盧 瑋，鄭桂梅，劉愛(ài)民

（1.吉林大學(xué)第二醫(yī)院 婦產(chǎn)科，吉林 長(zhǎng)春130041；2.通化市人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科，吉林 通化134001）

腹水作為卵巢惡性腫瘤常見(jiàn)的臨床癥狀之一，臨床可根據(jù)腹水細(xì)胞形態(tài)推測(cè)原發(fā)灶，并鑒別腫瘤的良、惡性。術(shù)中及時(shí)對(duì)腹水／腹腔沖洗液脫落細(xì)胞學(xué)進(jìn)行檢查，可以為臨床治療提供可靠的病理學(xué)依據(jù)［1］。近年來(lái)，隨著液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)的不斷發(fā)展，膜式液基薄層細(xì)胞學(xué)技術(shù)（Thin prep cytology test，TCT）在臨床上應(yīng)用也越廣泛。其操作方法簡(jiǎn)單且在細(xì)胞標(biāo)本的采集、制作和診斷技術(shù)方面與傳統(tǒng)普通涂片技術(shù)相比都有很大的進(jìn)步，使卵巢惡性腫瘤腹水／腹腔沖洗液瘤細(xì)胞陽(yáng)性診出率明顯提高［2］。但是診斷效果不佳，有報(bào)道表明 Ki－67能增加宮頸涂片的診斷符合率，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)TCT聯(lián)合Ki－67在診斷卵巢癌腹水中的臨床價(jià)值進(jìn)行評(píng)估，因此本研究對(duì)此方法進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集本院200例卵巢惡性腫瘤患者腹水／腹腔沖洗液標(biāo)本，患者平均年齡38－70歲；FIGO分期，Ⅰ－Ⅱ期137例，Ⅲ－Ⅳ期63例；高分化79例，中分化63例，低分化58例；其中漿液性囊腺癌106例，黏液性囊腺癌73例，其他癌21例（內(nèi)膜樣癌11例、未分化癌8例、內(nèi)胚竇瘤2例）。所有患者抽取腹水／腹腔沖洗液標(biāo)本前均未接受過(guò)內(nèi)分泌、放療及化療類(lèi)藥物治療。全部病例術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)。

1.2 腹水標(biāo)本的處理 在開(kāi)腹后取腹水，如果腹水量少的話，用30－50ml生理鹽水沖洗腹腔，然后再取腹腔沖洗液，所取得的標(biāo)本分2管收集，并立即送實(shí)驗(yàn)室，分別采用TCT＋ Ki－67和TCT分別進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。

1.3 新柏氏TCT涂片 儀器：新柏氏2000薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)、細(xì)胞保存液、清洗液。將標(biāo)本采集在干燥、干凈的離心管中離心3min，棄掉上清液，取3 ml Thin2prep細(xì)胞保存液加入離心管中，混勻后倒入保存瓶，經(jīng)Thinprep2000微電腦系統(tǒng)程序化處理，制成直徑為2cm的薄層細(xì)胞涂片，95%乙醇固定10min，經(jīng)HE染色，封固后鏡檢。如果血液標(biāo)本有多量，則加入3－5滴25%冰醋酸和細(xì)胞處理液混勻細(xì)胞層，混勻后（1 500r／min）10min離心，棄上清液后，加入細(xì)胞保存液。將剩余在保存液瓶中的標(biāo)本保存，以作再次制片備用。最后在顯微鏡下觀察結(jié)果。

1.4 Ki－67免疫組化陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒達(dá)到下面標(biāo)準(zhǔn)者為Ki－67染色陽(yáng)性：10個(gè)高倍（＠400）視野中，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，有Ki－67標(biāo)記核的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于10%為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)數(shù)資料組間用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05說(shuō)明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腹腔液TCT與TCT＋Ki－67免疫組化染色質(zhì)量的比較 見(jiàn)表1。

在細(xì)胞量及異常細(xì)胞量方面，TCT＋ Ki－67有76例（38%）優(yōu)于TCT；在細(xì)胞保存及形態(tài)結(jié)構(gòu)方面，TCT＋ Ki－67有147例（73.5%）和 TCT一致；在背景材料方面，TCT＋ Ki－67有98例（49.0%）和TCT一致（見(jiàn)表1）。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩種檢查方法在免疫組化染色質(zhì)量方面，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝75.0，P＜0.001）

表1 腹腔液TCT與TCT＋Ki－67免疫組化染色質(zhì)量的比較〔n（%）〕

2.2 兩種檢查方法的診斷結(jié)果 見(jiàn)表2。

所有病例以病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)病理驗(yàn)證所有研究對(duì)象均為卵巢癌。本組TCT技術(shù)檢測(cè)，確診癌的62例（31.0%），可疑癌的19例（9.5%），陰性119例（59.5%）。TCT＋ Ki－67技術(shù)檢測(cè)，確診癌的97例（48.5%），可疑癌的22例（11.0%），陰性的81例（40.5%）。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩種檢查方法在惡性細(xì)胞確診方面，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝12.8，P＜0.001）。

表2 兩種檢查方法的診斷結(jié)果〔n（%）〕

3 討論

卵巢癌腹水／腹腔沖洗液惡性瘤細(xì)胞細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性依賴(lài)于標(biāo)本的采集、染色技術(shù)和嚴(yán)格的閱片制度。其中標(biāo)本采集的效果影響顯著，如果標(biāo)本采集不滿(mǎn)意或數(shù)量少時(shí)可能造成假陰性［3］。標(biāo)本制片受到血細(xì)胞含量多少、脫落細(xì)胞數(shù)量、退變程度、腹水新鮮程度、涂片的薄厚、染色情況以及固定狀態(tài)等因素的影響［4］。雖然TCT這一新的制片方法在這些方面相對(duì)于傳統(tǒng)普通涂片方法來(lái)說(shuō)有所改善，但還是有較大的影響。所以，對(duì)于研究出能更加有效改善這些影響因素的新方法還是非常有必要的。

Ki－67是由Hodgkin’s淋巴瘤所產(chǎn)生的L428細(xì)胞系的粗制核部的鼠單克隆抗體，1983年由Gerges等首先報(bào)道［5］。其核抗原是分子量為345 kd及395kd的兩條多肽鏈組成DNA結(jié)合核蛋白，與染色質(zhì)相連，編碼基因定位于第10號(hào)染色體。它在細(xì)胞進(jìn)入G1期時(shí)開(kāi)始表達(dá)，在S期和G2期逐漸升高，M期達(dá)到高峰，而在有絲分裂后迅速減少，G0期和G1早期不表達(dá)［6］。Ki－67是一個(gè)細(xì)胞增殖性抗原，其參與細(xì)胞周期的調(diào)控，在目前研究很多，而且已經(jīng)有研究證明用Ki－67的MIB－1抗體進(jìn)行免疫組化染色檢查在宮頸細(xì)胞學(xué)涂片中是個(gè)可行的方法［2］。但至今還沒(méi)有數(shù)據(jù)顯示，TCT聯(lián)合Ki－67在診斷卵巢癌腹水中的臨床價(jià)值。所以，本實(shí)驗(yàn)就在TCT的基礎(chǔ)上，聯(lián)合Ki－67對(duì)卵巢癌腹水的診斷進(jìn)行研究。研究表明，在免疫組化染色質(zhì)量方面，TCT＋Ki－67對(duì)細(xì)胞量及異常細(xì)胞量方面檢測(cè)優(yōu)于TCT，而對(duì)細(xì)胞保存及形態(tài)結(jié)構(gòu)和背景材料評(píng)估二者相當(dāng)，從而表明采用聯(lián)合檢測(cè)能提高免疫組化染色質(zhì)量。在診斷結(jié)果方面的比較，TCT＋Ki－67診斷和病理診斷符合的例數(shù)高于TCT，這可能是因?yàn)镵i－67在卵巢癌中高表達(dá)，能更加客觀反映腫瘤細(xì)胞的增殖能力［7，8］，從而提高了檢出符合率。

綜上所述，對(duì)卵巢癌腹水的診斷進(jìn)行研究表明，TCT聯(lián)合Ki－67能提高免疫組化染色質(zhì)量，并且診斷能力優(yōu)于TCT檢測(cè)。

［1］Aniali Limaye.Comparative analysis of conventional Papanicolaou tests and a fluid thin－based thin－layer method［J］.Arch Pathol Lab Med，2003，127（2）：143.

［2］陳素琴，馮卿卿，李全香等.TCT在卵巢惡性腫瘤腹水診斷中的臨床價(jià)值［J］.中國(guó)婦幼保健，2010，04－0572－03.

［3］梅 平，劉艷輝，莊恒國(guó)，et al.1747例宮頸陰道病變篩查結(jié)果分析［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2005，2（1）：70.

［4］Pahuja S，Choudhurg M，Gupta U.Ki－67immunostaining in Pap smear of cervix：assessment of proliferation in preinvasive and invasive aquamous epithelial lesions［J］.Indian Pathol Microbiol 2004，47（1）：1.

［5］Gerges J.Immunobichemical and molecular biologic characterization of the cell proliferation associated undear antigen that isdefined by monoclonal antibody Ki－67 ［J］.Am J Pathol，1991，（138）：867.

［6］Korkolopoulou P，Vassilopoulos I，Konstantinidou A E，et al The combined evaluation of p27Kip1and Ki－67expression provides independent information on overall survival of ovarian carcinoma apatient［J］.GynecolOncol 2002，85（3）：404.

［7］Matsuta M，Kimura S，Kosegawa G.Immunoh is to chemical detection of ki67in epithelial skin tumors in formalin fixed paraffin embedded tissue sections using a new monoclonal antibody（MIB 1）［J］.J Dermatol，1996，23（3）：147.

［8］GarzettiG G，Ciavattini A，Goteri G.Ki－67antigen immune staining（MIB1monoclonalantibody）in serous ovarian tumors：index of proliferative activity with prognostic significance［J］.GynecolOncol，1995，56（2）：169.