趙新超 馬 飛 樸蓮荀

延邊大學(xué)藥學(xué)院，吉林 延吉 133002

缺氧對機(jī)體是一種劣性刺激，可以影響機(jī)體各種代謝，特別是機(jī)體的氧化供能，最終導(dǎo)致機(jī)體的心、腦等主要器官由于能量供應(yīng)不足而死亡[1]。銀杏葉提取物含有豐富的黃酮類和萜內(nèi)酯等活性成分，具有擴(kuò)張血管、改善血管機(jī)能、促進(jìn)血液循環(huán)和代謝、保護(hù)機(jī)體組織和抗氧化等作用[2]。通過采用常壓密閉缺氧造成小鼠腦缺氧模型，研究銀杏葉提取物對腦缺氧保護(hù)作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動物 清潔級昆明 (KM)種小鼠，雌雄兼用，體重(20±2)g，由延邊大學(xué)實驗動物中心提供 (許可證號SCXK吉2011－007)。

1.2 藥品及試劑 銀杏葉提取物由延邊大學(xué)醫(yī)藥研究中心提供批號:20110702。丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)測定試劑盒 (南京建成生物工程研究所批號分別為:20120401;20120327)。其余試劑均為分析純。

1.3 儀器設(shè)備 Backman高速冷凍離心機(jī) (德國);SUNRISE酶標(biāo)儀 (上海金鴛醫(yī)療器械有限公司)。

2 方法

2.1 常壓耐缺氧實驗 小鼠24只，隨機(jī)分為3組:生理鹽水組、銀杏提取物大、小劑量組，每組8只，連續(xù)灌胃14天，每日1次。每組于末次給藥后1h，將小鼠置于放入10g鈉石灰的125ml廣口瓶中密閉，造成小鼠腦缺氧模型，觀察各組小鼠存活時間。

2.2 生化指標(biāo)的測定 另取32只小鼠隨機(jī)分為4組，空白對照組，生理鹽水組，銀杏提取物大 (100mg/kg)、小(50mg/kg)劑量組，每組8只。除了空白組外，灌胃給藥或同體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14天，每天1次。于末次給藥后1h后，小鼠置于盛有10g鈉石灰的125ml廣口瓶中，密閉缺氧10min后，取出小鼠立即取血處死，分離血清備用。按試劑盒說明書方法測定血清中的MDA、NO水平。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理 以SPSS17.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，所有實驗數(shù)據(jù)用表示，采用t檢驗進(jìn)行兩組間差異比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對小鼠常壓密閉缺氧存活時間的影響 由表1可知，不同劑量的銀杏葉提取物均能顯著延長小鼠在密閉缺氧條件下的存活時間，與生理鹽水組比較具有顯著性差異 (P＜0.05;P ＜0.01)。

表1 銀杏葉提取物對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響(n=8，±s)

表1 銀杏葉提取物對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響(n=8，±s)

注:與生理鹽水組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別 劑量 (mg/kg) 存活時間 (min)延長率 (%)25.78±3.15 －銀杏提取物組 50 29.63±3.85* 14.93 100 32.25±4.17＊＊生理鹽水組 －25.10

3.2 對小鼠腦組織中MDA、NO水平的影響 由表2可知，與正?？瞻讓φ战M相比，生理鹽水組MDA、NO的水平顯著增加 (P＜0.01)。不同劑量的銀杏葉提取物與生理鹽水組相比，均能抑制密閉缺氧小鼠血清中MDA、NO水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)?！纒)

表2 銀杏提取物對小鼠血清中MDA、NO水平的影響(n﹦8，

4 討論

常壓耐缺氧實驗為抗整體小鼠缺氧實驗，是篩選治療心腦組織因缺血缺氧引起功能障礙的常用方法之一。常壓密閉缺氧最終導(dǎo)致小鼠心臟和腦缺氧而死亡實驗結(jié)果顯示:銀杏葉提取物能顯著提高小鼠的常壓耐缺氧存活時間，說明銀杏葉提取物對腦缺氧有很好的改善作用。

自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，MDA是過氧化脂質(zhì)代謝產(chǎn)物，生物體內(nèi)MDA含量越高，表明氧自由基損傷越重，對臟器、組織細(xì)胞的毒性越大[3]。實驗結(jié)果顯示，小鼠常壓密閉缺氧條件下血清中MDA含量與正?？瞻讓φ战M比較差異顯著，說明小鼠常壓密閉缺氧條件下體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物的形成明顯增加。而給予銀杏葉提取物后能夠明顯降低血清中MDA水平，表明銀杏葉可顯著降低機(jī)體中脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。

另外，NO作為一種神經(jīng)遞質(zhì)在缺氧缺血性腦損傷中日益受到重視。NO既是體內(nèi)一種不可缺少的信息分子，又具有細(xì)胞毒作用，可以通過毒性作用、自由基損傷而加重腦缺氧缺血性腦損傷[4]。實驗結(jié)果顯示，小鼠常壓密閉缺氧條件下小鼠血清中NO含量顯著高于空白對照組，說明小鼠常壓密閉缺氧條件下體內(nèi)NO合成明顯增加，而銀杏葉提取物后能夠明顯降低血清中NO水平，說明銀杏葉能有效的抑制小鼠體內(nèi)NO合成，減輕對臟器、組織細(xì)胞的毒性，從而發(fā)揮對腦缺氧的保護(hù)作用。

[1]程玉芳，柳巨雄，欒新紅，等.中藥復(fù)方制劑對大鼠耐缺氧能力的影響及其作用機(jī)制的研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2003，22(6):3－5.

[2]陳仕奇，陳龍浩，蔣琳蘭.銀杏葉提取物和茶多酚聯(lián)用對缺氧環(huán)境中內(nèi)皮細(xì)胞的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(23):11549－11550.

[3]Dillioglugil MO，Kira HM，Demira C，et al.Effect of pentylenetetrazole and sound stimulation induced single and repeated convulsive seizures on the MDA，GSH and NO levels，and SOD activities in rat liver and kidney tissues [J].Brain Research Bulletin，2010，83(2):356－359.

[4]王建平，蘇怡凡，陳虹.一氧化氮、一氧化氮合酶、丙二醛在新生兒缺氧缺血性腦病中的作用[J].實用兒科臨床雜志，2003，18(8):627－628.