裴立紅，涂曉波，劉素霞，江麗莉，藍(lán)葉彬

(麗水市中心醫(yī)院，浙江 麗水 323000)

·基礎(chǔ)與臨床研究·

麗水地區(qū)兒童呼吸道病毒感染狀況及特點(diǎn)的分析

裴立紅，涂曉波，劉素霞，江麗莉，藍(lán)葉彬

(麗水市中心醫(yī)院，浙江 麗水 323000)

目的：了解麗水地區(qū)兒童呼吸道病毒感染狀況及特點(diǎn)。方法采用直接免疫熒光法檢測呼吸道誘導(dǎo)痰中脫落纖毛柱狀上皮細(xì)胞中的流感病毒A型及B型(IFV A及IFV B)、副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)。結(jié)果對1838例呼吸道感染患者進(jìn)行的多病原聯(lián)合檢測中，病毒陽性者601例，檢出率32.7%(601/1838)。其中呼吸道合胞病毒528例、腺病毒23例、流感病毒A型28例、流感病毒B型9例、副流感病毒1型2例、副流感病毒2型1例、副流感病毒3型7例，混合感染3例。結(jié)論各病毒感染呈現(xiàn)出以1～3周歲組的兒童為高發(fā)人群的流行特點(diǎn)。了解麗水地區(qū)兒童呼吸道病毒感染狀況及特點(diǎn)，對于減少不必要抗生素的使用，及時(shí)采用適當(dāng)?shù)母綦x措施都有重要意義。

熒光免疫測定；呼吸道病毒； 病毒；呼吸道感染

Abstract：[Objective]To understand the situation and characteristics of children respirovirus infection in Lishui. [Method] Direct immunofluorescence (DIF) was used to detect Influenza Virus A and B (IFV?A and IFV?B ), Parainfluenza Virus 1,2,3 (PIV1,2,3), Respiratory Syncytial Virus (RSV), Adenovirus(ADV) in exfoliated ciliated columnar epithelial cell in induced sputum of Respiratory Tract. [Result]Among 1838 Respiratory Tract Infections cases accepted joint detection of multiple pathogens, there were 601 virus-positive cases and the detection rate was 32.7% (601/1838). There were 528 Respiratory Syncytial Virus (RSV) cases, 23 Adenovirus (ADV) cases, 28 Influenza Virus A cases, 9 Influenza Virus B cases, 2 Parainfluenza Virus 1 cases, 1 Parainfluenza Virus 2case, 7 Parainfluenza Virus 3 cases and 3 mixed infection cases. [Conclusion]Virus infection indicates the popular characteristics of children aged 1-3 for high-risk population. Understanding the situation and characteristic of children respirovirus infection in Lishui, reducing unnecessary use of antibiotics and adopting appropriate isolation measures timely all had important significance.

Keywords：immunofluorescence; respirovirus; virus; respiratory tract infections

呼吸道病毒是指一大類能侵犯呼吸道，引起呼吸道局部病變，或僅以呼吸道為侵入門戶，主要引起呼吸道外組織器官病變的病毒。據(jù)統(tǒng)計(jì)，90%以上急性呼吸道感染由病毒引起[1]。呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A型及B型、副流感病毒1、2、3型和腺病毒是下呼吸道感染的常見原因[2]，為了解本地區(qū)人群呼吸道病毒流行特點(diǎn)，了解病原學(xué)分布概況，以期為臨床提供可靠信息，指導(dǎo)臨床合理用藥，本研究對2010年9月至2012年5月間我院診治的1838例呼吸道感染患者進(jìn)行了多病原聯(lián)合檢測，現(xiàn)結(jié)合其臨床病例，分析總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2010年9月至2012年5月收治的下呼吸道感染的患兒1838例，年齡8個(gè)月～11歲不等，其中男性750例，女性1088例。均來自麗水。

1.2 主要儀器與試劑

AXiOStar PLUS熒光顯微鏡、CH90-2臺式低速離心機(jī)、XW-80A旋渦混合器、37℃恒溫培養(yǎng)箱，chemicon呼吸道病毒診斷試劑盒。

1.3 標(biāo)本收集和處理

由專職護(hù)士取呼吸道誘導(dǎo)痰(高滲鹽水誘導(dǎo)痰取得的方法：10%氯化鈉 20 ml 超聲霧化吸入，指導(dǎo)患者把噴嘴含入口中，將口閉合，使氣霧隨著吸氣緩慢吸入呼吸道，在吸入的同時(shí)應(yīng)做深呼吸，使藥液充分達(dá)到支氣管和肺內(nèi)。待感覺有痰時(shí)，深吸一口氣，患者用力咳嗽以獲得呼吸道或由空洞排出的痰液1～2ml置于無菌的標(biāo)本收集管中送檢。樣本置于10～15ml離心管中，加入PBS (磷酸鹽緩沖液)4～8ml，用旋渦混合器震蕩3～5分鐘后，300～500r/min離心10分鐘，倒掉上清液，往離心管中的沉淀物再加入PBS 4～8ml震蕩3～5分鐘，300～500r/min離心10分鐘，再次棄去上清液，沉淀物中加入適量PBS(磷酸鹽緩沖液)。調(diào)整細(xì)胞濃度含纖毛柱狀上皮細(xì)胞1.0×106/ml。

1.4 細(xì)胞片制備

微量吸管吸取上述纖毛柱狀上皮細(xì)胞懸液25μl，點(diǎn)于預(yù)先準(zhǔn)備好7孔玻片。每個(gè)痰標(biāo)本點(diǎn)于該玻片的7個(gè)孔。置37℃恒溫培養(yǎng)箱干燥后用4℃冷丙酮固定10分鐘。

1.5 免疫熒光試劑染色

加25μl內(nèi)含伊文斯藍(lán)的熒光素標(biāo)記的呼吸道病毒單克隆抗體即抗腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒A型及B型、副流感病毒1、2、3型單克隆抗體分別滴加于標(biāo)本上，在37℃濕盒內(nèi)孵育30分鐘后，用PBS (磷酸鹽緩沖液)洗片3次，然后用蒸溜水洗片，風(fēng)干后封片。熒光顯微鏡下觀察。

1.6 陽性結(jié)果判斷及對照設(shè)定

如果一孔涂片中含有細(xì)胞數(shù)大于200個(gè)，且2%以上的細(xì)胞顯示有細(xì)胞內(nèi)染色為陽性，即為某病毒感染。在確定陽性染色時(shí)呼吸道合胞病毒及副流感病毒顯示為細(xì)胞漿內(nèi)染色，流感病毒及腺病毒為核染色或漿內(nèi)染色。由試劑盒提供陽性對照片作對照。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道各種病毒的感染情況

在檢測1838例中，病毒陽性者601例，檢出率32.7%(601/1838)。其中呼吸道合胞病毒(RSV)528例、腺病毒(ADV)23例、流感病毒A型(IFV A)28例、流感病毒B型(IFV B)9例、副流感病毒1型(PIV1)2例、副流感病毒2型(PIV2)1例、副流感病毒3型(PIV3)7例，混合感染3例。 感染率依次為：RSV>IFV A>ADV>IFV B>PIV3>PIV1>PIV2。

2.2 各單項(xiàng)病毒在不同年齡組的感染情況

各病毒感染呈現(xiàn)出以1～3周歲組的兒童為高發(fā)人群的流行特點(diǎn)。見表1。

表1 各單項(xiàng)呼吸道病毒在不同年齡組中感染率(例數(shù)(%))

3 討論

呼吸道系統(tǒng)感染性疾病是臨床最常見的病種，多通過空氣或唾液飛沫方式傳播，傳播速度快，非常容易造成局部流行，甚至可導(dǎo)致爆發(fā)性流行[3]。一般可根據(jù)患兒的年齡和臨床表現(xiàn)作出病毒感染診斷，但特異性病原學(xué)診斷對患兒隔離、危重患兒的監(jiān)護(hù)及合理用藥十分重要[4]。因而運(yùn)用一種快速、簡便、特異性及敏感性高的診斷病毒感染的實(shí)驗(yàn)方法就顯得非常重要。

診斷病毒感染的方法較多，但都存在不足之處。目前國內(nèi)診斷呼吸道病毒感染基本采用電鏡檢測、培養(yǎng)鑒定法、聚合酶鏈反應(yīng)( PCR) 、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( ELISA) 或FIA 特異性抗體檢測法、凝集法等，有文獻(xiàn)指出各種方法中抗原較抗體檢測更敏感[5]，以往一般以間接免疫熒光法為主[6]，而直接免疫熒光法具有敏感性強(qiáng)、特異性高的特點(diǎn)[2]。因而我們采用直接免疫熒光法檢測呼吸道誘導(dǎo)痰中脫落纖毛柱狀上皮細(xì)胞中的呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒(IFV，A、B型)、副流感病毒(PIV，1、2、3型)、腺病毒(ADV)抗原，達(dá)到診斷目的[1]，Chemicon方法經(jīng)過WHO的3個(gè)參考中心審評，結(jié)果良好且本方法的特異性達(dá)80%、敏感性達(dá)95%[7]。結(jié)果表明：7種病毒共檢出601例陽性，陽性檢出率達(dá)32.7%，麗水地區(qū)兒童呼吸道病毒感染主要以感染呼吸道合胞病毒為主(87.9%)，其他幾種呼吸道病毒感染率都較低。而且各病毒感染呈現(xiàn)以1～3周歲組的兒童為高發(fā)人群的流行特點(diǎn)。說明嬰幼兒期應(yīng)是病毒感染的重點(diǎn)防御時(shí)期。

總之，應(yīng)用直接免疫熒光法較其它方法具有需時(shí)更短、操作簡便、設(shè)備簡單的優(yōu)點(diǎn)，可對呼吸道病毒進(jìn)行快速檢驗(yàn)，為盡早診斷疾病、減少疾病傳播、防止濫用抗生素以及確定正確的治療方案提供更可靠的依據(jù)。了解麗水地區(qū)兒童呼吸道病毒感染狀況及特點(diǎn)，減少不必要抗生素的使用，及時(shí)采用適當(dāng)?shù)母綦x措施都有重要意義。

[1]陶國華，郭新榮，吳俊淵.541例呼吸道病毒和病毒抗體檢測分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2000，7(1):19-20.

[2]申昆玲，買穎，劉亞誼，等.用免疫熒光方法檢測鼻咽分泌物中多種呼吸道病毒抗原[J].中華兒科雜志，1999，37(7):401-403.

[3]孫蒂，林宏，王厚芳，等.呼吸道系統(tǒng)感染性疾病快速實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)師，2003，2(1):3-6.

[4]周長江.呼吸道合胞病毒感染流行病學(xué)研究[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2002，17(4):425-426.

[5]顧忠偉，曹群，湯宏峰，等.直接免疫熒光法對呼吸道分泌物多種呼吸道病毒檢測的臨床意義[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2004，19(10):857-858.

[6]徐放生，吳婉芳，王秀芳，等.新生兒肺炎病原學(xué)及臨床研究[J].中華兒科雜志，1998，36(10):601-603.

[ 7]McDonald JC，Quennec P. Utility of a respiratory virus panel containing a monoclonal antibody pool for screening or respiratory specimens in non peak respiratory syncytial virus season J Clin Microbiol，1993，31:2809-2811.

AnalysisofthesituationandcharacteristicsofchildrenrespirovirusinfectioninLishui

PEILihong，TUXiaobo,LIUSuxia,JIANGLili,LANYebin

(Lishui Central Hospital,Zhejiang 323000,China )

裴立紅(1982-)，女，浙江天臺人，本科，檢驗(yàn)師。研究方向：免疫檢驗(yàn)

R446.5

B

1672-0024(2013)04-0051-03