汪廣劍，瞿發(fā)林，仲愛芳，卜 瑩，閆同軍

抑郁癥是嚴重困擾人類的精神疾病，女性比男性更容易罹患抑郁癥［1］。在產(chǎn)后與圍絕經(jīng)期這段時期里，卵巢功能減退導致各種激素的分泌減少，尤其是雌激素的減少，從而出現(xiàn)一系列諸如記憶減退、潮熱、失眠、抑郁、焦慮等方面的癥狀。女性對低激素水平或者激素水平起伏的敏感性高于男性，導致女性發(fā)病率高于男性［2］。雌激素受體［3］(estrogen receptor，ER)，可分為兩種亞型，即ERα和ERβ。人ERβ基因5號外顯子的配體結(jié)合區(qū)(1082號核苷酸)可發(fā)生G→A點突變。8號外顯子的3＇端非編碼區(qū)(1730號核苷酸)可發(fā)生A→G點突變。當這兩處點突變發(fā)生后則分別出現(xiàn)限制性內(nèi)切酶Rsa-Ι和Alu-Ι的識別位點，因此酶切ERβ的酶切片段就能區(qū)分ERβ的不同基因型。ERβ的這種基因多態(tài)性可能會影響不同個體ERβ的表達水平和功能，進而影響體內(nèi)雌激素生物學效應的發(fā)揮。本文以ERβ基因的兩個多態(tài)性位點作為研究對象，以探討我國漢族人群中ERβ基因多態(tài)性與女性產(chǎn)后抑郁癥的關系。

1 對象與方法

1.1 對象 觀察組:選取2000年1月－2010年12月在本院住院治療的常州本地漢族女性抑郁癥124例，年齡21～35歲，病程6周～6個月，均符合中國精神障礙分類與診斷標準中抑郁癥診斷標準(產(chǎn)后抑郁癥，產(chǎn)后6月內(nèi)發(fā)生)。對照組:選取同期體檢健康的文化水平、年齡相匹配的女性144例。

1.2 實驗方法 DNA制備:抗凝管抽取靜脈血3 ml，采用德國QIAGEN公司的基因組DNA試劑盒提取DNA。用軍事醫(yī)學科學院生產(chǎn)的PCR儀擴增DNA。引物由大連寶生物有限公司合成。用于擴增Alu-Ι基因的上游引物是5＇-TTTTTGTCCCCATAGTAACA-3＇，下游引物是 5＇-AATGAGGGACCACAGCA-3＇用于擴增 RSA-Ι基因的上游引物是 5＇-TCTTGCTTTCCCCAGGCTTT-3＇下游引物是 5 ＇-ACCTGTCCAGAACAAGATCT-3＇，PCR擴增及酶切 PCR試劑盒由寶生物(大連)有限公司生產(chǎn)。反應條件為:94℃變性30 s，55℃退火50 s，72℃延伸10 min，循環(huán)35次。分別取 PCR 擴增產(chǎn)物10 μl，用10 U Rsa-Ι、8 U Alu-Ι于37℃酶切3 h后電泳，用凝膠成像儀觀察電泳結(jié)果。ERβ基因型判定參照相關文獻［4］。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，基因型和等位基因頻率采用基因直接計數(shù)計算，應用擬合優(yōu)度檢驗計算基因型分布是否符合Hardy-Weinberg(H-W)平衡;組間基因型及等位基因頻率比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 基因分析結(jié)果 使用Alu-Ι酶切可區(qū)分出3種基因型:aa型(307 bp)、Aa 型(307、240、67 bp)、AA型(240、67 bp);使用Rsa-Ι酶切可區(qū)分出3種基因型:rr型(156 bp)、Rr型(156、125、31 bp)、RR型(125、31 bp)。

2.2 多態(tài)性分析結(jié)果 兩組Rsa-Ι多態(tài)性分析:觀察組和對照組均符合H-W平衡定律(P＞0.05);兩組基因型rr、Rr、RR分布的比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);兩組等位基因r和R頻率的比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05，表1)。兩組Alu-Ι多態(tài)性分析:產(chǎn)后抑郁癥組和對照組均符合H-W平衡定律(P ＞0.05);兩組基因型 aa、Aa、AA 分布的比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，兩組等位基因a和A頻率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，表2)。

表1 兩組ERβ Rsa-Ι基因型和等位基因頻率的分析［n(%)］

表2 兩組ERβ Alu-Ι基因型和等位基因頻率的分析［n(%)］

3 討論

抑郁癥是指育齡婦女在產(chǎn)后6周～6個月內(nèi)出現(xiàn)抑郁癥狀，其發(fā)生率高于非妊娠期婦女，產(chǎn)后6～12周發(fā)生率為10% ～16%，產(chǎn)后6個月內(nèi)發(fā)生率為22%。有研究表明雌二醇對中樞調(diào)節(jié)情緒和認知功能有多重影響，雌二醇可增強單胺類物質(zhì)活性和突觸后5羥色胺能效應，增加5羥色胺能受體數(shù)量和神經(jīng)遞質(zhì)的轉(zhuǎn)運和吸收。妊娠后體內(nèi)雌激素水平過快下降，使腦內(nèi)多巴胺D2受體的超敏和多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白的表達增加亦引起相應的抑郁情緒和行為改變。雌激素的最終效應不僅取決于雌激素本身的分泌與代謝，還與ER的表達及功能密切相關。研究ER的基因多態(tài)性與疾病間的關系有助于從基因水平闡明這些疾病的發(fā)病機制。

ERβ基因參與雌激素相關的基因效應近年來成為研究熱點。Bekku等［5］采用雙側(cè)卵巢切除的雌性大鼠，以其在強迫游泳實驗中出現(xiàn)抑郁樣行為(長時間的懸浮不動-絕望行為)作為絕經(jīng)后抑郁的動物模型。并在此抑郁模型的基礎之上，對抑郁的大鼠分別給予15～30 mg/(kg·d)的雌二醇、丙咪嗪等藥物，發(fā)現(xiàn)雌二醇、丙咪嗪、米那普倫和氟西汀都能夠明顯減少大鼠懸浮的時間，而東莨菪堿和地西泮無此作用。證明雌激素的撤退理論是產(chǎn)后，絕經(jīng)期抑郁的一個重要病因假說［4］。有文獻［6］報道ERβ存在基因多態(tài)性，其中 D14S1026、rs1256031、rs1256112、rs3020444和rs1152588與無卵癥和貪食癥存在關聯(lián)。說明ERβ基因參與了雌激素撤退引發(fā)的一系列基因效應，但對雌激素減少或撤退引發(fā)的抑郁癥狀的研究甚少。Takeo等［4］則發(fā)現(xiàn)D14S1026與更年期綜合征的抑郁癥存在關聯(lián)，51例更年期綜合征D14S1026存在14～25個高度重復CA序列，并可分成EL、SS、SL和LL4種基因型，其中SS型患者血管運動癥狀、精神癥狀和經(jīng)前期癥狀與其他幾型相比風險系數(shù)明顯增高，達7～13倍。Yu等［7］則發(fā)現(xiàn)ERβ Rsa-Ι多態(tài)性與圍絕經(jīng)期女性抑郁癥無相關性。

基因多態(tài)性存在種族、民族和地域的差異，本研究選取常州本地漢族婦女，發(fā)現(xiàn)ERβ Alu-Ι多態(tài)性可能與常州地區(qū)漢族女性產(chǎn)后抑郁癥的易感性相關，含等位基因A的基因型可能增加患抑郁癥的風險，但未發(fā)現(xiàn)含R等位基因的基因型與患產(chǎn)后抑郁癥的關系。不排除因科研設計不完善導致結(jié)果有所偏差，應全面考慮、進一步驗證ERβ基因與產(chǎn)后抑郁癥的關系。

［1］ 翟書濤.婦女精神衛(wèi)生［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1999:192.

［2］ 張淞文.產(chǎn)后抑郁癥發(fā)病因素與治療進展［J］.中國婦幼保健，2002，17(8):764.

［3］ 黃海玲，韋葉生，解繼勝，等.雌激素受體β基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥的相關研究［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2005，40(9):644-645.

［4］ Takeo C，Nnegishi E，Nakajima A，et al.Association of cytosine adenine repeat polymorphism of the estrogen receptor-beta gene with menopausal symptoms［J］.Gend Med，2005，2(2):96-105.

［5］ Bekku N，Yoshimttra H.Animal model of menpausal depressivelike state in female mice:Prolongation of immobility time in the forced swimming test following ovariectomy［J］.Psychopharmacology，2005，183(3):300-307.

［6］ Ichikawal S，Koller DL，Peacockl M，et al.Polymorphisms in the estrogen receptor beta(ESR2)gene are associated with bone mineral density in Caucasian men and women［J］.J Clin Endocrinal Metab，2001，86(1):135-139.

［7］ Yu XW，Ren YH，Li F，et al.Association between estrogen receptor beta gene Rsal polymorphism and depressive disorder in perimenopausal and menopausal women［J］.J Med Coll PLA，2005，20(2):102-105.