崔蕾蕾（江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院 224000）

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種常見的自身免疫介導(dǎo)的，以免疫性炎性反應(yīng)為突出表現(xiàn)的彌漫性結(jié)締組織疾病?；颊哐蹇蓹z測到多種具有免疫活性的自身抗體，且在典型的臨床癥狀、體征出現(xiàn)之前可被檢測到［1］。因此，自身抗體的檢測對SLE的診斷、治療和療效觀察具有重要意義［2］。本研究通過聯(lián)合檢測血清抗核抗體（ANA）、抗核糖體核糖蛋白抗體（抗nRNP）、抗Smith抗體（抗Sm）、抗干燥綜合征A抗體（抗SSA）、抗Ro－52抗體、抗干燥綜合征B抗體（抗SSB）、抗PM－Scl、抗彌漫性硬皮?。≒SS）抗原70抗體（抗Scl－70）、抗多發(fā)性肌炎/皮肌炎（PM/DM）標(biāo)記抗體（抗Jo－1）、著絲點(diǎn)蛋白B（CENP B）、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、抗雙鏈DNA抗體（抗ds－DNA）、抗核小體抗體（AnuA）、組蛋白（AHA）、抗核糖體P蛋白抗體（ARPA）、線粒體－M2（AMA－M2）共16項(xiàng)自身抗體，對檢測結(jié)果的臨床意義進(jìn)行分析，以探討其在SLE診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 SLE組患者為2012年1～10月在本院就診的住院患者90例，其中男5例，女85例，年齡18～72歲，所有患者均符合1997年美國風(fēng)濕病協(xié)會（ARA）關(guān)于SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。疾病對照組患者來自本院門診與住院患者，為臨床確診的90例自身免疫性疾病患者，其中男13例，女77例，年齡13～77歲，均符合各類有關(guān)風(fēng)濕病診斷標(biāo)準(zhǔn)，包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者39例，混合型結(jié)締組織?。∕CTD）患者17例，干燥綜合征（SS）患者19例，多發(fā)性肌炎/皮肌炎（PM/DM）患者11例和彌漫性硬皮?。≒SS）患者4例。健康對照組為同期在本院體檢健康者，其中男10例，女80例，共90例，年齡16～70歲。

1.2 試劑材料

1.2.1 標(biāo)本 采取所有試驗(yàn)對象晨起空腹靜脈血3mL，離心留取血清，保存于－20℃低溫冰箱，檢測前解凍。

1.2.2 試劑與儀器 ANA及可溶性抗原（ENA）試劑均由歐蒙（德國）醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司生產(chǎn)。儀器：Olympus熒光顯微鏡，EUROBlotMaster，Canonscan LIDE 100掃描儀。

1.3 檢測方法

1.3.1 間接免疫熒光法檢測ANA 采用德國歐蒙公司的間接免疫熒光法ANA檢測試劑盒，按試劑盒要求將血清1∶100稀釋，取25μL加至加樣板反應(yīng)區(qū)，將再有HEP－2細(xì)胞和猴肝的載片蓋在加樣板上，室溫溫育30min后用吐溫磷酸鹽緩沖液沖洗5min，加20μL異硫氰酸熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白至加樣板反應(yīng)區(qū)，室溫溫育30min后用緩沖液沖洗5min，封片，在熒光顯微鏡下觀察熒光，以大于或等于1∶100稀釋度顯示熒光染色判定為陽性。

1.3.2 免疫印跡法檢測ENA多肽抗體譜 采用德國歐蒙公司生產(chǎn)的歐蒙印跡法檢測系統(tǒng)檢測以下15種特異性抗體：抗nRNP/Sm、抗Sm、抗SSA、抗Ro－52抗體、抗SSB、抗Scl－70、抗PM－Scl、抗Jo－1、CENP B、PCNA、抗 ds－DNA、AnuA、AHA、ARPA、AMA－M2。取1∶100稀釋的患者血清1.5mL與膜條上的靶抗原反應(yīng)30min，然后洗滌3次，每次5min，加入1.5mL酶標(biāo)記的抗人IgG反應(yīng)30min，洗滌3次，每次5min，加入底物反應(yīng)15min，最后以蒸餾水清洗膜條以終止反應(yīng)。采用配套軟件EUROLineScan進(jìn)行結(jié)果掃描，系統(tǒng)自動判讀出各條帶的顯色灰度值，灰度值大于或等于11為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，組間率的比較用R×C表χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。靈敏度＝SLE患者中某抗體陽性人數(shù)/SLE患者總數(shù)×100%，特異性＝非SLE患者中某抗體陰性人數(shù)/非SLE患者總數(shù)×100%，陽性預(yù)測值＝某抗體陽性的SLE患者數(shù)/某抗體陽性總?cè)藬?shù)×100%，陰性預(yù)測值＝某抗體陰性非SLE患者數(shù)/某抗體陰性總?cè)藬?shù)×100%。正確指數(shù)＝靈敏度＋特異性－1。

2 結(jié) 果

2.1 兩組多種自身抗體檢測結(jié)果比較 見表1。健康對照組未檢出自身抗體。SLE組的ANA、抗nRNP/Sm、抗Sm、抗SSA、抗Ro－52、抗ds－DNA、AnuA、AHA和 ARPA檢測陽性率分別為97.8%、56.7%、33.3%、77.8%、70.0%、35.6%、38.9%、33.3%和43.3%，均高于疾病對照組和健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。抗SSB陽性率雖高于疾病對照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?？筍cl－70、抗PM－Scl、抗Jo－1、抗CENP B、抗PCNA、抗AMA－M2在SLE組與疾病對照組陽性例數(shù)少，在此未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

表1 兩組血清自身抗體檢測結(jié)果比較［n（%），n＝90］

表2 10項(xiàng)自身抗體診斷SLE的結(jié)果（%）

2.2 SLE患者自身抗體診斷性能比較 見表2。ANA靈敏

度為97.8%，陰性預(yù)測值最高，為94.1%，特異性最低，為35.6%。除ANA以外，抗Sm、抗ds－DNA、AnuA、ARPA、抗nRNP/Sm的靈敏度較低，分別為33.3%、35.6%、38.9%、43.3%和56.7%，但特異性較高，分別為98.9%、98.9%、96.7%、96.7%和95.6%，但相互之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）?？筺RNP/Sm、ARPA、AnuA、抗SSA、抗ds－DNA、抗Sm的正確指數(shù)較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；抗ds－DNA、抗Sm、ARPA、抗nRNP/Sm、AnuA的陽性預(yù)測值較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 SLE組的5種自身抗體的陽性互補(bǔ)關(guān)系 見表3。分析其中特異性和陽性預(yù)測值較高的5種自身抗體的互補(bǔ)關(guān)系，抗Sm、抗ds－DNA、AnuA、ARPA、抗nRNP/Sm分別陰性時，另外4種自身抗體均有一定的陽性率。

表3 SLE組5種自身抗體的陽性關(guān)系［n（%）］

3 討 論

ANA是以各種細(xì)胞核成分為抗原的自身抗體的總稱，其靶抗原主要為真核細(xì)胞的核成分，可見于多種自身免疫性疾病，其特異性不高。本研究結(jié)果顯示，健康對照組ANA均為陰性，ANA在各種自身免疫性疾病中均有一定的陽性檢出率。本研究中SLE患者血清ANA的檢出率最高，陽性率為97.8%，其次在SS、PSS、PM/DM、混合性結(jié)締組織病中的陽性率分別為84.2%、75.0%、54.5%和52.9%。此外 ANA陰性者不能完全排除SLE。本研究90例SLE患者中仍有2例ANA為陰性。在SLE患者自身抗體檢測的相關(guān)參數(shù)中，ANA的靈敏度最高，但特異性最低，結(jié)果表明ANA檢測在臨床上對診斷自身免疫性疾病只能作為一項(xiàng)極為重要的篩選指標(biāo)，不能作為SLE的確診條件。

ENA指抗細(xì)胞核（或整個細(xì)胞）的核酸和核蛋白抗體的總稱，這些抗體對風(fēng)濕性疾病，尤其是對結(jié)締組織病的診斷、鑒別診斷及臨床治療具有重要意義。本文研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者ENA抗體譜中抗SSA、抗Ro－52、抗nRNP/Sm、ARPA、AnuA、抗ds－DNA、抗Sm、AHA及抗SSB比較常見。

抗Sm、抗ds－DNA、AnuA、ARPA被認(rèn)為對SLE具有高度特異性［4］。本研究中SLE組抗Sm、抗ds－DNA、AnuA、ARPA、抗nRNP/Sm特異性較高，均在90.0%以上?？筪s－DNA是公認(rèn)的SLE標(biāo)志性抗體，雖然陽性率不高，但是特異性強(qiáng)，幾乎只在SLE患者中發(fā)現(xiàn)此抗體，并與臨床表現(xiàn)密切相關(guān)。ARA 1997年修定的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)中，其中實(shí)驗(yàn)室檢查抗ds－DNA陽性成為獨(dú)立1條［5］。本研究結(jié)果顯示，SLE組抗ds－DNA的檢出率為35.6%，高于疾病對照組的1.1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；相對于其他抗體，其靈敏度不高，可能由于患者血清中有過多的游離DNA抗原，與相應(yīng)的DNA抗體結(jié)合導(dǎo)致檢測結(jié)果偏低，因此，抗ds－DNA結(jié)果陰性不能排除SLE的診斷［6］。文獻(xiàn)［7］報道，AnuA僅對核小體起作用，并不與其成分中的DNA或AHA反應(yīng)，而且先于抗ds－DNA抗體和AHA形成，AnuA的敏感性高，特異性強(qiáng)，可能成為SLE診斷新的標(biāo)記性抗體。本研究結(jié)果顯示，AnuA的靈敏度為38.9%，特異性高達(dá)96.7%?？筍m在疾病的早期及回顧性研究中有重要意義，它一般只在SLE患者血清中出現(xiàn)，因此，抗Sm已成為ARA 2009年修定的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，但其陽性率低，本研究中其靈敏度為33.3%，特異性及陽性預(yù)測值較高，分別為98.9%和96.8%，與相關(guān)報道相符［8］。近來研究表明，抗nRNP/Sm抗體對SLE有高度特異性，陽性率為10.0%～40.0%［9］；本文其靈敏度率為56.7%，特異性為95.6%，其靈敏度明顯高于疾病對照組。ARPA是SLE患者血清中的胞漿抗原相關(guān)抗體，對SLE具有高度特異性，本研究中發(fā)現(xiàn)SLE患者中ARPA檢出率（43.3%）明顯高于疾病對照組（3.3%），其特異性達(dá)96.7%，說明 ARPA與SLE相關(guān)性較高。

SLE患者常并發(fā)SS，所以抗SSA、抗SSB陽性率在SLE中也較高，抗SSA、抗SSB和抗Ro－52為SLE的血清相關(guān)性自身抗體，此類自身抗體與某種自身免疫性疾病密切相關(guān)，但在其他疾病也可出現(xiàn)，且有一定的敏感性。本文抗SSA、抗SSB和抗Ro－52抗體陽性率在SLE患者中分別為77.8%、20.0%和70.0%，均高于疾病對照組，標(biāo)本中的抗Ro－52和抗SSA一般同時表現(xiàn)為陽性或者陰性。目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為SSA抗原包含了Ro－52抗原，那么，若抗Ro－52陽性，抗SSA也必定陽性，但本文有14例標(biāo)本表現(xiàn)為抗SSA陽性/抗Ro－52陰性，4例標(biāo)本表現(xiàn)為抗SSA陰性/抗Ro－52陽性，部分學(xué)者認(rèn)為Ro－52并不屬于Ro/SSA抗原，所以Ro－52和SSA可不表現(xiàn)為同時陽性或者陰性 。

分析SLE組的5種自身抗體的陽性互補(bǔ)關(guān)系發(fā)現(xiàn)，任一種抗體陰性的SLE患者血清中均可檢測到其他4種抗體，故聯(lián)合多項(xiàng)檢測在診斷SLE時有明顯的互補(bǔ)作用。

綜上所述，對自身抗體的聯(lián)合檢測可提高SLE診斷的敏感性，更有利于全面分析病情所處的階段，避免單項(xiàng)檢測出現(xiàn)的漏診情況，提高SLE的檢出率，對SLE病情的診斷、分型、治療、追蹤和預(yù)后判定有重要的臨床意義。所以，抗體的聯(lián)合檢測作為臨床常規(guī)項(xiàng)目使用對提高SLE的診斷具有重要意義。

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