王風(fēng)婷

C-met和COX-2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與臨床意義

王風(fēng)婷

（井岡山大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，江西，吉安 343000）

探討非小細(xì)胞肺癌中C-met和COX-2表達(dá)及其臨床意義。收集2010年1月至2012年6月存檔的NSCLC石蠟標(biāo)本60例肺癌組織和20例相對(duì)應(yīng)癌旁正常肺組織。采用免疫組化方法分別檢測(cè)肺癌組織及癌旁正常肺組織中C-met和COX-2的表達(dá)情況。C-met和COX-2在NSCLC中的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織；C-met和COX-2在NSCLC中的過(guò)表達(dá)和病理類型、有無(wú)淋巴結(jié)結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期有密切相關(guān)性；C-met還與病理分級(jí)相關(guān)；C-met和COX-2兩者在NSCLC中的表達(dá)呈正相關(guān)性。C-met和COX-2可能在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起了重要的作用，C-met和COX-2可能成為肺癌早期診斷、預(yù)后評(píng)估的生物標(biāo)志物。兩者的顯著相關(guān)性提示C-met和COX-2兩者在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展中存在相互作用，為探討非小細(xì)胞肺癌發(fā)病機(jī)制以及探尋非小細(xì)胞肺癌治療新途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

C-met； COX-2；非小細(xì)胞肺癌；免疫組織化學(xué)

根據(jù)世界衛(wèi)生組織2006年公布的資料顯示，每年因肺癌死亡的人數(shù)超過(guò)120萬(wàn)，肺癌已經(jīng)成為威脅人類健康的主要癌癥殺手，而非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)占全部肺癌的80%~85%[1]。目前，圍繞肺癌相關(guān)基因所展開的研究以及以抑制腫瘤血管生成的治療策略已成為肺癌領(lǐng)域備受關(guān)注的熱點(diǎn)，為肺癌的篩查和早期診斷以及治療提供了新方向。C-met是一種由C-met原癌基因編碼的蛋白產(chǎn)物，為肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor,HGF）上皮特異性受體，可調(diào)控一種“侵襲性生長(zhǎng)”的侵襲遺傳程序[2]。HGF通過(guò)激活C-met完成多種功能，例如促進(jìn)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、以及調(diào)節(jié)血管形成和形態(tài)發(fā)生等[3-4]。環(huán)氧化酶（circle- oxidationase ，COX）是前列腺素（PGs）合成過(guò)程中的重要限速酶，目前已發(fā)現(xiàn)兩種同工酶：COX-1和COX-2。COX-2為誘導(dǎo)酶，在正常組織中很少表達(dá)，當(dāng)細(xì)胞受到各種刺激因素如細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、促癌劑等刺激后開始表達(dá)，參與炎癥或腫瘤等病理過(guò)程。C-met和COX-2兩者在肺癌中的相互作用，迄今尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究意探討非小細(xì)胞肺癌中C-met和COX-2表達(dá)及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究60例肺癌組織和20例相對(duì)應(yīng)癌旁正常肺組織均取自井岡山大學(xué)附屬醫(yī)院及南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2010年1月至2012年6月存檔的NSCLC石蠟標(biāo)本。所有標(biāo)本均來(lái)自胸外科住院的NSCLC病例，臨床資料完整，且術(shù)前均未接受過(guò)化療、放療或生物學(xué)治療；經(jīng)胸外科手術(shù)切除，均有對(duì)應(yīng)的HE染色切片明確病理診斷。對(duì)照組為20例癌旁正常肺組織。

所用兔抗人C-met多克隆抗體和兔抗人COX-2單克隆抗體（編號(hào)ZA-0412）均為Santa Cruz公司產(chǎn)品；DAB顯色液購(gòu)自北京中衫金橋生物技術(shù)公司。

1.2 方法

1.2.1 取材

將選好石蠟標(biāo)本均4 μm厚度連續(xù)切片，將載玻片置于烤箱中烘烤，60 ℃，30 min。

1.2.2 C-met 和COX-2檢測(cè)

本實(shí)驗(yàn)采用Elivision免疫組化法，按下列操作步驟進(jìn)行：脫蠟、水化：阻斷滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：3%H2O2；高壓煮沸抗原修復(fù)；滴加一抗（C-met/COX-2）（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照）；滴加生物素標(biāo)記二抗 37 ℃孵育30 min；DAB顯色；復(fù)染、1%鹽酸酒精分化、脫水、透明、封片、鏡檢。陽(yáng)性對(duì)照：C-met為乳腺癌標(biāo)本，COX-2為肺癌標(biāo)本。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判斷

在光學(xué)顯微鏡，棕黃色顆?；蜃睾稚w粒為陽(yáng)性信號(hào)，均無(wú)背景著色。為每張切片在高倍鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)不同的視野，根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，按Fromowitz陽(yáng)性細(xì)胞半定量分級(jí)法, 先計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占百分率并打分：<6%為0分；6%~25%為1分；26%~50%為2分；51%~75%為3分；>75%為4分。然后根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度打分：陰性為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。最后將兩者分?jǐn)?shù)相加，0~1分為陰性（-），2~3分為弱陽(yáng)性（+），4~5分為中度陽(yáng)性（++），6~7分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）（部分病例見附圖1-4）。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 12.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)以±表示，均數(shù)比較采用檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析，< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 C-met和COX-2在正常肺組織和NSCLC組織中的表達(dá)

實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在年齡（= 1.241 ,= 0.218）和性別（χ2= 0.00，= 1.00）構(gòu)成上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，數(shù)據(jù)具有可比性。

2.1.1 C-met在正常肺組織和NSCLC組織中的表達(dá)

表1 C-met在NSCLC組織和癌旁正常肺組織中的表達(dá)情況

2.1.2 COX-2在正常肺組織和NSCLC組織中的表達(dá)

表2 COX-2在NSCLC組織和癌旁正常肺組織中的表達(dá)情況

2.2 C-met和COX-2在NSCLC組織中表達(dá)與臨床、病理參數(shù)的關(guān)系

2.2.1C-met在NSCLC組織中表達(dá)與臨床、病理參數(shù)的關(guān)系

表3 c-met在NSCLC組織中表達(dá)與臨床、病理參數(shù)的關(guān)系

*病理分級(jí)不包括6例分級(jí)不詳病例：肺泡癌3例、鱗腺癌2例、大細(xì)胞未分化癌1例。

2.2.2 COX-2在NSCLC組織中的表達(dá)與臨床、病理參數(shù)的關(guān)系

表4 COX-2在NSCLC組織中表達(dá)與臨床、病理參數(shù)的關(guān)系

*病理分級(jí)不包括6例分級(jí)不詳病例：肺泡癌3例、鱗腺癌2例、大細(xì)胞未分化癌1例。

2.3 C-met和COX-2表達(dá)的相關(guān)性

通過(guò)比較分析資料可知37例C-met陽(yáng)性病例和43例COX-2陽(yáng)性病例中，有33例為同一標(biāo)本C-met和COX-2兩者共同表達(dá)陽(yáng)性。采用Spearman相關(guān)性分析顯示，C-met和COX-2在NSCLC中表達(dá)呈正相關(guān)性（= 0.981,= 0.000)。

3 討論

目前，HGF/C-met通路被認(rèn)為是人類腫瘤最常發(fā)生異常的信號(hào)通路之一。研究顯示，在肝癌、胃癌等大多數(shù)實(shí)體瘤及血液惡性腫瘤中均觀察到異常的HGF/C-met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[5-6]。Ponzo[7]等通過(guò)在大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭蟹N植惡性腫瘤細(xì)胞，觀察到C-met基因突變，提示C-met基因突變?cè)谀[瘤發(fā)生過(guò)程中可能起重要作用。C-met與肺癌的作用還處于研究階段。Lutterbach等[8]通過(guò)檢測(cè)C-met在NSCLC細(xì)胞系中的表達(dá)情況，觀察到C-met在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系中過(guò)度表達(dá)，而且表達(dá)水平高于對(duì)照組約2.5倍。Tsao[9]等通過(guò)檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌中C-met表達(dá)，結(jié)果顯示C-met在NSCLC中呈高表達(dá)，腺癌表達(dá)率高于鱗癌。Masuya[10]等研究報(bào)道C-met與NSCLC臨床分期明顯相關(guān)。艾婷等[11]則觀察到NSCLC中C-met的表達(dá)與組織分化程度有關(guān)，與性別、年齡、吸煙、病理類型、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及TNM分期均無(wú)關(guān)。本研究運(yùn)用Elivision免疫組化法檢測(cè)60例NSCLC組織和20例癌旁正常組織中C-met表達(dá)情況。60例NSCLC組織中37例表現(xiàn)為陽(yáng)性，所占比為61.7%，20例正常組織中僅4例為（+），所占比為20%，兩組表達(dá)有顯著差異（χ2= 10.432,= 0.001）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腺癌23例病例中18例表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性率78.3%，其中（+）、（++）、（+++）分別為1例、5例、12例；34例鱗癌病例中17例陽(yáng)性，陽(yáng)性率50.0%，其中（+）、（++）、（+++）分別為3例、11例、3例，兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2= 4.623，= 0.032）。結(jié)果顯示C-met表達(dá)與NSCLC組織學(xué)類型有相關(guān)性，提示C-met對(duì)腺癌的影響大于鱗癌。和Tsao[9]等研究結(jié)果一致。表3中C-met陽(yáng)性表達(dá)分配結(jié)果顯示腺癌表達(dá)強(qiáng)度似乎比鱗癌更強(qiáng)，有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究結(jié)果顯示非小細(xì)胞肺癌中C-met表達(dá)與病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期亦相關(guān)，病理分級(jí)Ⅲ級(jí)，TNM分期Ⅲa期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的NSCLC組織中C-met的表達(dá)陽(yáng)性率更高，提示C-met在NSCLC侵襲、轉(zhuǎn)移中起一定作用，參與了NSCLC的進(jìn)展。非小細(xì)胞肺癌患者伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和較高臨床分期意味著預(yù)后不良，C-met的表達(dá)可能和NSCLC患者的預(yù)后有一定的關(guān)系，可作為一個(gè)潛在的肺癌分期及預(yù)后標(biāo)志物。

COX-2存在于多種惡性腫瘤中。Richardsen等[12]研究顯示COX-2在原發(fā)性前列腺癌組織中存在高表達(dá)。Balraj Singh等[13]研究提示COX-2與乳腺癌形成有關(guān)。國(guó)內(nèi)外很多研究[14-15]報(bào)道COX-2在NSCLC中的高表達(dá)，表達(dá)率為70%-93.58%，以腺癌表達(dá)更顯著。本研究結(jié)果如表2所示20例正常組織中僅2例COX-2表達(dá)為（+），陽(yáng)性率為10%；60例NSCLC組織中43例表現(xiàn)為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為71.7%。結(jié)果提示COX-2表達(dá)與NSCLC有關(guān)。進(jìn)一步分析顯示COX-2在NSCLC中表達(dá)和病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)。腺癌、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ⅲa期的病例均明顯高于鱗癌、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、I~II期的病例。結(jié)果還顯示，病理分級(jí)Ⅲ級(jí)病例比I~II級(jí)病例表達(dá)率高，分別為78.3%和67.7%，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 0.728，= 0.393）。結(jié)果提示COX-2和NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)，可能參與了NSCLC腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移，可作為一個(gè)潛在的肺癌分期及預(yù)后標(biāo)志物。可能的機(jī)制是COX-2可促進(jìn)新生血管的形成，為腫瘤的生長(zhǎng)提供了營(yíng)養(yǎng)從而加速腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)并侵犯血管進(jìn)入血液循環(huán)向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

研究表明C-met和COX-2在胃癌、肝癌等多種惡性腫瘤中存在相互作用，Chen JH[16]等通過(guò)檢測(cè)30例胃癌組織標(biāo)本C-met、COX-2的表達(dá)，結(jié)果顯示兩者均高表達(dá)且明顯相關(guān)。Herrera等[17]研究報(bào)道在COX-2過(guò)表達(dá)的食管癌細(xì)胞中，抑制COX-2導(dǎo)致C-met的表達(dá)相應(yīng)下降。上述研究表明，在腫瘤細(xì)胞中COX-2和C-met二者存在相互作用。目前C-met和COX-2兩者在肺癌中的相互作用，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)免疫組化檢測(cè)60例NSCLC組織中C-met和COX-2表達(dá)情況，結(jié)果顯示37例C-met陽(yáng)性病例和43例COX-2陽(yáng)性病例中，有33例為同一標(biāo)本C-met、COX-2兩者共同表達(dá)陽(yáng)性。應(yīng)用Spearman相關(guān)性分析顯示，C-met和COX-2在NSCLC中表達(dá)呈正相關(guān)性（r = 0.981,= 0.00)?？赡艿臋C(jī)制為HGF激活C-met, 增強(qiáng)了HGF/C-met 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而影響COX-2表達(dá)，COX-2再激活VEGF表達(dá)，促進(jìn)血管生成。即可能通過(guò)HGF-C-met-COX-2-VEGF途徑促進(jìn)肺癌腫瘤血管生成，從而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。兩者的顯著相關(guān)性提示兩者在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展中存在相互作用，為進(jìn)一步探討NSCLC發(fā)病機(jī)制以及探尋非小細(xì)胞肺癌治療新途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

附圖：

圖1 24#病例低分化鱗癌(病理號(hào)439729)C-met表達(dá)（+++） Nikon 55i 10×10

圖2 25#病例低分化腺癌(病理號(hào)439177)C-met表達(dá)（+++） Nikon 55i 40×10

圖3 25#病例低分化腺癌(病理號(hào)439177)COX-2表達(dá)（+） Nikon 55i 10×10

圖4 18#病例低分化鱗癌(病理號(hào)452811)COX-2表達(dá)（++） Nikon 55i 10×10

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EXPRESSION AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF C-MET AND COX-2 IN NON-SMALL CELL LUNG CANCER

WANG Feng-ting

(School of Clinical medicine, Jinggangshan University, Ji’an, Jiangxi 343000, China)

: To discuss the expressions and clinical significance of C-met and COX-2 in NSCLC.: 60 samples of NSCLC tissue and 20 samples of normal lung tissue were selected from January in 2010 to June in 2011. The expressions of C-met and COX-2 in NSCLC and normal lung tissue were detected by immunohistochemical method.: C-met and COX-2 expression in NSCLSC were significantly higher than that in peri-cancer normal lung tissue. The over-expression of C-met and COX-2 in NSCLC was close correlative with pathological types, metastasis, TNM stage; The correlation for expression of C-met and COX-2 in NSCLC was positive.: C-met and COX-2 play a very important role in the occurrence and progress of NSCLC. C-met and COX-2 may become biomarker of early diagnosis and prognostic evaluation. The significant correlation between them shows their interaction in NSCLC happen and development, which provides experimental data for exploring a new method of the therapy of NSCLC.

C-met; COX-2; Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC); immunohistochemistry

R734.2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2013.01.021

1674-8085(2013)01-0095-06

2012-06-12；

2012-10-28

王風(fēng)婷(1976-)，女，江西吉安人，副主任醫(yī)師、講師，碩士，主要從事呼吸內(nèi)科、肺部腫瘤研究(E-mail: 7666wft@sina.com)