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金蕎麥果實(shí)中有效成分的分析

2013-12-09 08:37:12賈洪鋒孫俊秀鐘志惠邵繼榮
中國野生植物資源 2013年1期
關(guān)鍵詞:根莖蘆丁兒茶素

唐 宇,賈洪鋒,孫俊秀,鐘志惠,邵繼榮

金蕎麥(Fagopyrum cymosum)是蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum Mil1.),為多年生野生蕎麥種之一。金蕎麥富含表兒茶素、蘆丁和槲皮素等有效活性成分,具有顯著的抗癌、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移,以及消炎抗菌等重要作用[1-2],是生產(chǎn)多種重要的抗癌藥物和癌預(yù)防藥物(如復(fù)方金蕎麥顆粒、金蕎麥片、和威麥寧膠囊等)的主要原料植物[3-4],需求量較大。目前金蕎麥的利用主要是其根莖,其研究也多限于根莖,地上部分的研究和利用報(bào)道甚少。而由于金蕎麥屬于多年生類型,大量采挖其地下根莖,勢(shì)必對(duì)其資源造成極大的破壞,極不利于資源的可持續(xù)利用。為此,我們對(duì)金蕎麥的果實(shí)有效成分進(jìn)行研究,以期為合理利用金蕎麥野生資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

金蕎麥(F.cymosum)成熟果實(shí),采自于四川省涼山州普格縣五道箐鄉(xiāng)。果實(shí)脫殼后,將種子(果仁)和殼(果皮)干燥,于研缽研磨成粉狀備用。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑

表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品:中國藥品生物制品鑒定所,純度98%;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,中國藥品生物制品鑒定所,純度90.5%;槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品:中國食品藥品檢定研究院,純度96.5%。甲醇(西隴化工股份有限公司,HPLC級(jí)),乙腈(西隴化工股份有限公司,HPLC級(jí)),磷酸(西隴化工股份有限公司,AR級(jí))。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器

普析通用L9高效液相色譜儀北京普析通用儀器有限責(zé)任公司(配有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和Pgrandsil-STC -C18,150 mm ×4.6 mm ,5 μm 色譜柱);SHIMADZU,AUW220D電子天平 日本島津公司;KQ-5200E超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 表兒茶素的測(cè)定

表兒茶素的測(cè)定參照袁建平等[5]的方法。精密稱取經(jīng)研細(xì)的金蕎麥樣品1.000 0 g,放入100 mL三角瓶中,加入20 mL乙腈,用保鮮膜封口,超聲波(250 W)提取10 min,過濾后的殘?jiān)凑丈鲜龇椒ㄔ偬崛?次,合并兩次提取液,轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中定容,經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進(jìn)行分析。色譜分析條件:色譜柱:(150 mm ×4.6 mm ,5 μm);流動(dòng)相:乙腈 -0.01 mol/L 磷酸溶液(8∶92);流速:1.0 mL/min;柱溫:35.0℃;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;進(jìn)樣量:20 μL。

1.3.2 蘆丁和槲皮素的測(cè)定

蘆丁和槲皮素的測(cè)定參照張麗靜[6]和方玲芬[7]的方法。精密稱取經(jīng)研細(xì)的金蕎麥樣品1.300 0 g,放入100 mL三角瓶中,加入40 mL甲醇,用保鮮膜封口,超聲波(250 W)提取60 min,過濾后定容至50 mL,經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進(jìn)行分析。色譜分析條件:色譜柱:(150 mm ×4.6 mm ,5μm);流動(dòng)相:甲醇 -0.4% 磷酸溶液(1∶1);流速:1.0 mL/min;柱溫:30.0℃;檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm;進(jìn)樣量:10μL。

1.3.3 表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取0.020 0 g表兒茶素標(biāo)樣,用乙腈的水溶液(乙腈與水體積比=1∶9)定容至50 mL,作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液(表兒茶素400μg/mL)。以標(biāo)準(zhǔn)貯備液為基礎(chǔ),以乙腈的水溶液(乙腈與水體積比=1∶9)為溶劑,配制表兒茶素梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液,濃度從5 μg/mL到 160 μg/mL(5,10,20,40,80,120,160 μg/mL),以峰面積 Y為縱坐標(biāo),對(duì)照品質(zhì)量濃度(μg/mL)X為橫坐標(biāo)做圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,獲得其回歸方程為Y=6 071.8X-17 995,表兒茶素在5~160μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為R=0.999 6。色譜分析條件同 1.3.1。

1.3.4 蘆丁和槲皮素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取0.005 3 g蘆丁標(biāo)樣,0.005 1 g槲皮素標(biāo)樣,用甲醇定容至50 mL,作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液(蘆丁106μg/mL,槲皮素102μg/mL)。以標(biāo)準(zhǔn)貯備液為基礎(chǔ),以甲醇為溶劑,配制蘆丁和槲皮素混合梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液,蘆丁濃度從5.3μg/mL到53μg/mL(5.3,10.6,21.2,31.8,42.4,53 μg/mL),槲皮素濃度從 5.1 μg/mL 到 51 μg/mL(5.1,10.2,20.4,30.6,40.8,51 μg/mL),以峰面積 Y 為縱坐標(biāo),對(duì)照品質(zhì)量濃度(μg/mL)X為橫坐標(biāo)做圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。色譜分析條件同1.3.2。

蘆丁的回歸方程為Y=74 374X-184 393,蘆丁在5.3~53μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為 R=0.999 7;槲皮素的回歸方程為 Y=128 445X-339 760,槲皮素在5.1~51 μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)為R=0.999 2。

2 結(jié)果與分析

2.1 金蕎麥果實(shí)中表兒茶素含量

表兒茶素具有抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞增殖過程和顯著的抗氧化、清除自由基,抗致突變作用,對(duì)痢疾、傷寒、金黃色葡萄球菌等細(xì)菌也有極強(qiáng)的抑制作用[8]。是金蕎麥根莖提取物的主要成分,在地上部分的莖、葉中含量很低,在果實(shí)中則未見相關(guān)報(bào)道[9-12]。金蕎麥果實(shí)中表兒茶素的HPLC測(cè)定結(jié)果見圖1、圖2,分析結(jié)果見表1。從結(jié)果可看出,在金蕎麥果實(shí)中含有表兒茶素,但含量很低,且僅僅只在種子部分,果皮中則完全沒有。

圖1 表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 金蕎麥果實(shí)中表兒茶素色譜圖

表1 金蕎麥果實(shí)中表兒茶素含量分析結(jié)果

2.2 金蕎麥果實(shí)中蘆丁和槲皮素的含量

蘆丁具有抗氧化性、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、維持血管舒張、減少血管脆性、防止心血管疾病發(fā)生等功能[13-14]。槲皮素是蘆丁的苷元,其作用與蘆丁相似。蘆丁和槲皮素的HPLC測(cè)定結(jié)果見圖3、圖4,分析結(jié)果見表2。從圖3看,蘆丁的保留時(shí)間是2.683 min,槲皮素的保留時(shí)間是 6.183 min,蘆丁和槲皮素在此條件下能夠達(dá)到完全分離。測(cè)定結(jié)果表明,金蕎麥果實(shí)中含有較高的蘆丁含量,但種子和果皮中蘆丁含量分布不同,種子中蘆丁含量大大高于果皮,是果皮含量的2倍多。而槲皮素在果實(shí)中含量則很低,種子和果皮中均只有少量槲皮素,是蘆丁含量的幾分之一至十幾分之一(表2)。

圖3 蘆丁和槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖4 金蕎麥果實(shí)中蘆丁和槲皮素色譜圖

表2 金蕎麥果實(shí)中蘆丁和槲皮素的分析結(jié)果

3 討論

金蕎麥為多年生宿根草本植物,株高0.5~1.5 m,花期7~9月,果期8~10月。其果實(shí)為卵狀三棱形瘦果[15]。金蕎麥果實(shí)較大,在蕎麥屬各個(gè)種中,僅次于栽培蕎麥種甜蕎居第二位,千粒重可達(dá)30 g左右,每個(gè)單株約結(jié)實(shí)5~20 g。果實(shí)中蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素及維生素的含量均較豐富[16],有很高的利用價(jià)值。

我們先前的研究表明,金蕎麥果實(shí)中含有較高的總黃酮[17-19],但總黃酮中有哪些成分尚不清楚。通過本實(shí)驗(yàn)表明,金蕎麥果實(shí)中含有蘆丁、槲皮素和表兒茶素等有效成分,但其中主要以蘆丁為主,槲皮素、表兒茶素等含量甚微。我國古時(shí)即將金蕎麥根莖作為中藥入藥,近年來通過對(duì)金蕎麥大量的研究,發(fā)現(xiàn)其提取物具有抗菌、抗感染、解熱抗炎、抗癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用,而其主要成分為表兒茶素,且主要集中在地下根莖部分,地上部分的莖、葉含量則很低[9-12]。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金蕎麥的果實(shí)中也含有少量表兒茶素,值得進(jìn)一步研究。

在栽培蕎麥種中,由于苦蕎麥營養(yǎng)和藥用價(jià)值高,種子中富含蘆丁等黃酮成分,由此被廣泛開發(fā)制成多種保健產(chǎn)品[20]。從本研究結(jié)果看,金蕎麥果實(shí)中也含有較高的蘆丁含量,因此,金蕎麥果實(shí)可開發(fā)利用的潛力巨大。雖然金蕎麥果實(shí)中表兒茶素、槲皮素等含量較低,但由于果實(shí)中蛋白質(zhì)含量高、氨基酸組分全,必需氨基酸含量高,富含有效成分蘆丁和維生素、微量元素等,具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,可將其進(jìn)行綜合利用,例如果皮可用來制保健枕芯,果仁(種子)可用來生產(chǎn)茶、糕點(diǎn)、面食制品等多種保健產(chǎn)品,既能充分利用資源,又能達(dá)到可持續(xù)利用的目的。

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