賈新梅

甘肅省武威市中醫(yī)醫(yī)院，甘肅武威 733000

松蘿是子囊地衣綱茶漬目松蘿科松蘿屬植物，又名樹(shù)掛，松落，有長(zhǎng)松蘿和破莖松蘿之分，是一種藻類(lèi)和菌類(lèi)共生植物，在我國(guó)分布廣泛，有著悠久的藥用歷史。具有祛痰止咳、清熱解毒、除濕通絡(luò)、止血調(diào)經(jīng)、驅(qū)蟲(chóng)等作用，用于治療頭痛目赤，咳嗽痰多，瘧疾，瘰疬，帶下，崩漏，外傷出血，癰腫，毒蛇咬傷等[6]。研究發(fā)現(xiàn)松蘿富含巴爾巴地衣酸、松蘿酸、地弗地衣酸、拉馬酸和地衣多糖等活性物質(zhì)，具有顯著的生物學(xué)功效，有抗菌、抗毒素的作用[1]。松蘿有多種經(jīng)濟(jì)用途,在藥用抗菌、香料、食品、染料、日用化工、飼料、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面都有利用[7]，由于其含有抗菌活性物質(zhì)松蘿酸和抗癌活性物質(zhì)地衣多糖而引起人們的廣泛關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)以小鼠血清丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力作為觀察指標(biāo)，研究破莖松蘿對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠血清自由基含量的影響，為探討其對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品

破莖松蘿（河西三洲醫(yī)藥公司）。

1.2 試劑

SOD測(cè)試試劑（南京建成生物工程研究所）。

MDA測(cè)試試劑（南京建成生物工程研究所）。

1.3 菌株

金黃色葡萄球菌1.5×109/mL（武威市中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室提供）。

1.4 儀器

VIS-7220型分光光度計(jì)（北京第二光學(xué)儀器廠）。

1.5 動(dòng)物

昆明種普通級(jí)小鼠140只，體重18～22 g，雌雄各半，購(gòu)自蘭州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 預(yù)實(shí)驗(yàn)[2-3]

將金黃色葡萄球菌菌液（濃度為1.5×109/mL）用無(wú)菌生理鹽水稀釋為1.5×109/mL（不稀釋?zhuān)?.5×108/mL、1.5×107/mL、1.5×106/mL、1.5×105/mL五個(gè)濃度。經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，計(jì)算得引起小鼠65%死亡菌液濃度為8.25×107/mL。

2.2 分組與造模

選用小鼠140只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組、模型組、破莖松蘿高劑量組、破莖松蘿低劑量組、魚(yú)腥草對(duì)照組，每組28只。空白對(duì)照組、模型組分別灌胃生理鹽水14 d，0.4 mL/只/d；破莖松蘿高劑量組灌胃6.5%煎劑、破莖松蘿低劑量組灌胃3.9%煎劑各14 d，0.4 mL/只/d；魚(yú)腥草對(duì)照組灌胃13%魚(yú)腥草煎劑14 d，0.4 mL/只/d。除空白對(duì)照組外，其余4組均于第6天小鼠腹腔注射用無(wú)菌生理鹽水稀釋為8.25×107/mL的金黃色葡萄球菌菌液0.5 mL/只。

2.3 MDA和SOD的測(cè)定

每組取小鼠8只，測(cè)其MDA含量及SOD活力。第15天小鼠眼眶取血，將各小鼠的血清取0.1 mL加入MDA測(cè)定試劑，按操作要求在分光光度計(jì)532 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算MDA含量；取各小鼠的血清取0.01 mL加入SOD測(cè)定試劑，按操作要求在分光光度計(jì)550 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算SOD活力。

表1 各組血清SOD活力和MDA含量變化（n=8）

3 結(jié)果

各組血清SOD活力及MDA含量的變化：模型組SOD活力降低和MDA含量升高，較空白對(duì)照組顯著（均P＜0.05）;高劑量組SOD活力升高和MDA含量降低，較模型組顯著（均P＜0.01）；低劑量組SOD活力升高和MDA含量降低，較模型組顯著（均P＜0.05）；魚(yú)腥草組SOD活力升高和MDA含量降低，較模型組顯著（均P＜0.05）（具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表下表）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，破莖松蘿對(duì)金黃色葡萄球菌感染小鼠有明顯的保護(hù)作用。

4 討論

①正常體內(nèi)產(chǎn)生一定量的自由基，自由基氧化生物膜的不飽和脂肪酸產(chǎn)生脂質(zhì)過(guò)氧化物，使細(xì)胞的質(zhì)膜（細(xì)胞膜、線粒體膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及溶酶體膜）破壞和功能障礙[4]。在生理狀態(tài)下，自由基可被體內(nèi)的自由基清除系統(tǒng)如SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)和過(guò)氧化氫酶等迅速清除。在感染等病理情況下，可啟動(dòng)自由基連鎖反應(yīng)，自由基產(chǎn)生增多，清除酶的活力能力降低，產(chǎn)生于清除自由基的動(dòng)態(tài)平衡嚴(yán)重破壞。

②本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金黃色葡萄球菌感染小鼠血清中SOD活力的降低和MDA含量的增高較空白對(duì)照組顯著，說(shuō)明金黃色葡萄球菌感染過(guò)程中清除自由基的防御功能減弱，脂質(zhì)過(guò)氧化物損傷加重。破莖松蘿能顯著提高金黃色葡萄球菌感染小鼠血清SOD活力和降低MDA含量，調(diào)節(jié)自由基產(chǎn)生與自由基清除酶之間的平衡?？梢?jiàn)，破莖松蘿能提高自由基清除酶的活力，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物引起的損傷，從而對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用。

③松蘿酸抗菌譜主要為革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌及結(jié)核桿菌。在試管中松蘿酸對(duì)肺炎球菌、溶血性鏈球菌、白喉?xiàng)U菌、結(jié)核桿菌都有很強(qiáng)的抑菌作用，抑菌濃度為1～5 μg/mL，至50 μg/mL可完全抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。對(duì)金黃色葡萄球菌之抑制較上述細(xì)菌稍弱，但強(qiáng)于對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌之作用。但也有報(bào)告對(duì)革蘭氏陰性的百日咳桿菌、枯草桿菌、肺炎桿菌乃至大腸桿菌、變形桿菌有效者，對(duì)痢疾桿菌、傷寒桿菌則無(wú)效。在體外試驗(yàn)中，松蘿酸對(duì)人型結(jié)核桿菌有顯著的抑制作用[5]。

[1] 林源.松蘿的研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)藥業(yè)，2011，20（19）：27-29.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993:259-279.

[3] 徐叔云，卞如濂，陳修，等.藥理實(shí)驗(yàn)方法[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：1340-1350.

[4] 李建生，孔桂蓮.毒素清對(duì)大腸桿菌肺炎老齡小鼠組織自由基和前列腺素代謝變化的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2001,8（3）：146-149.

[5] 李眀.松蘿藥理研究[J].中草藥，2012,5（2）：236-238.

[6] 莫結(jié)麗，陳浩桉，陸惠文，等.HPLC測(cè)定自然口服液中甘草酸的含量[J].中藥材，2001,24（1）：53.

[7] 李榮欽，蘇印泉.松蘿研究利用現(xiàn)狀及前景[J].西藏科技，2007，8（173）：21-26.