李詠梅 佘朋桂 肖冰梅

湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208

星毛冠蓋藤 (Pileostegia tomentella Hand.Mazz)是土家族常用藥[1]，全年可采。具有祛風(fēng)除濕，散瘀止痛，接骨的功效，臨床常應(yīng)于腰腿酸痛、風(fēng)濕麻木，外用治跌打損傷、骨折、外傷出血[2]。浙江、江西、湖南、湖北、四川、貴州、廣東、臺灣等地分布較廣，資源蘊(yùn)藏量豐富。但其在應(yīng)用時隨意性較強(qiáng)，根、莖、花和葉可分別入藥[3]，亦可全株入藥[2]，直接影響到療效的可靠性與穩(wěn)定性。應(yīng)用HPLC法對星毛冠蓋藤不同藥用部位進(jìn)行分析，以期了解其不同藥用部位化學(xué)成分的差異性，從而為臨床用藥選擇位及其化學(xué)成分研究提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

LC－10AT液相色譜 (日本島津);C18色譜柱4.6mm×250mm，5μm(依利特)。甲醇、乙腈為色譜純;水為純凈水，其余試劑為分析純。蘆丁購自上海源葉生物科技有限公司。星毛冠蓋藤采自湖南懷化，經(jīng)筆者鑒定為虎耳草科冠蓋藤屬星毛冠蓋藤Pileostegia tomentella Hand.Mazz。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 取過50目篩的各藥用部位粉末10g，置于100ml的圓底燒瓶中。依次加入70%的乙醇100ml、50ml，在90℃恒溫水浴分別回流1.5h、1h。過濾，合并慮液。精密移取濾液1ml，用70%乙醇定容于10ml容量瓶中。微孔濾膜過濾，濾液為樣品溶液。精密稱取蘆丁，配制成濃度為0.1mg/ml對照品溶液。

2.2 黃酮類化合物鑒別 取過50目篩的藥材全株粉末，按“2.1”項(xiàng)下方法提取后過濾。濾液與鹽酸－鎂粉反應(yīng)顏色泡沫處呈紫紅色，與醋酸鉛反應(yīng)生成淺黃色沉淀，與NaOH溶液反應(yīng)呈黃色，加鹽酸后顏色褪去。

2.3 色譜條件 分別以甲醇－水 (10:90)、甲醇－水(20:80)、甲醇 －水 (30:70)、甲醇 －水 (40:60)、甲醇 －水 (50:50)、乙腈 －水 (10:90)、乙腈 －水(20:80)為流動相。在流速為0.8ml/min，波長為254nm，進(jìn)樣量為10μl，柱溫為室溫條件下洗脫90min。乙腈－水系統(tǒng)得到的色譜圖譜出峰數(shù)目少且保留時間短，不適合于星毛冠蓋藤。甲醇－水系統(tǒng)以甲醇－水 (40:60)的分離效果較好，出峰數(shù)目較多。在保留時間33min后無峰再出現(xiàn)。

因此選擇甲醇－水 (40:60)作為本實(shí)驗(yàn)的流動相，洗脫時間為40min。在此條件下根﹑莖﹑葉和枝的高效液相圖譜見圖1－5;蘆丁與各部分峰的數(shù)目、保留時間、峰面積和峰面積百分比見表1－5所示。

表1 蘆丁

表2 星毛冠蓋藤根的色譜情況

表3 星毛冠蓋藤莖的色譜情況

表4 星毛冠蓋藤枝的色譜情況

表5 星毛冠蓋藤葉的色譜情況

3 分析與討論

在進(jìn)行高效液相等度洗脫分析時，甲醇－水 (40:60)對藥用各部位均具有較好的分離效果。在色譜條件下，根有四個峰，莖有十二個峰，枝有六個峰，葉有六個峰。莖和葉在29.541min與29.542min處各有一個峰保留時間接近，可視為同一類物質(zhì)，但對峰面積及其百分比相比較，該物質(zhì)在莖和葉的含量和所占比重有很大差異。枝和根在此保留時間附近內(nèi)無峰出現(xiàn)，說明不含有此成分。從各部分峰的保留時間間隔分析，根、莖較枝、葉均勻，表明枝與葉所含化合物的物理或化學(xué)性質(zhì)差異性較大，可能和根、莖與枝、葉之間新陳代謝的差異性有關(guān)系。各藥用部位在6.500－6.550min、7.217－7.285min兩區(qū)間均有且只有一個峰出現(xiàn)。反映了各藥用部位化學(xué)成分的個性與共性關(guān)系，亦為在臨床使用時是否區(qū)分藥用部位研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

黃酮類化合物是中藥中常見的一類有效成分，具有多種生物活性[4]。如葛根總酮、葛根素和銀杏葉總黃酮等具有擴(kuò)張冠狀血管的作用，臨床用于治療冠心病。蘆丁、橙皮苷等具有降低毛細(xì)血管脆性和異常通透性作用，可用做毛細(xì)血管出血的止血藥和治療高血壓的輔助藥。實(shí)驗(yàn)證實(shí)，星毛冠蓋藤中含有黃酮類化合物，莖與枝含有蘆丁，為后續(xù)的開發(fā)利用及活性成分的深入研究提供科學(xué)的參考依據(jù)。

[1]中國藥材公司.中國中藥資源[M].北京:科學(xué)出版社.1995:46.

[2]趙運(yùn)林，喻勛林，傅曉華.湖南藥用植物資源[M].長沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社，2009:446－447.

[3]浙江藥用植物志編寫組.浙江藥用植物斟[M].上冊.杭州:浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1980:460.

[4]匡海學(xué).中藥化學(xué)[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社，2006.