李厚洋蔡其輝田宏現(xiàn)吳開慧

（1 常德市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖南 常德 415000；2 吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000）

HPLC法測(cè)定縮泉膠囊中烏藥醚內(nèi)酯的含量

李厚洋1蔡其輝2田宏現(xiàn)2吳開慧1

（1 常德市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖南 常德 415000；2 吉首大學(xué)生物資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，湖南 吉首 416000）

目的 建立采用高效液相色譜法測(cè)定縮泉膠囊中烏藥醚內(nèi)酯含量的方法。方法 采用Shimadzu高效液相色譜儀，C18色譜柱；流動(dòng)相為乙腈：水（56∶44），檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm，流速為1.0mL/min。結(jié)果 烏藥醚內(nèi)酯在4.8～10.8μg范圍內(nèi)，呈現(xiàn)出良好的線形關(guān)系，r=0.9998；平均回收率98.2%，RSD為0.88%（n=5）。結(jié)論 本方法操作簡(jiǎn)單易行，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確可靠，可用于縮泉膠囊的質(zhì)量控制。

縮泉膠囊；高效液相色譜法；烏藥醚內(nèi)酯

縮泉膠囊由山藥、益智仁、烏藥3味藥組成的復(fù)方制劑縮泉膠囊，具有補(bǔ)腎縮尿。用于腎虛之小便頻有頻數(shù)，夜臥遺尿[1]；而烏藥為樟科植物烏藥（Lindera aggregata（Sims）Kostern.）的干燥塊根，具有順氣止痛，溫腎散寒功能，用于胸腹脹痛，氣逆喘急，膀胱虛冷，遺尿尿頻，疝氣，痛經(jīng)等[2]，其主要有效成分是烏藥醚內(nèi)酯[3，4]，其中最能體現(xiàn)烏藥特征的成分應(yīng)是呋喃倍半萜及其內(nèi)酯類成分[5]。因此，本文采用高效液相色譜法，對(duì)縮泉膠囊中烏藥藥材的烏藥醚內(nèi)酯含量進(jìn)行測(cè)定，為縮泉膠囊的推廣應(yīng)用、質(zhì)量控制提供有效依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

Shimadzu LC-10AT泵（日本島津公司），Shimadzu SPD-10A紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；Rheodyne 7125六通進(jìn)樣閥（loop=20μL）（日本島津公司）；Shimadzu Pack-ODS柱，250×4.6mm（日本島津公司）；N3000色譜工作站+forWindows2000（浙江大學(xué)智能研究所）；FA-2004電子分析天平（上海天平儀器廠）；KQ-250E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

烏藥醚內(nèi)酯（批號(hào)：200602，中國(guó)藥品生物制品檢定所）?？s泉膠囊（湖南漢森制藥有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：每粒裝0.3g，本醫(yī)院藥劑科提供）。乙腈（湖南師大化學(xué)試劑廠，色譜純），乙醚（湖南師大化學(xué)試劑廠，分析純）；甲醇（湖南師大化學(xué)試劑廠，分析純）；水為二次重蒸餾水（自制）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品15.0mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1mL中含烏藥醚內(nèi)酯0.6mg的對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，約1.0g，精密稱定，置索氏提取器中，加入乙醚30mL，提取4h，提取液揮干，殘?jiān)眉状挤执稳芙?，轉(zhuǎn)移至25mL容量至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件

色譜柱：Shimadzu Pack-ODS柱；乙腈∶水（56∶44）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm，靈敏度：0.005AUFS，流速為1mL/min，柱溫:室溫，烏藥醚內(nèi)酯在此色譜條件下的保留時(shí)間為16min；具體見色譜圖1：對(duì)照品A、樣品C。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 準(zhǔn)確性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定峰面積值，計(jì)算出烏藥醚內(nèi)酯的RSD為1.46%。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

圖1 烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照品（A）、空白（B）、樣品（C）色譜圖

2.4.2 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：080201），按2.2項(xiàng)下供試品溶液操作方法，制備6份供試品溶液，按在上述色譜條件下，精密吸取10μL，重復(fù)平行測(cè)定，根據(jù)峰面積值，計(jì)算出烏藥醚內(nèi)酯的RSD為1.10%。

2.4.3 線性關(guān)系考察

取上述對(duì)照品的溶液分別以8.0，10.0，12.0，14.0，16.0，18.0μL進(jìn)樣分析，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積值（Y）為橫坐標(biāo)、以對(duì)照品的進(jìn)樣量（X）為縱坐標(biāo)作圖，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程分別為：Y（烏藥醚內(nèi)酯）=7362X+431.6，r=0.9998。結(jié)果表明烏藥醚內(nèi)酯進(jìn)樣量在4.8～10.8μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.4 空白試驗(yàn)

按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與處方比例制備缺味（烏藥）中藥的陰性樣品的制劑，按2.2項(xiàng)下供試品溶液操作方法進(jìn)行樣品處理，所得的空白試液，精密吸取20μL，注入液相色譜儀中，測(cè)定分析，結(jié)果顯示無(wú)干擾，具體見色譜圖圖1：空白（B）。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號(hào)為080201，含量為0.10mg/粒），每2h進(jìn)樣一次，共測(cè)定6次，每次20μL，將峰面積代入回歸方程，計(jì)算，樣品中烏藥醚內(nèi)酯的RSD值（n=6）為1.24%；試驗(yàn)結(jié)果顯示，供試品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取裝量差異項(xiàng)下的縮泉膠囊（批號(hào)為080201，含量為0.10mg/粒）的內(nèi)容物，6份，每份1.0g，每份加入精密量取的烏藥醚內(nèi)酯對(duì)照液各0.1mL，6份樣品同時(shí)提取，其方法同2.2項(xiàng)下的供試品溶液制備方法，制備樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果烏藥醚內(nèi)酯的加樣平均回收率為 98.2%；RSD分別為0.88% （表1）。

2.5 樣品測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與不同批號(hào)縮泉膠囊按2.2項(xiàng)下的供試液溶液制備方法，制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算出樣品中烏藥醚內(nèi)酯的含量，結(jié)果分別見表2。

表2 縮泉膠囊中烏藥醚內(nèi)酯含量測(cè)定結(jié)果（n=5）

3 討 論

3.1 色譜條件的選擇

本試驗(yàn)，對(duì)流動(dòng)相乙腈和水的比例進(jìn)行試驗(yàn)考察，考察20∶80、30∶70、40∶60、60∶40、70∶30、80∶20等比例乙腈與水流動(dòng)相溶液；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：隨著乙腈濃度的增加，出峰的時(shí)間提前，使樣品的分離度不理想[6]；而乙腈濃度減少時(shí)，樣品出現(xiàn)雙峰、拖尾等現(xiàn)象；最后經(jīng)試驗(yàn)確定，以乙腈∶水（5∶44）的流動(dòng)相，獲得較好的峰形，呈正態(tài)分布，分離度＞1.5。

3.2 提取時(shí)間的考察

采用乙醚為萃取溶媒，對(duì)萃取時(shí)間所得烏藥醚內(nèi)酯含量進(jìn)行了考察，結(jié)果萃取4h后含量不再變化，故本實(shí)驗(yàn)選擇萃取時(shí)間為4h。

3.3 本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定縮泉膠囊中烏藥藥材中烏藥醚內(nèi)酯的含量，其提取方法簡(jiǎn)便，分析快速，與本藥品原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用薄層鑒別制備后的烏藥藥材的質(zhì)量，精密度更高，能更好地用于縮泉膠囊的質(zhì)量控制。

參考方獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)WS3-654(Z-130)-2003(Z)[S].

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:71-72.

[3] 蔡立紅,俞桂新,王崢濤,等.高效液相色譜法測(cè)定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯的含量[J].中國(guó)中藥雜志,2004,29(7):657-659.

[4] 閆利利,王金芳,李秋月,等.烏藥的化學(xué)成分研究[J].中國(guó)藥業(yè),2013, 22(2):16-17.

[5] 王軍偉,阮冰.烏藥的植化及藥理研究概況[J].浙江中醫(yī)雜志,2006, 41(11):6751.

[6] 余翠琴,陳方亮.高效液相色譜法測(cè)定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯[J].中草藥,2009,40(6):983-984.

HPLC Determination of Linderane in Suoquan Capsules

LI Hou-yang1, CAI Qi-hui2, TIAN Hong-xian2, WU Kai-hui1
（1 Department of Pharmacy, Changde First People's Hospital, Changde 41500, China; 2 Biological Resources and Environment Science College, Jishou University, Jishou 416000, China）

Objective HPLC methods were established for the determination linderane of Suoquan capsules. Methods The separation was performed on a Shimadzu HPLC, C18 chromatography column; The mobile phase was composed of acetonitrile-water （56∶44）；The flowrate was 1.0mL/min; The detection wavelenth was 235nm. Results There is a good linear relationship within the rang of 4.8～10.8μg, r=0.9998; The average recovery was 98.2%; RSD=0.88%. Conclusions This method is simple, reproducible, accurate and reliable, and can be used for quality control of Suoquan capsule.

Suoquan; Capsules; HPLC; Linderane

R282.710.3

B

1671-8194（2013）33-0033-02