尹巧香，王 恒，裴志勇，趙玉生

中國人民解放軍空軍總醫(yī)院 1干部病房心內(nèi)科 2神經(jīng)內(nèi)科，北京 100142 3北京軍區(qū)總醫(yī)院干部病房一科，北京 100700 4中國人民解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所，北京 100853

·論著·

環(huán)孢菌素A-納米乳聯(lián)合干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死的療效

尹巧香1，王 恒2，裴志勇3，趙玉生4

中國人民解放軍空軍總醫(yī)院1干部病房心內(nèi)科2神經(jīng)內(nèi)科，北京 1001423北京軍區(qū)總醫(yī)院干部病房一科，北京 1007004中國人民解放軍總醫(yī)院老年心血管病研究所，北京 100853

目的制備并評估負(fù)載環(huán)孢菌素A-納米乳藥物(CsA-NP)聯(lián)合脂肪組織來源干細(xì)胞(ASCs)移植治療小型豬急性心肌梗死(AMI)的療效并研究其可能的機(jī)制。方法CsA-NP采用高壓均質(zhì)法制備而成。經(jīng)皮球囊封堵冠狀動脈左前降支制備小型豬AMI模型(n=17)，隨機(jī)分為對照組(n=5)、CsA-NP組(n=4)、ASCs組(n=4)和CsA-NP+ASCs組(n=4)4組。AMI后1周經(jīng)冠狀動脈內(nèi)注入ASCs或生理鹽水，分別在干細(xì)胞移植前和干細(xì)胞移植后8周，以延遲增強(qiáng)核磁共振(DE-MRI)評估心臟結(jié)構(gòu)和功能。病理和免疫組織化學(xué)評估移植后心肌和移植細(xì)胞情況。結(jié)果干細(xì)胞移植后8周，DE-MRI顯示與ASCs組比較，CsA-NP+ASCs組的左心室射血分?jǐn)?shù)顯著提高[(53.6±2.4)%比(48.3±1.8)%，P<0.05]，梗死面積顯著縮小[(6.2±1.7)cm3比(7.5±0.6)cm3，P<0.05]，室壁厚度顯著增加(P<0.05)。病理和免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，CsA-NP+ASCs組比ASCs組移植存活細(xì)胞增加了近3倍，并表達(dá)心肌細(xì)胞陽性標(biāo)記物(cTnT、α-actin陽性)；與ASCs組比較，CsA-NP+ASCs組進(jìn)一步減輕梗死心肌纖維化程度，下調(diào)了Caspase- 3活性，抑制了心肌細(xì)胞凋亡。結(jié)論CsA-NP增強(qiáng)了ASCs移植治療小型豬AMI療效，提高了心功能，減輕了左心室重構(gòu)，可能與CsA-NP抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖分化有關(guān)。

環(huán)孢菌素A；納米；干細(xì)胞；脂肪；凋亡；急性心肌梗死

ActaAcadMedSin，2013,35(4)：404-410

盡管藥物治療和再灌注治療使心肌梗死患者的存活率大為提高，但由于不可避免的心肌細(xì)胞壞死和凋亡導(dǎo)致心臟重構(gòu)，最終進(jìn)展為心力衰竭。近年來，移植干細(xì)胞治療心肌梗死(myocardial infarction，MI)取得了較大進(jìn)展，不管是在動物模型還是人類臨床試驗，都看到了干細(xì)胞移植治療MI對心臟結(jié)構(gòu)和功能的改善。特別是脂肪組織來源干細(xì)胞(adipose tissue-derived stem cells，ASCs)，由于具有多向分化潛能、組織來源廣、取材創(chuàng)傷小和產(chǎn)量高等優(yōu)點，成為最具吸引力的間充質(zhì)干細(xì)胞，有望取代骨髓來源的干細(xì)胞治療心臟病。已有大量研究證實了ASCs在治療MI方面的卓越成就[1-2]。然而，MI后的惡劣微環(huán)境可導(dǎo)致細(xì)胞大量凋亡甚至死亡，特別是遠(yuǎn)期[3]，因此，如何提高干細(xì)胞移植成活率就成為干細(xì)胞治療領(lǐng)域最大的挑戰(zhàn)。

環(huán)孢菌素A(cyclosporine A，CsA)是臨床廣泛應(yīng)用的高效免疫抑制劑。近年研究發(fā)現(xiàn)，CsA能抑制細(xì)胞凋亡，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最經(jīng)典的線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pore，mPTP)抑制劑，可對心肌缺血-再灌注損傷起保護(hù)作用[4-6]。有臨床研究報道，CsA能對心臟再血管化治療發(fā)揮保護(hù)作用[6]，然而因長期應(yīng)用CsA可能帶來肝、腎功能損害故而不大可能現(xiàn)階段在臨床大規(guī)模應(yīng)用。

納米給藥系統(tǒng)的臨床應(yīng)用近年已得到人們的廣泛認(rèn)同，其重要意義已在腫瘤化療藥物的靶向藥物遞送系統(tǒng)中得到肯定和推廣。借鑒腫瘤化療藥物的靶向遞藥成功經(jīng)驗，本課題組制備并評估了負(fù)載CsA的納米乳(cyclosporine A-nanoparticles emulsion，CsA-NP)，其攜帶納米微粒能修飾藥物在體內(nèi)的重新分布，因而有望達(dá)到靶向、高效、低毒的療效。本研究評估了CsA-NP是否可增強(qiáng)ASCs移植治療小型豬急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的療效。為了準(zhǔn)確評估MI面積及左心室功能，本研究采用延遲增強(qiáng)核磁共振(delayed-enhanced magnetic resonance imaging，DE-MRI)技術(shù)以及后期病理免疫組織化學(xué)技術(shù)作為評估手段。

材料和方法

CsA-NP輸液劑的制備和鑒定委托中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物與毒物研究所，以蛋黃磷脂(lipoid E 80)、泊洛沙姆188為水相，中鏈油(lipoid MCT)為油相，采用高壓均質(zhì)法制備而成。高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)評估產(chǎn)品的載藥率，乳徑的粒徑經(jīng)激光粒度分析儀測定，并通過異常毒性檢查法及溶血性實驗對制備的藥物安全性進(jìn)行初步評價。

實驗動物廣西巴馬小型豬，雌雄不限，月齡4～6個月，體重20～30 kg，購自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)-中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱分院，由中國人民解放軍總醫(yī)院動物中心飼養(yǎng)。所有動物研究全部符合國家《實驗動物管理條例》和《北京市實驗動物管理條例細(xì)則》。

小型豬ASCs的提取、培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記具體過程參見文獻(xiàn)[7]。

小型豬AMI模型的制備和移植ASCs具體過程參見文獻(xiàn)[8]。先后有31頭小型豬用來制備MI模型，成功造模、存活并完成整個實驗過程的有17頭(54.8%)，死亡動物大部分都是在造模過程中或造模后24 h內(nèi)因心室顫動死亡。存活小型豬隨機(jī)分為4組：(1)對照組(n=5)：移植同等體積生理鹽水；(2)ASCs組(n=4)：移植ASCs；(3)CsA-NP組(n=4)：應(yīng)用藥物，移植同等體積生理鹽水；(4)CsA-NP+ASCs組(n=4)：CsA-NP聯(lián)合移植ASCs。CsA-NP組和CsA-NP+ASCs組選擇在AMI造模缺血-再灌注時，在干細(xì)胞(或生理鹽水)移植前一次性靜脈注入CsA-NP 2 mg/kg。注射劑量的選擇根據(jù)前期體外實驗(CsA-NP對ASCs增殖和凋亡的影響[7])，同時參考文獻(xiàn)[9]。劑量低于目前動物實驗、臨床患者最低CsA用量標(biāo)準(zhǔn)。干細(xì)胞移植：小型豬AMI模型建立成功后1周移植干細(xì)胞。放置1.5 mm×1.5 mm球囊(球囊遠(yuǎn)端人為造成破損)到前降支中下1/3處，注射器吸取干細(xì)胞懸液加壓緩慢注射[移植細(xì)胞量(3～4)×107個細(xì)胞]，對照組和CsA-NP組按上述方法注入等體積的生理鹽水。

DE-MRI檢查及圖像分析分別于小型豬干細(xì)胞移植前、干細(xì)胞移植后8周行DE-MRI檢查。心臟延遲增強(qiáng)：注入10 ml釓貝葡胺注射液，10 min后開始掃描心臟短軸位，具體過程參見文獻(xiàn)[8]。

病理及免疫組織化學(xué)評估移植細(xì)胞存活、分化情況干細(xì)胞移植后8周行DE-MRI檢查后，采用穿刺股動脈放血處死動物。取出心臟后記錄全心、心室及左心室的質(zhì)量。垂直左心室長軸將左心室切成薄片，厚度5～6 mm。分別留取梗死區(qū)、邊緣區(qū)及正常部位1 cm2大小心肌組織塊標(biāo)本-70℃保存和4%多聚甲醛溶液固定后保存。

移植細(xì)胞存活、分化情況取ASCs組和CsA-NP+ASCs組梗死邊緣區(qū)冰凍的心肌組織制成5 μm厚切片，熒光顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)藍(lán)色熒光后連續(xù)切片。肌鈣蛋白T抗體cTn-T、α-肌節(jié)肌動蛋白抗體α-action(抗體均來自美國Abcam公司)進(jìn)行免疫熒光染色，陰性對照用PBS代替一抗，激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察移植細(xì)胞存活及分化情況。

MI區(qū)域膠原沉積纖維化檢測每頭小型豬各取4張梗死中心區(qū)、梗死邊緣區(qū)切片行Masson染色，利用Image Pro Plus 6.0軟件測量梗死中心區(qū)、梗死邊緣區(qū)纖維化面積，取平均值。

免疫組織化學(xué)法檢測胞漿Caspase-3表達(dá)參照兔抗Caspase- 3多克隆抗體試劑盒說明書(Santa Cruz公司，美國)進(jìn)行，應(yīng)用Image pro plus 4.5圖像分析軟件進(jìn)行圖像分析，每張切片選取5個具有代表性的高倍視野，計算陽性染色的積分光密度平均值(integrated optical density，IOD)。免疫組織化學(xué)染色檢測梗死區(qū)及梗死邊緣區(qū)微血管計數(shù)：將制備好的免疫組化染色切片置于顯微鏡下觀察。微血管測量的要求：vWF染色陽性，管腔可視并且對直徑在10～100μm以內(nèi)的微血管進(jìn)行計數(shù)。利用Image Pro Plus 4.5圖像分析軟件測量管腔。每頭小型豬取6張切片，每張切片在MI區(qū)域及MI邊緣區(qū)至少取6個高倍視野(×400)。

統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件，MI面積、心輸出量、左心室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)、左心室舒張末容積(left ventricular end-diastolic volume，LVEDV)等計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

CsA-NP輸液劑的鑒定HPLC及乳徑的粒徑經(jīng)激光粒度分析儀測定表明，本研究制備的CsA-NP工藝穩(wěn)定性好，粒徑均勻，50%的乳滴微粒直徑在162 nm以內(nèi)。通過異常毒性檢查法及溶血性實驗對藥物的安全性進(jìn)行初步評價，結(jié)果表明制備的CsA-NP無明顯異常毒性，體外無明顯溶血作用。

DE-MRI評估干細(xì)胞移植后心臟結(jié)構(gòu)和功能分別于ASCs移植前(基點)和ASCs移植后8周(終點)行心臟DE-MRI檢查，結(jié)果顯示，ASCs移植后8周所有組的LVEF均有提高，CsA-NP+ASCs組LVEF提高顯著[(53.6±2.4)%]，與對照組[(46.2±3.9)%]相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，與CsA-NP組[(48.6±1.5)%]和ASCs組[(48.3±1.8)%]相比差異也均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)；CsA-NP+ASCs組的LVEDV和左心室收縮末容積(left ventricular end-systolic volume，LVESV)與其他組相比顯著下降(P均<0.05)。CsA-NP+ASCs組MI面積[(6.2±1.7)cm3]與對照組[(9.8±2.4)cm3，P<0.01]、CsA-NP組[(9.1±3.4)cm3，P<0.05]、和ASCs組[(7.5±0.6)cm3，P<0.05]相比也顯著下降(表1)。

DE-MRI圖像及病理評估干細(xì)胞移植后心臟結(jié)構(gòu)和功能干細(xì)胞移植后8周，心臟梗死面積縮小，心功能提高。MI瘢痕主要累及左心室心尖部、前壁及右心室前壁，左心室切片可見不同層次的MI范圍，與DE-MRI短軸MI部位相一致，梗死區(qū)域與正常心肌組織界限分明。梗死區(qū)、梗死邊緣、遠(yuǎn)離梗死區(qū)，梗死區(qū)與非梗死區(qū)交界分明(圖1)。

表 1 延遲增強(qiáng)核磁共振評估左心室結(jié)構(gòu)和功能Table 1 Left ventricular function and geometry by delayed enhanced magnetic resonance imagine

LVEDV：左心室舒張末容積；LVESV：左心室收縮末容積；LVEF：左心室射血分?jǐn)?shù)；LVMI：左心室質(zhì)量指數(shù)；與對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與CsA-NP組比較，cP<0.05，dP<0.01；與ASCs組比較，eP<0.05；基點與終點比較，fP<0.01

LVEDV：left ventricular end-diastolic volume；LVESV：left ventricular end-systolic volume；LVEF：left ventricular ejection fraction；LVMI：left ventricular mass index；aP<0.05，bP<0.01 compared with control group；cP<0.05，dP<0.01 compared with CsA-NP group；eP<0.05 compared with ASCs group；baselinevs.endpoint，fP<0.01

A.干細(xì)胞移植前，短軸位收縮期(a)，舒張期(b)，箭頭所指短軸位增強(qiáng)信號為心肌梗死部位，長軸位舒張期(c)，長軸位收縮期(d)，T2黑血像(e)；B.干細(xì)胞移植后8周，短軸位收縮期(a)，舒張期(b)，箭頭所指短軸位增強(qiáng)信號為心肌梗死部位，長軸位舒張期(c)，長軸位收縮期(d)，T2黑血像(e)；C.與該小型豬相對應(yīng)心臟大體標(biāo)本(a)、左心室切片(b)及單片左心室切片(c)，箭頭所指灰白色區(qū)域為心肌梗死部位

A.before cell transplantation，delayed-enhanced MRI with high signal intensity in the sectional short-axis in the systolic(a)and diastolic(b)view demonstrate infarct myocardial viability(arrows)，long-axis in the diastolic(c)and systolic(d)and the black-blood T2-weighted(e)；B.8 weeks after cell transplantation，delayed-enhanced MRI with high signal intensity in the sectional short-axis in the systolic(a)and diastolic(b)view demonstrate infarct myocardial viability(arrows)，long-axis in the diastolic(c)and systolic(d)and the black-blood T2-weighted(e)；C.corresponding photographs of histomorphometry demonstrate the porcine heart(a)，cross-sectional slices(b)and one representative slice(c)，the arrows indicate pale areas are the infarction myocardial areas

圖1 CsA-NP+ASCs組體內(nèi)延遲增強(qiáng)核磁共振和體外免疫組織化學(xué)結(jié)果

Fig1 Representativeinvivodelayed-enhanced magnetic resonance imagine andexvivohistological samples from CsA-NP+ASCs-treated hearts

免疫組織化學(xué)評估干細(xì)胞移植后心臟結(jié)構(gòu)和功能

移植細(xì)胞體內(nèi)存活及分化情況：干細(xì)胞移植后8周處死動物取材制成心肌組織冰凍切片，ASCs組、ASCs+CsA-NP組梗死邊緣區(qū)均可見發(fā)藍(lán)色熒光的細(xì)胞核(DAPI陽性細(xì)胞)(圖2)。統(tǒng)計分析顯示，ASCs+CsA-NP組DAPI陽性細(xì)胞是ASCs組的近3倍[(38±7.8)cells/cm2比(15±8.6)cells/cm2，P<0.01]。免疫熒光染色后激光共聚焦顯微鏡下觀察，部分DAPI陽性細(xì)胞呈現(xiàn)陽性表達(dá)(cTn-T、α-actin)(圖2)。

Masson三色染色法評估MI區(qū)域纖維化程度：對照組纖維化程度(綠染)最重，CsA-NP組、ASCs組和CsA-NP+ASCs組纖維化程度明顯減輕。ASCs纖維化程度較對照組明顯減輕(50.2±16.8比58.2±18.8，P<0.05)；CsA-NP+ASCs的MI纖維化程度也較其他各組明顯減輕(P均<0.01)(圖3)。

免疫組織化學(xué)法檢測胞漿Caspase- 3活性：光學(xué)顯微鏡下觀察表達(dá)陽性核呈現(xiàn)深藍(lán)色，細(xì)胞漿或細(xì)胞膜呈棕黃色染色。計算陽性染色的積分光密度平均值(integrated optical density，IOD)，結(jié)果顯示，對照組、CsA-NP組、ASCs組和CsA-NP+ASCs組Caspase- 3的IOD值分別為7963.2±412.8、5746.3±406.5、6582.3±998.3和2947.8±518.6，CsA-NP組(P<0.05)和CsA-NP+ASCs組(P<0.01)均明顯低于對照組(圖4)。

圖2 免疫組織化學(xué)分析ASCs和CsA-NP+ASCs組cTn-T和α-actin陽性表達(dá)(×600)

Fig2 Immunofluorescence analysis of the positive expressions of cTn-T and α-actin in the ASCs group and CsA-NP+ASCs group(×600)

與對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與CsA-NP組比較，cP<0.01；與ASCs組比較，dP<0.01

aP<0.05，bP<0.01 compared with control group；cP<0.01 compared with CsA-NP group；dP<0.01 compared with ASCs group

圖3 Masson三色染色法評估移植后8周各組心肌梗死區(qū)纖維化程度

Fig3 Masson’s Trichrome compared the percentage of fibrotic infarcted zone among the all groups

IOD：積分光密度平均值；與對照組比較，aP<0.05，bP<0.01；與CsA-NP組比較，cP<0.01；與ASCs組比較，dP<0.01

IOD：integrated optical density；aP<0.05，bP<0.01 compared with control group；cP<0.01 compared with CsA-NP group；dP<0.01 compared with ASCs group

圖4 免疫組織化學(xué)法檢測各組胞漿Caspase- 3活性

Fig4 Expression of activity of Caspase- 3 in tissue sections at 8 weeks

討 論

本項研究首次制備并評估了CsA-NP用于ASCs移植治療小型豬AMI的療效和可能的機(jī)制，結(jié)果表明，ASCs移植聯(lián)合CsA-NP可進(jìn)一步修復(fù)損傷心肌，提高心功能，減輕左心室重構(gòu)。系列免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，移植的ASCs能在梗死心肌存活并分化為心肌細(xì)胞表面標(biāo)記物(cTnT和α-actin陽性表達(dá))，表明移植的ASCs具有心臟再生潛能，而CsA-NP進(jìn)一步提高了ASCs移植效率，存活細(xì)胞增加了近3倍；ASCs移植聯(lián)合CsA-NP進(jìn)一步減輕梗死心肌纖維化程度；下調(diào)了Caspase- 3活性，抑制了心肌細(xì)胞凋亡。這些增生分化的細(xì)胞和血管可能參與了心肌修復(fù)，提高了心功能。DE-MRI為證實這種假設(shè)提供了依據(jù)：ASCs移植聯(lián)合CsA-NP進(jìn)一步提高了左室射血分?jǐn)?shù)，減少了MI面積，減輕了心肌左心室質(zhì)量，增加了室壁厚度，從而提升了心臟功能，減輕了左心室重構(gòu)。

CsA是臨床上應(yīng)用普遍的免疫抑制劑，低劑量時又是mPTP開放抑制劑，因而也能抑制細(xì)胞凋亡。心臟組織缺血一段時間后再灌注，將不可避免地引起mPTP開放，導(dǎo)致線粒體跨膜電位下降，膜電位去極化，基質(zhì)腫脹，釋放前凋亡蛋白從線粒體進(jìn)入胞液，然后通過啟動凋亡蛋白酶(Caspases)依賴性或非依賴性的級聯(lián)反應(yīng)機(jī)制，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或者壞死。CsA通過與線粒體基質(zhì)的環(huán)孢菌素受體(cyclophilin D，CyP-D)特異性結(jié)合，阻止mPTP開放，從而抑制細(xì)胞凋亡，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最經(jīng)典的mPTP開放抑制劑。Piot等[6]研究證實，CsA組MI面積較對照組下降40%，與本研究結(jié)果一致，Mewton等[9]發(fā)現(xiàn)使用CsA的動物MI范圍顯著縮小。Yan等[10]給大鼠的胚胎干細(xì)胞添加低劑量CsA獲得了10～20倍心臟祖細(xì)胞的倍增效果，恢復(fù)了左心室功能，隨后，該研究團(tuán)隊又用人類多潛能干細(xì)胞誘導(dǎo)、擴(kuò)增為心肌細(xì)胞，添加低劑量CsA后細(xì)胞數(shù)量增加了4.3倍[11]。

上述研究結(jié)果固然令人鼓舞，然而長期應(yīng)用CsA可能帶來的腎、肝功能損害卻限制了該藥現(xiàn)階段在臨床的大規(guī)模應(yīng)用。近年來，納米給藥系統(tǒng)在臨床得到了廣泛應(yīng)用，其能改善難溶性藥物的吸收，實現(xiàn)靶向和定位給藥等，其重要意義已在腫瘤化療藥物的靶向藥物遞送系統(tǒng)中得到肯定。借鑒腫瘤化療藥物納米制劑的靶向遞藥成功經(jīng)驗，本研究制備了CsA-NP。與本研究CsA-NP制備工藝相類似且已廣泛上市并在臨床成功運(yùn)用多年的藥物是前列地爾脂微球(Lipo PGE1，商品名：凱時)[12]。筆者有理由相信，CsA-NP也能與Lipo PGE1一樣達(dá)到靶向和緩釋效應(yīng)，減少藥物用量，提高藥物療效，減輕藥物不良反應(yīng)。當(dāng)然，CsA-NP藥物的有效性、安全性還需要一系列研究證實。

目前，干細(xì)胞移植成活率低下，特別是遠(yuǎn)期，其主要原因是細(xì)胞大量凋亡甚至死亡[4]。本研究充分利用CsA是最經(jīng)典的mPTP開放抑制劑從而抑制凋亡的特性，將CsA改造成CsA-NP，以達(dá)到靶向、高效、低毒的療效，更好地發(fā)揮其抗凋亡作用，減輕不良反應(yīng)。希望CsA-NP的應(yīng)用能為心臟再生提供一種簡單可行并有效的嘗試。

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EffecacyofCyclosporineA-nanoparticlesEmulsionCombinedwithStemCellTransplantationTherapyforAcuteMyocardialInfarction

YIN Qiao-xiang1，WANG Heng2，PEI Zhi-yong3，ZHAO Yu-sheng4

1Department of Geriatric Cardiology，2Department of Neurology，Chinese General Hospital of Air Force，Beijing 100142，China3Department of Geriatric Cardiology，Chinese General Hospital of Beijing Military Region，Beijing 100700，China4Institute of Geriatric Cardiology，Chinese PLA General Hospital，Beijing 100853，China

YIN Qiao-xiang Tel：010- 68410099- 68161，E-mail：zmyyqx- 20041129@163.com

ObjectiveTo evaluate the efficacy of cyclosporine A-nanoparticles emulsion(CsA-NP)combined with adipose tissue-derived stem cells(ASCs)transplantation therapy for acute myocardial infarction(AMI)in a miniswine model.MethodsCsA-NP emulsion was prepared by the high-pressure homogenization method.Models were performed by coronary angioplasty for percutaneous balloon occlusion of left anterior descending artery(LAD).A total of 17 miniswines survived after AMI were divided into four groups：control group(n=5)，CsA-NP group(n=4)，ASCs group(n=4)，and CsA-NP+ASCs group(n=4).ASCs or saline were delivered by intracoronary injection one week after AMI.Before cell transplantation and 8 weeks after cell transplantation，delayed-enhanced magnetic resonance imaging(DE-MRI)was performed to evaluate cardiac function and viability.The infarcted myocardium and implanted cells were histologically studied.ResultsEight weeks after treatment，the left ventricular ejection fraction(LVEF)significantly increased in the CsA-NP+ASCs group when compared with the ASCs group[(53.6±2.4)%vs.(48.3±1.8)%，P<0.05]；meanwhile，the infarct size significantly decreased[(6.2±1.7)cm3vs.(7.5±0.6)cm3，P<0.05]and the thickness of the ventricular wall significantly increased(P<0.05).Histology showed that the number of surviving cells increased nearly by three times in the CsA-NP+ASCs group，and the expressions of the cardiomyocyte specific markers(cTnT and α-actin)were detected.Histological samples also showed that CsA-NP+ASCs group reduced fibrotic tissue，and down-regulated the activation of Caspase- 3.ConclusionThe CsA-NP+ASCs combination therapy can enhance the viability of ASCs by improving LVEF and preventing LV expansion，which may be explained that CsA-NP has the anti-apoptotic effect and can promote the survivals and proliferation of ASCs.

cyclosporine A；nanoparticles；stem cell；adipose；apoptosis；acute myocardial infarction

尹巧香 電話：010- 68410099- 68161，電子郵件：zmyyqx- 20041129@163.com

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A

1000- 503X(2013)04- 0404- 07

2012- 11- 27)

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃項目(863項目)(2006AA02A105)Supported by the National High Technology Research and Development Program of China(863 Program)(2006AA02A105)

10.3881/j.issn.1000- 503X.2013.04.009