田汝芳 劉 鵬 厲超飛

山東健康藥業(yè)有限公司，山東 濟南 250022

乳癖寧膠囊由赤芍、柴胡、川芎、當歸等10味中藥組成，具有活血行氣，軟堅散結的功效。赤芍為方中君藥，所含成分芍藥苷為乳癖寧膠囊主要有效成分之一，具有擴張血管、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎等功效［1－2］。芍藥苷為赤芍中主要有效成分，因此，通過檢測制劑中芍藥苷的含量來控制赤芍的含量，對確保制劑的療效有重要意義。為此，用高效液相色譜法對乳癖寧中芍藥苷的含量測定方法進行了研究。該法簡便、快速、重現(xiàn)性好，可作為該產(chǎn)品質量控制方法。

1 儀器與試藥

1220型安捷倫高效液相色譜儀;METTLER電子分析天平;KQ－300B型超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)。芍藥苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號:0736－200219);乳癖寧膠囊 (批號:20120613、20120615、20120620)。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:ODS C18(150 mm×4.6 mm，5 m)，流動相:甲醇－0.05 mol/L磷酸二氫鉀－1%磷酸溶液(40∶59∶1)，流速:1 ml/min，檢測波長:230 nm，柱溫:室溫，進樣量10 L，理論板數(shù)按芍藥苷峰計不低于2000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥器中干燥36小時的芍藥苷對照品12.36 mg，置25ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻;再精密量取5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得 (濃度為49.44g/ml)。

2.3 供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細，取約0.5 g，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超聲處理 (功率250W，頻率33kHz)30min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液液的制備 按照處方量，以相同的制劑工藝制備缺少赤芍的陰性對照樣品，照2.3供試品溶液的方法制得陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性考察照2.1項所述色譜條件進行測定。精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 L，分別注入液相色譜儀。結果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上檢出相應的色譜峰，芍藥苷色譜峰與相鄰色譜峰的分離度大于1.5;陰性對照在與對照品溶液色譜峰相應的位置上沒有相應的色譜峰，不干擾供試品溶液的測定。結果見圖1。

2.6 線性關系考察 精密量取芍藥苷貯備液 (494.4g/ml)，分別精密量取1、2、3、4、5ml，分別置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 L，注入液相色譜儀，照2.1項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，以對照品濃度 (Y)為縱坐標，色譜峰峰面積 (X)為橫坐標，繪制標準曲線。結果，芍藥苷回歸方程為:Y=140.46X+101.03，r=0.9996，表明在19.776～98.880 g/mL范圍內(nèi)，芍藥苷色譜峰峰面積與對照品濃度有良好的線性關系。

2.7 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液10 L，注入液相色譜儀，照2.1項下所述的色譜條件進行測定，連續(xù)測定6次，記錄色譜峰峰面積并計算相對標準偏差 (RSD)。結果，芍藥苷對照品色譜峰峰面積平均值為7169.5，RSD=0.72%，表明儀器的精密度良好。

2.8 重復性試驗 取同一批號乳癖寧膠囊樣品 (批號20120615)6份，按照2.3項下所述方法制備供試品溶液，照2.1項下所述液相條件測定，計算樣品中芍藥苷的含量及RSD。結果平均值為3.66 mg/g，RSD為0.57%，表明該方法的重復性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗 取乳癖寧膠囊樣品，照2.3項下所述方法制備供試品溶液，照2.1項下所述液相條件測定，分別精密吸取供試品溶液10 L，于0、2、4、6、8小時測定，記錄峰面積，并計算RSD。結果，芍藥苷峰面積的平均值為5362.8，RSD=1.09%，表明供試品溶液中的芍藥苷在8小時內(nèi)測定的結果穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗 取已知芍藥苷含量 (3.66mg/g)的樣品0.25g，共6份，分別置50ml量瓶中，分別精密加入1.036mg/ml的芍藥苷對照品溶液1ml，按2.3項下所述方法制備供試品溶液，并按2.1項下所述色譜條件測定，計算回收率及RSD。結果平均回收率為100.11%，RSD為0.95%，表明該方法能夠準確測定樣品中的芍藥苷含量。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果

2.11 樣品測定 取3批乳癖寧膠囊樣品，照2.3項下所述方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液 (芍藥苷含量49.44 g/ml)和供試品溶液各10 L，注入液相色譜儀，照2.1項下所述色譜條件測定，記錄色譜圖，以外標法計算芍藥苷含量，見表2。

表2 三批樣品含量測定結果 (n=3)

3 討論

3.1 本品具有活血行氣，軟堅散結的功效，用于氣滯血瘀所致的乳腺增生病。赤芍為方中君藥，有效成分芍藥苷具有擴張血管、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎等作用［1－2］。故選擇芍藥苷作為本品的含量測定指標，與本品的功能具有較高的相關性。

3.2 預試驗考察了不同提取溶劑甲醇與70%乙醇做提取溶劑時芍藥苷的含量，比較了不同提取方法超聲與回流提取時芍藥苷的含量，比較了不同超聲時間20min、30min、40min時芍藥苷的含量，最終選擇用甲醇做提取溶劑，超聲提取30min。

3.3 流動相選擇中，分別考察了乙腈－0.1%磷酸溶液、甲醇－水等系統(tǒng)［3－6］的不同配比，結果表明甲醇－0.05mol·L－1磷酸二氫鉀溶液－1%磷酸 (40∶65∶1)為流動相最為理想，此條件下芍藥苷與其他成分能夠較好的分離，陰性無干擾，且樣品處理方法簡單，可作為本品質量控制的理想方法。

［1］阮金蘭，趙鐘祥，曾莊忠，等．赤芍化學成分和藥理作用的研究進展［J］．中國藥理學通報，2003，19(9):965－970．

［2］楊媛媛，周剛，馬曉康，等．赤芍的研究進展［J］．醫(yī)藥導報，2008，27(1):67－69．

［3］梁可文，龍云，施丹．HPLC法測定防芷鼻炎片中芍藥苷的含量［J］．中國民族民間醫(yī)藥，2012，21(16):67－68．

［4］林月英，董憲鳳．HPLC法測定三九胃泰顆粒中芍藥苷的含量［J］．天津藥學，2012，24(4):12－13．

［5］李惠珍，羅君，周蘭，等．RP－HPLC法測定杜仲補天素片中芍藥苷的含量［J］．中國民族民間醫(yī)藥，2011，20(7):45－46．

［6］奚永蘭，徐富柱．高效液相色譜法測定乳寧顆粒中芍藥苷的含量［J］．中國民族民間醫(yī)藥，2012，21(6):42－43．