盧曉麗 馬慶東 王新宇 田樹革

松補力口服液由甘松單味藥組成。該方收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊》，是一種具有養(yǎng)心、安神、增強胃功能，用于治療心悸、神經(jīng)衰弱，腹痛、胃病等疾病的口服液體制劑［1］。

阿魏酸(ferulicacid)是松補力口服液的有效成分之一，其化學(xué)名4-羥基-3-甲氧基肉桂酸，是桂皮酸的衍生物之一。藥理學(xué)研究表明，阿魏酸具有抗氧化和清除自由基作用，能有效抑制血小板聚集和血栓形成，增加冠脈血流量。臨床用于治療血管栓塞性脈管炎、動脈粥樣硬化、急性腦血栓和偏頭痛及動脈粥樣硬化等癥［2］。

中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊中僅對松補力口服液進行了相對密度及pH值的檢查，甘松在中國藥典2010版中也僅進行了薄層鑒別［3］，為控制本品質(zhì)量，本實驗增加了松補力口服液重金屬的檢查，對口服液中有效成分阿魏酸、甘松新酮進行薄層鑒別，采用高效液相色譜法(HPLC)對松補力口服液中的阿魏酸進行含量測定，對其控制松補力口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-6AD高效液相色譜儀，SPD-20A型紫外檢測器，CBM-20A色譜工作站(島津公司，日本)，KQ-200KDE型高功率數(shù)控超聲清洗器 (超聲儀器有限公司，昆山);AL204型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，上海);薄層顯色加熱器(武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司，武漢);雷磁PHSJ-3F實驗室pH計(上海儀電科學(xué)儀器有限公司，上海);Millipore超純水儀(密理博公司，美國)。

1.2 試劑與樣品

松補力口服液(規(guī)格10 ml/支，天山蓮藥業(yè)有限公司提供批號 02120603、02120602、02120603);阿魏酸對照品(成都領(lǐng)航者生物技術(shù)有限公司，批號:YY20100722);甘松新酮對照品(成都曼思特生物科技有限公司，批號:MUST-11090901);甲醇為色譜純;其他試劑均為分析純;水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 阿魏酸薄層鑒別 取松補力口服液150 ml，用150 ml乙醚萃取，取乙醚層，重復(fù)一次，將兩次乙醚液混合，70℃水浴蒸干，用10 ml甲醇溶解并定容，即得;稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g，用甲醇配制成每1 ml含阿魏酸0.1 mg的對照品溶液。取上述溶液各10μl，分別點與同一硅膠G板上，采用薄層色譜法(TLC)(中國藥典2010年版一部附錄VIB法)以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰乙酸(6∶5∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，紫外光燈(365 nm)下觀察;供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同熒光斑點。見圖1。

2.1.2 甘松新酮薄層鑒別 取松補力口服液50 ml，用50 ml石油醚(60～90℃)萃取，取石油醚層，70℃水浴濃縮約為5 ml，并用石油醚定容至5 ml，即得;甘松新酮對照品溶液制備:稱取甘松新酮50 mg用甲醇配制制成每1 ml含甘松新酮0.5 mg的對照品溶液;取上述供試品溶液、甘松對照品溶液10μl，分別點在同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G板上，以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑展開，取出，晾干，噴0.5%香草醛濃硫酸顯色，在105℃加熱至顯色清晰;供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同熒光斑點。見圖2。

2.2 檢查

2.2.1 相對密度 根據(jù)2010版中國藥典附錄VIA相對密度測定法第一種方法比重瓶法測定［3］，相對密度平均值為(1.02±0.0018)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.21%，相對密度應(yīng)不低于1.02。

2.2.2 pH值 根據(jù)2010版中國藥典附錄VIH pH值測定法測定［3］，pH 值平均值為(4.16±0.0151)，RSD為0.72%，pH值應(yīng)為3～5之間。

2.2.3 重金屬 根據(jù)2010版中國藥典附錄ⅦH重金屬檢查法第一法檢查。三份口服液甲管中顏色比乙管中淺，按藥典標(biāo)準(zhǔn)中不得超過20μg/g測定，可判定三份口服液均不超標(biāo)。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱:Hypersil ODS C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇∶1%冰乙酸水(22∶78)，流速1 ml/min，檢測波長為320 nm，柱溫為35℃，進樣量20μl。

2.3.2 溶液配制 對照品溶液的制備精確稱取0.0101 g阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品，以甲醇定容于10 ml容量瓶中，配成濃度為1 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，過0.45μm的微孔濾膜，備用。

樣品溶液的制備:吸取松補力口服液150 ml，加150 ml乙醚萃取兩次，合并兩次乙醚液蒸干，移入10 ml容量瓶中加甲醇溶解，并定容到10 ml。過0.45μm的微孔濾膜，備用。

2.3.3 測定法 流動相以:甲醇:1%冰乙酸水(22∶78)，流速 1 ml/min，檢測波長為 320 nm，柱溫為35℃的色譜條件，進樣量20μl，對阿魏酸對照品及松補力口服液樣品進行測定。對照品及松補力口服液色譜圖見圖3、圖4。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液20、40、60、80、100、120、140 μg/ml，各進樣 5.0 μl，按上述的色譜條件測定色譜峰面積，以阿魏酸對照品濃度為橫坐標(biāo)、測得阿魏酸對照品的色譜峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸，得到回歸方程Y=2491.2X+116321(r=0.9966)，線性范圍20～140 μg/ml。

2.3.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液5.0μl，連續(xù)進樣5次，按上述色譜條件測定。計算得到RSD為0.83%，結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗 穩(wěn)定性試驗取同一批試品溶液，分別在0，2，4，6，8，24 小時時依法測定。結(jié)果峰面積積分值的RSD為1.07%，結(jié)果表明，供試品溶液在24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗 重復(fù)性試驗量取同一批樣品6份，按照樣品溶液處理方法及色譜條件操作，測定阿魏酸平均含量為5.38μg/ml，RSD=5.60%，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收試驗 分別精密量取已知阿魏酸含量的松補力口服液6份，每份150 ml，分別精密加入4μg同一批號阿魏酸對照品，按照3.2樣品處理方法處理后測定每份含量，標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量，見表1。

2.3.9 樣品測定 取3批松補力口服液中試產(chǎn)品，吸取松補力口服液150 ml，加150 ml乙醚萃取兩次，合并兩次乙醚液蒸干，移入10 ml容量瓶中加甲醇溶解，并定容到10 ml。過0.45μm的微孔濾膜，備用。以流動相:甲醇∶1%冰乙酸水(22∶78)，流速1 ml/min，檢測波長為320 nm，柱溫為35℃的色譜條件，進樣量20μl，對松補力口服液樣品進行測定。結(jié)果見表2。

表1 阿魏酸加樣回收率試驗結(jié)果

表2 3批松補力口服液中阿魏酸含量

3 討論

本實驗增加了對松補力口服液重金屬檢查、有效成分阿魏酸及甘松新酮的薄層鑒別，對于甘松新酮的薄層鑒別采用2010中國藥典一部中甘松中甘松新酮的薄層色譜展開條件［3］，展開效果良好。阿魏酸的薄層條件分別采用。氯仿∶乙酸乙酯∶冰醋酸(6∶4∶1)、甲苯∶三氯甲烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸(8∶4∶2∶1)展開效果不佳，最后經(jīng)多次試驗確定阿魏酸的薄層條件為甲苯∶三氯甲烷∶乙酸乙酯∶冰醋酸(6∶5∶2∶1)。

目前阿魏酸的含量測定方法主要有高效液相色譜法［4-9］、薄層色譜法［10］、熒光法［11］、氣相色譜法［12］等。松補力口服液由甘松一味中藥材組成，但是其提取工藝為水蒸氣蒸餾法提取，成分復(fù)雜，對于口服液處理根據(jù)王玉等［13］發(fā)表的HPLC測定參芍口服液中阿魏酸含量中的處理方法確定用乙醚萃取兩次阿魏酸的含量最佳。流動相選擇時，分別以甲醇∶水溶液(30∶70)、甲酸∶1%冰乙酸水溶液(35∶65)、甲醇∶1%冰乙酸水溶液(25∶75)等流動相體系進行試驗，制劑中的其他組分與阿魏酸不能有效分離;波長選擇時，在200～280 nm、4～12分鐘干擾峰眾多，無法明確識別阿魏酸峰。因此，采用流動相為甲醇∶1%冰乙酸水(22∶78)，檢測波長為320 nm，阿魏酸與其他組分可完全分離，達(dá)到較佳的結(jié)果。該法簡便快捷，測定結(jié)果穩(wěn)定可靠，且重現(xiàn)性好，為制劑的質(zhì)量控制提供了實驗依據(jù)。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·維吾爾藥分冊［M］.新疆，新疆科技衛(wèi)生出版社，1999:154.

［2］葉資萍，苑洪忠，趙凱.HPLC法測定養(yǎng)血當(dāng)歸軟膠囊中阿魏酸的含量［J］.中國現(xiàn)代中藥，2007，9(1):18-19.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:79.

［4］農(nóng)毅清，林素梅，莫海玲.高效液相色譜法測定加味歸芪片中阿魏酸的含量［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，12(2):58-60.

［5］張國民，齊赤虹，楊工昶，等.高效液相色譜法測定復(fù)方益母膠囊中阿魏酸的含量［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2008，15(2):48-50.

［6］單玉榮.HPLC法測定棗參合劑中阿魏酸的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2007，11(6):519-520.

［7］邵玉玲，強百杰，劉專專，等.HPLC法測定濃縮當(dāng)歸丸中阿魏酸的含量［J］.分析測試技術(shù)與儀器，2007，13(3):211-214.

［8］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［S］.2010年版.北京:中國醫(yī)藥科出版社，2010:124.

［9］馮藝戎.TLCS法測定安中養(yǎng)血合劑中阿魏酸的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2010，14(6):654-655.

［10］王瑩，羅紅群，李念兵.熒光法測定當(dāng)歸中阿魏酸的含量［J］.西南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2007，29(1):15-19.

［11］李秋怡，干國平，王光忠，等.氣相色譜法測定川芎油中阿魏酸的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2007，18(7):1687-1688.

［12］王玉，侯林中，張熙潔，等.HPLC測定參芍口服液中阿魏酸含量［J］.中國藥學(xué)雜志，2010，45(11):1674-1675.