王定雪，司 玲，劉 靜，許建陽

阿爾茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)，又稱老年性癡呆，臨床以記憶力減退為主要癥狀，常伴有其他認知功能損害，是老年人較為常見的疾病。AD 的病因機制較為復(fù)雜，目前還沒有完全掌握其病因機制。但是有研究認為，在AD 的形成與發(fā)展過程中氧化應(yīng)激反應(yīng)起著重要的推動作用［1］。為此，本研究采用D-半乳糖、亞硝酸鈉腹腔注射造模的方法，觀察針刺對AD 大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及SOD、MDA 的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級SD 雄性大鼠40 只，體重(200±20)g(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供)，隨機分為空白組、模型組、對照組、針刺組，各組10 只。

1.2 方法

1.2.1 AD 動物模型制備 除空白組不進行造模處理，其余3組大鼠采用腹腔注射D-半乳糖(120 mg/kg)和亞硝酸鈉(45 mg/kg)復(fù)合造模［2］的方法模擬AD，連續(xù)6周;以Morris 水迷宮［3］實驗中模型組大鼠出現(xiàn)逃避潛伏期的時間延長，穿環(huán)次數(shù)顯著減少為造模成功。

1.2.2 治療方法 針刺組從造模后第21 天開始，通過針刺四關(guān)穴［4］、足三里進行干預(yù)治療。每次行針3 min，留針10 min。針刺強度為中度，10 d為一療程，間歇2 d，治療3個療程。對照組給予鹽酸多奈哌齊混懸液0.45 mg/kg 灌胃，療程同針刺組。空白組、模型組不做任何干預(yù)治療。

1.2.3 測試指標 在給予對照組、針刺組最后一次治療后，采用Morris 水迷宮測試4組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。待大鼠禁食24 h 后，將大鼠脫臼處死，迅速斷頭后將大鼠頭部置于冰袋上快速剝離腦殼取出大腦，用4℃的生理鹽水將腦組織沖洗干凈，剪碎，放置于勻漿器中，加入9 倍的4℃生理鹽水，制備成10%的組織勻漿，2500 r/min，離心10 min，取上清液置4℃?zhèn)溆谩Ｈ∩锨逡喊碋LISA 方法測SOD 活性、MDA 含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 所有實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用±s 表示，組間比較采用方差分析，方差齊性時采用LSD 進行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 針刺對AD 大鼠逃避潛伏期和穿環(huán)次數(shù)的影響 模型組與空白組比較，模型組大鼠的平均逃避潛伏期時間明顯延長(P＜0.01)，穿環(huán)次數(shù)減少(P＜0.01);說明采用D-半乳糖和亞硝酸鈉復(fù)合模擬AD 的方法成功。針刺組、對照組與模型組比較，平均逃避潛伏期的時間減少(P＜0.01);大鼠的穿環(huán)次數(shù)增多(P＜0.05);針刺組與對照組比較，在逃避潛伏期時間與穿環(huán)次數(shù)上無明顯差異。提示針刺能改善AD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力(表1)。

2.2 針刺對大鼠腦組織SOD 活性和MDA 的影響針刺組及對照組、空白組大鼠腦組織SOD 活性均高于AD 模型組(P＜0.01)，MDA 的含量明顯減少(P＜0.01);針刺組與對照組比較，SOD 的活性、MDA 的含量均無統(tǒng)計學(xué)差異。提示針刺可增強大鼠腦組織抗氧化的能力，減少氧化損傷(表2)。

表1 針刺對AD 大鼠逃避潛伏期和穿環(huán)次數(shù)的影響(n=10;)

表1 針刺對AD 大鼠逃避潛伏期和穿環(huán)次數(shù)的影響(n=10;)

注:與模型組比較，①P＜0.01;②P＜0.05

表2 針刺對AD 大鼠腦組織SOD 活性和MDA 的影響(n=10;)

表2 針刺對AD 大鼠腦組織SOD 活性和MDA 的影響(n=10;)

注:與模型組比較，①P＜0.01

3 討 論

中國大約有600 萬AD 患者，占全球患者總數(shù)的1/4，65歲以上老年人AD 患病率高達10.1%［5］，且治療、護理費用昂貴。隨著我國步入老齡化社會，將會有更多的人患病，給患者的家庭和社會帶來了沉重的負擔(dān)。由于AD 的病因復(fù)雜，關(guān)于其發(fā)病機制的假說較多。有很多的研究表明，氧化應(yīng)激與AD 之間有著密切的聯(lián)系［6］，其中蛋白質(zhì)的氧化修飾在AD 的發(fā)病過程中發(fā)揮了重要作用［7］。在病理情況下，腦內(nèi)自由基的清除和產(chǎn)生平衡失調(diào)導(dǎo)致自由基堆積，從而對大腦產(chǎn)生氧化損傷［8］，進而導(dǎo)致AD 的發(fā)生。反映氧化應(yīng)激造成大腦組織損傷較為常用的檢測指標為MDA 及SOD［9］。MDA 是腦組織脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，能夠造成生物膜變性、破壞，從而影響蛋白質(zhì)的功能，表現(xiàn)出學(xué)習(xí)記憶能力的衰退。SOD 是機體清除自由基的關(guān)鍵酶，其主要作用是催化生物氧化產(chǎn)生超氧自由基，清除并阻止由氧自由基引發(fā)的連鎖反應(yīng)［10］。

本研究表明，模型組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯下降，且SOD 活性降低，MDA 含量增加，證明D-半乳糖和亞硝酸鈉造模成功。針刺組與模型組比較SOD活性增加、MDA 的含量減少，說明針刺具有抗氧化反應(yīng)和降低脂質(zhì)過氧化水平的作用。另外，行為學(xué)檢測結(jié)果表明，針刺在一定程度上改善了AD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能障礙，因而從一個側(cè)面提示可能隨著腦內(nèi)MDA 含量減少、SOD 活性增加，使得自由基對神經(jīng)元的損傷減少，從而改善和維持正常的學(xué)習(xí)記憶能力。

AD 屬中醫(yī)的癡呆、善忘、神疑的范疇［11］。中醫(yī)認為該病病位在腦，病因病機多為本虛標實，本虛主要為腎精虧損和氣血不足，標實主要表現(xiàn)為痰瘀阻竅［12］。痰瘀不僅蒙蔽腦竅，而且阻礙正常氣血運行，使腦氣不能與臟氣相接，腦失所養(yǎng)而成癡呆。選針刺四關(guān)穴(合谷、太沖)可以調(diào)節(jié)一身氣血的升降，起到上疏下導(dǎo)，開關(guān)宣竅，調(diào)暢氣機，活血通絡(luò)之功［13］。足三里具有健脾調(diào)胃，祛痰開竅的功效，從而使氣血生化有源，腦有所養(yǎng)。四關(guān)穴配足三里可以起到健腦開竅、祛痰活血的效果。

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