胡宜，程鵬，薛一雪，劉云會

（中國醫(yī)科大學(xué)1.附屬盛京醫(yī)院神經(jīng)外科，沈陽110004；2.附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科，沈陽 110001；3.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)教研室，沈陽110001）

膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤，極易復(fù)發(fā)［1］。膠質(zhì)瘤患者接受外科手術(shù)切除后，平均生存期限僅為6個月，2年生存率不足7.5%［2］。近年來，針對膠質(zhì)瘤的細(xì)胞受體、關(guān)鍵基因以及調(diào)節(jié)蛋白的靶向基因治療受到關(guān)注［3］。在其靶向治療中，尋找能將治療藥物或基因運(yùn)送到腫瘤部位的載體很重要。目前，存在于骨髓中的非造血性干細(xì)胞——骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow?derived mesenchymal stem cells，BMSCs），因其具有向膠質(zhì)瘤的趨化遷移能力而引起人們的注意［4～6］。該特性使得骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以作為膠質(zhì)瘤基因治療的合適載體。然而，BMSCs向膠質(zhì)瘤定向遷移的機(jī)制仍不明確，探明其向膠質(zhì)瘤趨化的分子生物學(xué)機(jī)制有助于提高BM?SCs的遷移效率，為進(jìn)一步合理的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

目前，在BMSCs向膠質(zhì)瘤遷移的機(jī)制研究中，多認(rèn)為腫瘤細(xì)胞會分泌多種趨化因子吸引其遷移。然而涉及BMSCs表面標(biāo)志物及其下游信號通路的研究非常有限。本研究通過調(diào)查膠質(zhì)瘤細(xì)胞對BMSCs表面黏附分子——血管細(xì)胞黏附分子?1（vascular cell adhesion molecule?1，VCAM?1）表達(dá)的影響及其在BMSCs向膠質(zhì)瘤遷移過程中的作用以及下游信號傳導(dǎo)通路，探討B(tài)MSCs向膠質(zhì)瘤趨化遷移分子生物學(xué)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

Dulbecco′s modified Eagle medium（DMEM）低糖培養(yǎng)基及優(yōu)級胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）購自美國Gibco公司，小鼠抗大鼠VCAM?1單克隆阻滯抗體（MMS?141P）購買于美國Covance公司。Trizol試劑購自加拿大Invitrogen公司，cDNA合成試劑盒購自TaKaRa生物科技公司［RNA PCR Kit（AMV）ver 3.0］。兔抗大鼠VCAM?1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司。Radio immunoprecipitation assay（RIPA）裂解液及BCA試劑盒購自碧云天生物科技公司。羅丹明標(biāo)記的山羊抗兔熒光二抗購于美國Santa Cruz公司。吉姆薩染液購自北京索萊寶科技有限公司。磷脂酰肌醇?3?激酶（phosphoinositide?3?kinase，PI3K）信號通路抑制劑LY294002購自美國Cell Signal Technology公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)［7，8］。取材對象為 4～6 周齡健康 Sprague?Dawley（SD）大鼠，體質(zhì)量60～80 g，由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物部提供。脫頸處死大鼠，浸入75%乙醇浸泡5 min，超凈臺內(nèi)無菌條件下取雙側(cè)股骨和脛骨，剪去骨骺端，以含10%血清的DMEM低糖培養(yǎng)基沖洗骨髓腔3次。以1 mL注射器針頭過濾，吹打成單細(xì)胞懸液并接種于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基的75 cm2培養(yǎng)瓶中，在含5%CO2的培養(yǎng)箱中37℃條件下培養(yǎng)。48 h后首次換液，以后每72 h換液。12～14 d后，細(xì)胞生長至80%～90%融合，以0.25%胰酶消化，然后以1∶2傳代，之后約5～7 d再次傳代，使用第2～4代細(xì)胞進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。膠質(zhì)瘤細(xì)胞株采用人U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞，由中國醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室提供，用含10%胎牛血清的DMEM低糖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，條件同樣為37℃，5%CO2。

1.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外遷移模型的建立

骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外遷移模型利用24孔板、Transwell小室（聚碳酸酯膜，孔徑為8μm，型號3422，購自Coning Costar公司）。分為實(shí)驗(yàn)組，VCAM?1阻斷組及對照組。實(shí)驗(yàn)組中人U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞以無血清L?DMEM培養(yǎng)基重懸，將5×105/mL密度的U251細(xì)胞懸液0.5 mL接種于24孔板小孔內(nèi)。培養(yǎng)4 h后，待U251細(xì)胞完全貼壁后，Transwell小室內(nèi)接種密度為1×106/mL的BMSCs懸液0.2 mL，培養(yǎng)24 h。對照組的24孔板小孔內(nèi)放置同體積的不含細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基。VCAM?1阻斷組則在上室加入VCAM?1特異性阻斷單克隆抗體（Covance，10 μg/mL）或磷脂酰肌醇?3?激酶（PI3K）信號通路抑制劑 LY294002（10 μmol/L）。培養(yǎng) 24 h后，取出Transwell小室，用無菌棉棒輕擦去聚碳酸酯膜上表面的細(xì)胞，利用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solu?tion，PBS）漂洗1次，甲醇∶冰乙酸（3∶1）固定30 min，吉姆薩染液（工作液∶稀釋液為9∶1）染色15 min。甩去染液，自來水沖洗2次，光鏡下觀察計(jì)數(shù)遷移到聚碳酸酯膜下表面的細(xì)胞。每組6孔，每孔計(jì)數(shù)6個隨機(jī)400×視野內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，然后遷移能力以遷移指數(shù)（migration index）表示［9］。所得數(shù)據(jù)采用±s表示。

1.4 逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT?PCR）

第三代培養(yǎng)的BMSCs細(xì)胞在U251細(xì)胞上清中培養(yǎng)24 h。加入LY294002（30 μmol/L）。無血清培養(yǎng)基作為對照組?？俁NA按照說明書，利用Trizol提取。cDNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)利用TaKaRa的PCR Kit（AMV）ver 3.0，加入500 ng的總RNA。PCR采用的引物序列為 5′?ACACCTCCCCCAAGAATACAG?3′（forward）和5′?GC TCATCCTCAACACCCACAG?3′（reverse），擴(kuò)增片段長度為477 bp。PCR反應(yīng)條件體系為94℃變性30 s，63℃退火30 s，72℃延伸1 min。進(jìn)行32次循環(huán)。PCR的產(chǎn)物采用含溴化乙錠的1%瓊脂糖凝膠電泳，然后在紫外線下發(fā)光，并計(jì)算目的基因與β?actin的積分光密度比值并進(jìn)行數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)。

1.5 蛋白印跡（Western blot）

BMSCs以預(yù)先冰冷的PBS沖洗3次，然后利用細(xì)胞刮刀收集于離心管中，加入適量RIPA裂解液（碧云天），冰上裂解30 min，然后超聲粉碎。4℃條件下以14 000 g離心5 min，含有蛋白的上清被收集到新管中。利用BCA法測定蛋白濃度。蛋白上樣量為25 μg，利用10%SDS?polyacrylamide gel electro?phoresis（PAGE）凝膠電泳進(jìn)行蛋白分離。轉(zhuǎn)膜后以兔抗大鼠的VCAM?1多克隆抗體及小鼠抗大鼠β?actin多克隆抗體封閉過夜。山羊抗小鼠及抗兔的辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育1 h，利用ChemiImager 5500 V2.03軟件檢測，并測定積分光密度值，計(jì)算目的基因與β?actin的積分光密度相對比值并進(jìn)行數(shù)學(xué)統(tǒng)計(jì)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析利用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（版本為13.0）進(jìn)行，并經(jīng)過配對t檢驗(yàn)驗(yàn)證；多組間差異經(jīng)過Bonferroni檢驗(yàn)，均計(jì)算P值。以P＆lt;0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)

原代取材3 d后即可觀察到貼壁細(xì)胞。5 d形成集落（圖1A）。12～14 d生長至80%～90%融合，呈旋渦狀、鋪路石狀（圖1B）。傳代后大約5～7 d再次生長至90%融合，可進(jìn)行再次傳代。吉姆薩染色下顯示第3代BMSCs細(xì)胞形態(tài)比較均一，呈有突起的長梭型（圖1C）。

圖1 BMSCs形態(tài)Fig.1 The morphology of BMSCs

2.2 VCAM?1及PI3K信號通路在BMSCs向人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移中發(fā)揮作用

與對照組相比，在Transwell體外遷移系統(tǒng)中，U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞強(qiáng)烈的吸引BMSCs的遷移（圖2A，2B）。加入VCAM?1特異性阻斷單克隆抗體后，與U251組相比，發(fā)生遷移的BMSCs細(xì)胞數(shù)量顯著減少（圖2C），遷移的細(xì)胞數(shù)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2E）（P＆lt;0.05）。為了進(jìn)一步探明BMSCs發(fā)生遷移的信號傳導(dǎo)機(jī)制，加入了PI3K信號通路抑制劑LY294002。結(jié)果顯示與U251組相比，遷移到半透膜下表面的BMSCs細(xì)胞數(shù)量同樣明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2E）（P＆lt;0.05）。

圖2 U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞誘導(dǎo)BMSCs的遷移被VCAM?1阻滯抗體及LY294002抑制Fig.2 U251 glioma cells induced migration of BMSCs was impaired by blocking antibody against VCAM?1 and LY294002

2.3 U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞上調(diào)BMSCs的VCAM?1核酸及蛋白表達(dá)

利用RT?PCR及Western blot方法檢測U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞對BMSCs的VCAM?1核酸及蛋白的表達(dá)影響。RT?PCR結(jié)果顯示：與無血清對照組相比，U251細(xì)胞上清顯著增強(qiáng)了BMSCs的VCAM?1的mRNA表達(dá)（圖3A）。Western blot結(jié)果同樣顯示，在U251細(xì)胞培養(yǎng)上清的誘導(dǎo)下，BMSCs的VCAM?1蛋白質(zhì)的表達(dá)水平明顯升高（圖3B），表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3C）。

圖3 PI3K信號通路在U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞調(diào)控BMSCs的VCAM?1表達(dá)中的作用Fig.3 The role of PI3K pathway in the regulation of VCAM?1 expression on BMSCs by U251 glioma cells.

2.4 PI3K信號通路調(diào)控BMSCs的VCAM?1表達(dá)

為了探明U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞對BMSCs的VCAM?1表達(dá)調(diào)控中的信號傳導(dǎo)通路，在U251細(xì)胞培養(yǎng)上清誘導(dǎo)的同時加入PI3K通路抑制劑LY294002（30μ mol/L）。結(jié)果顯示，加入LY294002后，被膠質(zhì)瘤細(xì)胞上調(diào)的VCAM?1蛋白質(zhì)及核酸表達(dá)均受到顯著抑制（圖3A、3B），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖3C）（P＆lt;0.05）。

3 討論

本研究首先成功分離并以全骨髓法培養(yǎng)BM?SCs，結(jié)果顯示其易于體外擴(kuò)增，細(xì)胞形態(tài)比較均一，呈典型的集落樣生長，形態(tài)符合文獻(xiàn)中報(bào)道［6］。我們的研究首先證實(shí)BMSCs在體外具有向人U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移的能力，然后觀察到U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞誘導(dǎo)的BMSCs遷移可被VCAM?1特異性單克隆阻斷抗體或PI3K信號通路抑制劑LY294002所抑制，明確了細(xì)胞表面粘附分子VCAM?1以及PI3K信號通路在BMSCs向膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移中發(fā)揮作用。同時發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞可顯著上調(diào)BMSCs的VCAM?1核酸及蛋白表達(dá)，而PI3K信號通路抑制劑LY294002可抑制VCAM?1的表達(dá)上調(diào)及BMSCs的遷移能力。以上結(jié)果說明膠質(zhì)瘤細(xì)胞可能通過促進(jìn)BMSCs表達(dá)細(xì)胞表面粘附分子而誘導(dǎo)其遷移，同時在這一過程中PI3K信號通路發(fā)揮作用。

由于膠質(zhì)瘤的惡性浸潤性生長方式，傳統(tǒng)的腫瘤全切以及術(shù)后放化療等仍無法完全根除并防止其復(fù)發(fā)。在此背景下，基因靶向治療成為熱點(diǎn)。BMSCs是來自于中胚層、存在于骨髓中的非造血干細(xì)胞，除多向分化潛能外，還具有免疫調(diào)節(jié)活性［10，11］。另一方面，BMSCs向腫瘤的趨向遷移已引起人們的關(guān)注［12，13］。有學(xué)者認(rèn)為，BMSCs向腫瘤的趨向性具有特異性及普遍性，是其作為干細(xì)胞的一個內(nèi)在特點(diǎn)［14］。BMSCs容易分離提取，體外培養(yǎng)擴(kuò)增方便，具有高度可塑性，免疫相容性好，被認(rèn)為是組織工程和細(xì)胞移植治療中的理想細(xì)胞［15］。利用BMSCs的向腫瘤的趨化特性，將基因轉(zhuǎn)換技術(shù)及細(xì)胞移植結(jié)合起來，有可能使其成為理想的基因治療載體。然而BMSCs的這種向膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移特性的機(jī)制目前仍不明確。腫瘤細(xì)胞會分泌多種與炎性細(xì)胞趨化相關(guān)的細(xì)胞因子，如內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子等［16］。生長因子類對BMSCs有較強(qiáng)趨化作用，例如血小板源性生長因子?BB是較強(qiáng)烈吸引BMSCs遷移的因子［4］。但目前關(guān)于BMSCs本身及細(xì)胞標(biāo)志物、受體及下游信號通路在其向膠質(zhì)瘤的遷移中的變化，則未見報(bào)道。

黏附分子是一類重要的糖蛋白，介導(dǎo)白細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞間的黏附及遷移。目前，對BMSCs的細(xì)胞表面黏附分子表達(dá)情況研究很少。作為一類重要的細(xì)胞表面黏附分子，VCAM?1參與調(diào)節(jié)白細(xì)胞向微血管內(nèi)皮的遷移及附著［17，18］。有研究指出VCAM?1 及其受體α4β1 整合素表達(dá)于 BMSCs［19，20］，同時VCAM?1在BMSCs向心血管內(nèi)皮的遷移中也發(fā)揮作用［21］。因此我們推測在BMSCs向人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移中，VCAM?1同樣可能發(fā)揮作用。在體外遷移模型中，Transwell上室內(nèi)加入濃度為10 μg/mL的VCAM?1特異性單克隆阻滯抗體后，U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞引起的BMSCs遷移數(shù)量明顯減少，說明阻滯VCAM?1后BMSCs的向膠質(zhì)瘤遷移能力顯著減弱。在此基礎(chǔ)上，我們又進(jìn)一步研究了膠質(zhì)瘤細(xì)胞對BMSCs的VCAM?1表達(dá)調(diào)控。RT?PCR及Western blot研究結(jié)果顯示，U251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的培養(yǎng)上清誘導(dǎo)可顯著促進(jìn)BMSCs的VCAM?1 mRNA及蛋白的表達(dá)。磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide?3?ki?nase，PI3K）信號通路在細(xì)胞存活、增殖、趨化等重要的細(xì)胞生命活動中發(fā)揮作用，并與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［22，23］。Forte等［24］報(bào)道PI3K與肝細(xì)胞生長因子介導(dǎo)的BMSCs遷移有關(guān)。另有報(bào)道指出PI3K通路參與人類內(nèi)皮細(xì)胞的VCAM?1表達(dá)調(diào)控［26，25］。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)PI3K信號通路抑制劑LY294002明顯抑制BMSCs向U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力，同時可以抑制被膠質(zhì)瘤細(xì)胞上調(diào)的黏附分子的mRNA及蛋白表達(dá)，說明在膠質(zhì)瘤調(diào)控BMSCs的VCAM?1表達(dá)過程中PI3K信號通路發(fā)揮重要作用。

上述結(jié)果表明，在膠質(zhì)瘤細(xì)胞的作用下BMSCs可能通過上調(diào)表達(dá)細(xì)胞表面黏附分子VCAM?1而促進(jìn)其向膠質(zhì)瘤定向遷移，并且在該過程中的下游信號傳導(dǎo)通路為PI3K信號通路，這可能是BMSCs向腫瘤的趨化遷移的機(jī)制之一。

［1］Sanai N，Berger MS.Glioma extent of resection and its impact on pa?tient outcome［J］.Neurosurgery，2008，62（4）：753-766.

［2］Siebzehnrub FA，Reynol BA，Vescovi A，et al.The origins of glioma：E Pluribus Unum?［J］.Glia，2011，59（8）：1135-1147.

［3］Ryu CH，Park S?H，Park SA，et al.Gene therapy of intracranial glio?ma using interleukin 12?secreting human umbilical cord blood?de?rived mesenchymal stem cells［J］.Hum Gene Ther，2011，22（6）：733-743.

［4］Cheng P，Gao ZQ，Liu YH，et al.Platelet?derived growth factor BB promotes the migration of bone marrow?derived mesenchymal stem cells towards C6 glioma and up?regulates the expression of intracel?lular adhesion molecule?1［J］.Neurosci Lett，2009，451（1）：52-56.

［5］Yang B，Wu X，Mao Y，et al.Dual?targeted antitumor effects against brainstem glioma by intravenous delivery of tumor necrosis factor?elated，apoptosis?inducing，ligand?engineered human mesenchymal stem cells［J］.Neurosurgery，2009，65（3）：610-624.

［6］Bexell D，Gunnarsson S，Tormin A，et al.Bone marrow multipotent mesenchymal stroma cells act as pericyte?like migratory vehicles in experimental gliomas［J］.Mol Ther，2009，17（1）：183-190.

［7］Snykers S，Vanhaecke T，Rogiers V.Isolation of rat bone marrow stem cells［J］.Methods Mol Biol，2006，320：265-272.

［8］Tohill M，Mantovani C，Wiberg M，et al.Rat bone marrow mesenchy?mal stem cells express glial markers and stimulate nerve regenera?tion［J］.Neurosci Lett，2004，362（3）：200-203.

［9］Haasters F，Prall WC，Westphal I，et al.Overexpression of dnIKK in mesenchymal stem cells leads to increased migration and decreased invasion upon TNFα stimulation［J］.Biochem Biophys Res Com?mun，2013，436（2）：265-270.

［10］Sasser AK，Sullivan NJ，Studebaker AW，et al.Interleukin?6 is a potent growth factor for ER?alpha?positive human breast cancer［J］.Faseb J，2007，21（13）：3763-3770.

［11］Sasportas LS，Kasmieh R，Wakimoto H，et al.Assessment of thera?peutic efficacy and fate of engineered human mesenchymal stem cells for cancer therapy［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2009，106（12）：4822-4827.

［12］Karnoub AE，Dash AB，Vo AP，et al.Mesenchymalstem cells with?in tumour stroma promote breastcancer metastasis［J］.Nature，2007，449（7162）：557-563.

［13］Hall B，Andreeff M，Marini F.The participation of mesenchymal stem cells in tumor stroma formation and their application as tar?geted?gene delivery vehicles［J］.Handb Exp Pharmacol，2007，180：263-283.

［14］Nakamizo A，Marini F，Amano T，et al.Human bone marrow?derived mesenchymal stem cells in the treatment of gliomas［J］.Cancer Res，2005，65（8）：3307-3318.

［15］Hong X，Cathie M，Smita SB，et al.Antitumor treatment using inter?leukin?12?secreting marrow stromal cells in an invasive glioma model［J］.Neurosurgery，2009，64（6）：1139-1147.

［16］Nakamura K，Ito Y，Kawano Y，et al.Antitumor effect of genetical?ly engineered mesenchymal stem cells in a rat glioma model［J］.Gene Ther，2004，11（14）：1155-1164.

［17］Hyun YM，Chung HL，McGrath JL，et al.Activated integrin VLA?4 localizes to the lamellipodia and mediates T cell migration on VCAM?1［J］.J Immunol，2009，183（1）：359-369.

［18］Yilmaz G，Granger DN.Leukocyte recruitment and ischemic brain injury［J］.Neuromolecular Med，2010，12（2）：193-204.

［19］Rosenman SJ，Shrikant P，Dubb L，et al.Cytokine?induced expres?sion of vascular cell adhesion molecule?1（VCAM?1）by astrocytes and astrocytoma cell lines［J］.J Immunol，154（4）：1888-1889.

［20］M?enp?? A，Kovanen PE，Paetau A，et al.Lymphocyte adhesion molecule ligands and extracellular matrix proteins in gliomas and normal brain：expression of VCAM?1 in gliomas［J］.Acta Neuro?pathol，1997，94（3）：216-225.

［21］Segers VFM，van Riet I，Andries LJ，et al.Mesenchymal stem cell adhesion to cardiac microvascular endothelium：activators and mechanisms［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2006，290（4）：H1370-H1377.

［22］Karar J，Maity A.PI3K/AKT/mTOR pathway in angiogenesis［J］.Front Mol Neurosci，2011，4：51-51.

［23］Scrima M，Marco C De，F(xiàn)abiani F，et al.Signaling networks associ?ated with AKT activation in non?small cell lung cancer（NSCLC）：New insights on the role of phosphatydil?inositol?3 kinase［J］.PloS One，2012，7（2）：e30427.

［24］Forte G，Minieri M，Cossa P，et al.Hepatocyte growth factor effects on mesenchymal stem cells：proliferation，migration，and differenti?ation［J］.Stem Cells（Dayton，Ohio），2006，24（1）：23-33.

［25］Tsoyi K，Jang HJ，Nizamutdinova IT，et al.PTEN differentially reg?ulates expressions of ICAM?1 and VCAM?1 through PI3K/Akt/GSK?3beta/GATA?6 signaling pathways in TNF?alpha?activated human endothelial cells［J］.Atherosclerosis，2010，213（1）：115-121.

［26］Ward SG，Westwick J，Harris S.Sat?Nav for T cells：Role of PI3K isoforms and lipid phosphatases in migration of T lymphocytes［J］.Immunol Lett，2011，138（1）：15-18.