒng)作為流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)。

2.2.2.4 專(zhuān)屬性考察

圖2 流動(dòng)相①HPLC圖

圖3 流動(dòng)相②HPLC圖

圖4 流動(dòng)相③HPLC圖

圖5 鹽酸西布曲明對(duì)照品色譜圖

圖6 供試品色譜圖

圖7 鹽酸西布曲明對(duì)照品光譜圖

圖8 供試品光譜圖

取上述制備的對(duì)照品溶液和供試品溶液，照上述色譜條件，各精密進(jìn)樣10μL，依法測(cè)定，記錄色譜圖和光譜圖，結(jié)果鹽酸西布曲明色譜峰能達(dá)基線(xiàn)分離，出峰時(shí)間15.89min，理論板數(shù)為8767。供試品在與對(duì)照品色譜保留時(shí)間相同的位置檢出色譜峰，且光譜圖一致。說(shuō)明供試品中檢出鹽酸西布曲明。見(jiàn)圖5～8。

2.2.2.5 檢測(cè)限考察

稱(chēng)取鹽酸西布曲明對(duì)照品0.00787g，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，精密量取3mL，置100mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度（4.722μg/mL），照上述色譜條件，進(jìn)樣5μL，記錄色譜圖，見(jiàn)圖9。結(jié)果檢測(cè)限為23.61ng（S/N=3）。

圖9 信噪比檢測(cè)色譜圖（S/N=3）

2.3 高效液相色譜法定量測(cè)定

2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密吸取上述鹽酸西布曲明對(duì)照品儲(chǔ)備液（0.1574mg/mL）1、2、3、4、5mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，分別取10μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程：A=16770C+5076，r=1.0000?？梢?jiàn)鹽酸西布曲明在0.1574～0.7870μg范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn)

取同一濃度的柚皮苷對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，平均值為1751194，RSD=0.25%。結(jié)果表明本法精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取同一供試品溶液（X牌減肥膠囊）10μl，于0、1、2、4、8、16h進(jìn)樣，測(cè)定其鹽酸西布曲明峰面積積分值，平均值為1895620，RSD=0.51%。結(jié)果表明，供試品溶液在16h內(nèi)峰面積積分值基本穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品（X牌減肥膠囊，批號(hào)2009030181）5份，分別按上述含量測(cè)定方法測(cè)定其鹽酸西布曲明含量，平均含量為1.0699mg/g，RSD=1.56%。結(jié)果表明，本法重現(xiàn)性良好。

2.3.5 回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（X牌減肥膠囊，批號(hào)2009030181，含量：1.0699mg/g）6份，精密稱(chēng)定，按低、中、高劑量分別加入鹽酸西布曲明對(duì)照品溶液（0.1574mg/mL）適量，按供試品溶液的制備方法處理，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸西布曲明回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.6 樣品測(cè)定

按上述條件和方法測(cè)定各樣品中鹽酸西布曲明的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

試驗(yàn)中曾考察過(guò)甲醇、乙醇和乙酸乙酯三種溶劑，結(jié)果以甲醇作溶劑的效果為最佳；在超聲時(shí)間考察時(shí)，超聲30min和60min沒(méi)有明顯的區(qū)別，故采用超聲30min。同時(shí)考察過(guò)各樣品的內(nèi)包裝，結(jié)果發(fā)現(xiàn)1號(hào)樣的囊殼和2號(hào)樣的茶袋中均含有較多的鹽酸西布曲明。

在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)10個(gè)減肥類(lèi)樣品中，有8個(gè)樣品中檢出鹽酸西布曲明，1個(gè)樣品的贈(zèng)品中檢出鹽酸西布曲明，但該樣品的正品中有一個(gè)很大的可疑峰，有待進(jìn)一步研究[4]。

由于對(duì)保健食品的監(jiān)管（尤其是技術(shù)監(jiān)管）還未完全到位，目前保健食品市場(chǎng)上魚(yú)龍混雜，非法添加的現(xiàn)象令人觸目驚心，且花樣繁多，手段越來(lái)越高明。筆者通過(guò)薄層色譜法和高效液相色譜法，可以快速地檢測(cè)出減肥類(lèi)保健食品中非法添加的鹽酸西布曲明，該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確、可靠，能有效地控制減肥類(lèi)保健食品的質(zhì)量，保障人民的身體健康。

[1] 陳國(guó)章,吳琳.減肥藥“輕身減肥片”中非法加入西藥鹽酸西布曲明的薄層色譜鑒別[J].中華中西醫(yī)學(xué)雜志,2006,4(9):64.

[2] 劉吉金,李軍.減肥食品或保健品中非法添加鹽酸西布曲明、鹽酸芬氟拉明、鹽酸西布曲明快速檢測(cè)方法研究[J].藥物分析雜志,2006,26(6):793.

[3] 鄭國(guó)鋼,方宇謹(jǐn),杜加秋.RP-HPLC測(cè)定鹽酸西布曲明片的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2001,16(5):195.

[4] 王金生.HPLC-PDA法檢驗(yàn)保健食品中的鹽酸西布曲明[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2007,17(3):462.

R155.5

B

1671-8194（2013）21-0100-03