王 楠，程君生，丁家波，蔣玉文，毛開榮

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

布氏菌病(簡稱布病)是由布氏菌(Brucella)引起的一種人畜共患傳染病。近年來，我國布病疫情形勢嚴(yán)峻，對人體健康和畜牧業(yè)的發(fā)展造成了嚴(yán)重的危害［1－3］。目前，我國主要采取以預(yù)防為主的防疫措施，所以，布病疫苗產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣直接關(guān)系到全國布病疫情的有效控制。農(nóng)業(yè)部高度重視布病類疫苗產(chǎn)品質(zhì)量，每年安排并組織抽檢計劃，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所負(fù)責(zé)對該類產(chǎn)品實施監(jiān)督檢驗。本文對布氏菌病活疫苗連續(xù)三年的生產(chǎn)現(xiàn)狀和監(jiān)督檢驗結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計分析，以了解目前我國廣泛使用的布氏菌病活疫苗的質(zhì)量狀況。

1 布氏菌病活疫苗生產(chǎn)現(xiàn)狀

目前，國內(nèi)批準(zhǔn)生產(chǎn)的布氏菌病活疫苗品種主要包括S2株、M5株和A19株。截至2012年7月，取得批準(zhǔn)文號的企業(yè)共有14家，其中取得S2株疫苗批準(zhǔn)文號的企業(yè)有13家，目前生產(chǎn)的企業(yè)有4家;取得M5株疫苗批準(zhǔn)文號的企業(yè)有4家，目前生產(chǎn)的企業(yè)有2家;取得A19株疫苗批準(zhǔn)文號的企業(yè)有6家，目前生產(chǎn)的企業(yè)有2家。

近三年，布病活疫苗總產(chǎn)量逐年增加，累計達(dá)到6．7億頭份。其中S2株疫苗的產(chǎn)量占總產(chǎn)量的94%，其產(chǎn)量增長也最快，2011年比2009年產(chǎn)量增加230%。結(jié)果見表1。

表1 2009-2011年布氏菌病活疫苗產(chǎn)量統(tǒng)計

2 布氏菌病活疫苗質(zhì)量狀況

布氏菌病活疫苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國獸藥典》三部，其檢驗項目包括:性狀、純粹檢驗、變異檢驗、活菌計數(shù)、安全檢驗、剩余水分測定和真空度測定?；罹嫈?shù)的結(jié)果是評價疫苗有效性的指標(biāo)之一，所以布氏菌病活疫苗的以會檢形式開展的監(jiān)督檢驗通常選取該項檢驗作為主要的檢驗項。從2010年到2012年，監(jiān)督會檢的S2株疫苗活菌計數(shù)結(jié)果表明該項檢驗的合格率逐年上升，2012年已經(jīng)達(dá)到了100%(表2)。

表2 2010-2012年布氏菌病活疫苗(S2株)活菌計數(shù)結(jié)果

為了能更全面的評價布氏菌病活疫苗質(zhì)量，2012年的監(jiān)督檢驗除了進(jìn)行全項監(jiān)督檢驗以外，還對疫苗菌株的純凈性、遺傳穩(wěn)定性和種屬特異性進(jìn)行了檢定。各項檢驗結(jié)果表明，抽檢的9批S2株疫苗和3批A19株疫苗的各項檢驗結(jié)果都符合規(guī)定，兩種疫苗菌株的純凈性、遺傳穩(wěn)定性和種屬特異性也都符合菌種的特性。但是，抽檢的1批M5株疫苗的活菌計數(shù)結(jié)果不符合規(guī)定，而且該菌株的毒力檢定結(jié)果也顯示，該批次M5株毒力高達(dá)每克脾臟含菌量70萬個，明顯高于對生產(chǎn)用菌株每克脾臟含菌量應(yīng)不超過20萬個的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定［4］(圖1)。

圖1 2012年布氏菌病活疫苗各批次生產(chǎn)用菌株毒力測定結(jié)果

3 布氏菌病活疫苗生產(chǎn)檢驗存在的問題及建議

3．1 生產(chǎn)工藝需進(jìn)一步改進(jìn) 疫苗的關(guān)鍵是質(zhì)量可控，我國獸藥行業(yè)全面實行GMP管理以來，各生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量不斷提高，抽檢合格率逐年提高［5－6］。但是，對于布病活疫苗仍然存在生產(chǎn)工藝落后影響疫苗質(zhì)量的問題。一方面是培養(yǎng)基的成本較高且質(zhì)量不穩(wěn)定。布病疫苗傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝中使用的肝湯培養(yǎng)基在很大程度上取決于動物來源的品質(zhì)和消化處理的方式，而市售的干粉培養(yǎng)基不同企業(yè)和不同批次之間差異較大，成為布病疫苗生產(chǎn)過程中影響質(zhì)量的最主要問題之一。另一方面是凍干保護(hù)劑保護(hù)效果不理想，疫苗的熱穩(wěn)定性存在問題。實踐表明，現(xiàn)有工藝條件下，活菌數(shù)降低和有效期時間的延長呈正相關(guān)性。建議企業(yè)積極研發(fā)提高凍干保護(hù)劑的保護(hù)效果;同時，疫苗裝量應(yīng)給予合理附加量、優(yōu)化儲藏溫度并保證疫苗運(yùn)輸過程中冷鏈存儲，最終確?；钜呙缡褂们暗拿庖咝Ч皇苡绊憽?/p>

3．2 生產(chǎn)企業(yè)檢驗?zāi)芰π柽M(jìn)一步提高 活菌計數(shù)檢驗項是控制疫苗質(zhì)量的關(guān)鍵項。但是，會檢中發(fā)現(xiàn)各企業(yè)檢驗人員流動性大，新上崗檢驗?zāi)芰Σ蛔?，同一批次不同人員計數(shù)結(jié)果符合性差異很大。由于活菌計數(shù)時樣品的稀釋液的選擇、稀釋方法、操作熟練程度、滴板技巧等技術(shù)細(xì)節(jié)對計數(shù)的結(jié)果都會產(chǎn)生較大的影響。因此各企業(yè)有必要對活菌計數(shù)方法進(jìn)一步細(xì)化，并加強(qiáng)對檢驗人員的技術(shù)培訓(xùn)，避免由于檢驗技術(shù)不過關(guān)導(dǎo)致的疫苗質(zhì)量不穩(wěn)定。

3．3 開展布氏菌病活疫苗(M5株)的再評價工作

本次監(jiān)督檢驗結(jié)果顯示布氏菌病活疫苗(M5株)的菌株毒力超過了標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的3倍。有研究結(jié)果顯示:M5株免疫后第16周仍能在小鼠脾臟內(nèi)分離細(xì)菌，而S2株免疫后第6周在小鼠體內(nèi)就已經(jīng)分離不到活菌，M5株的毒力超過其他2個疫苗株［7］。由于2011年M5株疫苗僅生產(chǎn)8批，同時，監(jiān)督檢驗受到抽檢批次的限制，雖然抽檢的1批疫苗不能充分說明疫苗毒株的穩(wěn)定性有問題，但也給監(jiān)管單位下一步的工作提供了一個方向，對M5株的安全性和質(zhì)量可控性進(jìn)行深入研究，掌握更多的關(guān)于M5株毒力的有關(guān)實驗數(shù)據(jù)。開展對布氏菌病活疫苗(M5株)的再評價工作將對布氏菌病活疫苗的安全使用和布病的防控工作提供有利的技術(shù)支持。

［1］ Seleem M N，Boyle S M，Sriranganathan N．Brucellosis:A reemerging zoonosis［J］．Veterinary Microbiology，2010，140(3/4):392－398．

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［3］ 崔步云．中國布魯氏菌病疫情監(jiān)測與控制［J］．中國布魯氏菌病疫情監(jiān)測與控制，2007，22(10):649 －651．

［4］ 中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程［M］．二〇〇〇年版．北京:化學(xué)工業(yè)出版社．154－160．

［5］ 萬建青，王利永，姚文生，等．2008年度獸用生物制品質(zhì)量監(jiān)督抽檢質(zhì)量分析及對策建議［J］．中國畜牧獸醫(yī)，2009，8:204 －207．

［6］ 高艷春，趙德明．我國獸用生物制品行業(yè)現(xiàn)狀分析與發(fā)展建議［J］．中國畜牧雜志，2011，47(2):55 －59．

［7］ 程君生，吳梅花，趙麗霞，等．三種布魯氏菌病疫苗株的毒力比較［J］．中國獸藥雜志，2012，47(9):13 －15．