唐 宇，賈洪鋒，孫俊秀，鐘志惠，邵繼榮

金蕎麥(Fagopyrum cymosum)是蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬(Fagopyrum Mil1.)，為多年生野生蕎麥種之一。金蕎麥富含表兒茶素、蘆丁和槲皮素等有效活性成分，具有顯著的抗癌、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，以及消炎抗菌等重要作用［1－2］，是生產(chǎn)多種重要的抗癌藥物和癌預(yù)防藥物(如復(fù)方金蕎麥顆粒、金蕎麥片、和威麥寧膠囊等)的主要原料植物［3－4］，需求量較大。目前金蕎麥的利用主要是其根莖，其研究也多限于根莖，地上部分的研究和利用報(bào)道甚少。而由于金蕎麥屬于多年生類型，大量采挖其地下根莖，勢(shì)必對(duì)其資源造成極大的破壞，極不利于資源的可持續(xù)利用。為此，我們對(duì)金蕎麥的果實(shí)有效成分進(jìn)行研究，以期為合理利用金蕎麥野生資源提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

金蕎麥(F.cymosum)成熟果實(shí)，采自于四川省涼山州普格縣五道箐鄉(xiāng)。果實(shí)脫殼后，將種子(果仁)和殼(果皮)干燥，于研缽研磨成粉狀備用。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑

表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品:中國藥品生物制品鑒定所，純度98%;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物制品鑒定所，純度90.5%;槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品:中國食品藥品檢定研究院，純度96.5%。甲醇(西隴化工股份有限公司，HPLC級(jí))，乙腈(西隴化工股份有限公司，HPLC級(jí))，磷酸(西隴化工股份有限公司，AR級(jí))。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器

普析通用L9高效液相色譜儀北京普析通用儀器有限責(zé)任公司(配有可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和Pgrandsil－STC －C18，150 mm ×4.6 mm ，5 μm 色譜柱);SHIMADZU，AUW220D電子天平 日本島津公司;KQ－5200E超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 表兒茶素的測(cè)定

表兒茶素的測(cè)定參照袁建平等［5］的方法。精密稱取經(jīng)研細(xì)的金蕎麥樣品1.000 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入20 mL乙腈，用保鮮膜封口，超聲波(250 W)提取10 min，過濾后的殘?jiān)凑丈鲜龇椒ㄔ偬崛?次，合并兩次提取液，轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中定容，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進(jìn)行分析。色譜分析條件:色譜柱:(150 mm ×4.6 mm ，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －0.01 mol/L 磷酸溶液(8∶92);流速:1.0 mL/min;柱溫:35.0℃;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;進(jìn)樣量:20 μL。

1.3.2 蘆丁和槲皮素的測(cè)定

蘆丁和槲皮素的測(cè)定參照張麗靜［6］和方玲芬［7］的方法。精密稱取經(jīng)研細(xì)的金蕎麥樣品1.300 0 g，放入100 mL三角瓶中，加入40 mL甲醇，用保鮮膜封口，超聲波(250 W)提取60 min，過濾后定容至50 mL，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后進(jìn)行分析。色譜分析條件:色譜柱:(150 mm ×4.6 mm ，5μm);流動(dòng)相:甲醇 －0.4% 磷酸溶液(1∶1);流速:1.0 mL/min;柱溫:30.0℃;檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm;進(jìn)樣量:10μL。

1.3.3 表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取0.020 0 g表兒茶素標(biāo)樣，用乙腈的水溶液(乙腈與水體積比=1∶9)定容至50 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液(表兒茶素400μg/mL)。以標(biāo)準(zhǔn)貯備液為基礎(chǔ)，以乙腈的水溶液(乙腈與水體積比=1∶9)為溶劑，配制表兒茶素梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度從5 μg/mL到 160 μg/mL(5，10，20，40，80，120，160 μg/mL)，以峰面積 Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度(μg/mL)X為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得其回歸方程為Y=6 071.8X－17 995，表兒茶素在5～160μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為R=0.999 6。色譜分析條件同 1.3.1。

1.3.4 蘆丁和槲皮素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取0.005 3 g蘆丁標(biāo)樣，0.005 1 g槲皮素標(biāo)樣，用甲醇定容至50 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)貯備液(蘆丁106μg/mL，槲皮素102μg/mL)。以標(biāo)準(zhǔn)貯備液為基礎(chǔ)，以甲醇為溶劑，配制蘆丁和槲皮素混合梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，蘆丁濃度從5.3μg/mL到53μg/mL(5.3，10.6，21.2，31.8，42.4，53 μg/mL)，槲皮素濃度從 5.1 μg/mL 到 51 μg/mL(5.1，10.2，20.4，30.6，40.8，51 μg/mL)，以峰面積 Y 為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度(μg/mL)X為橫坐標(biāo)做圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。色譜分析條件同1.3.2。

蘆丁的回歸方程為Y=74 374X－184 393，蘆丁在5.3～53μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為 R=0.999 7;槲皮素的回歸方程為 Y=128 445X－339 760，槲皮素在5.1～51 μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為R=0.999 2。

2 結(jié)果與分析

2.1 金蕎麥果實(shí)中表兒茶素含量

表兒茶素具有抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤細(xì)胞增殖過程和顯著的抗氧化、清除自由基，抗致突變作用，對(duì)痢疾、傷寒、金黃色葡萄球菌等細(xì)菌也有極強(qiáng)的抑制作用［8］。是金蕎麥根莖提取物的主要成分，在地上部分的莖、葉中含量很低，在果實(shí)中則未見相關(guān)報(bào)道［9－12］。金蕎麥果實(shí)中表兒茶素的HPLC測(cè)定結(jié)果見圖1、圖2，分析結(jié)果見表1。從結(jié)果可看出，在金蕎麥果實(shí)中含有表兒茶素，但含量很低，且僅僅只在種子部分，果皮中則完全沒有。

圖1 表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 金蕎麥果實(shí)中表兒茶素色譜圖

表1 金蕎麥果實(shí)中表兒茶素含量分析結(jié)果

2.2 金蕎麥果實(shí)中蘆丁和槲皮素的含量

蘆丁具有抗氧化性、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、維持血管舒張、減少血管脆性、防止心血管疾病發(fā)生等功能［13－14］。槲皮素是蘆丁的苷元，其作用與蘆丁相似。蘆丁和槲皮素的HPLC測(cè)定結(jié)果見圖3、圖4，分析結(jié)果見表2。從圖3看，蘆丁的保留時(shí)間是2.683 min，槲皮素的保留時(shí)間是 6.183 min，蘆丁和槲皮素在此條件下能夠達(dá)到完全分離。測(cè)定結(jié)果表明，金蕎麥果實(shí)中含有較高的蘆丁含量，但種子和果皮中蘆丁含量分布不同，種子中蘆丁含量大大高于果皮，是果皮含量的2倍多。而槲皮素在果實(shí)中含量則很低，種子和果皮中均只有少量槲皮素，是蘆丁含量的幾分之一至十幾分之一(表2)。

圖3 蘆丁和槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖4 金蕎麥果實(shí)中蘆丁和槲皮素色譜圖

表2 金蕎麥果實(shí)中蘆丁和槲皮素的分析結(jié)果

3 討論

金蕎麥為多年生宿根草本植物，株高0.5～1.5 m，花期7～9月，果期8～10月。其果實(shí)為卵狀三棱形瘦果［15］。金蕎麥果實(shí)較大，在蕎麥屬各個(gè)種中，僅次于栽培蕎麥種甜蕎居第二位，千粒重可達(dá)30 g左右，每個(gè)單株約結(jié)實(shí)5～20 g。果實(shí)中蛋白質(zhì)、脂肪、微量元素及維生素的含量均較豐富［16］，有很高的利用價(jià)值。

我們先前的研究表明，金蕎麥果實(shí)中含有較高的總黃酮［17－19］，但總黃酮中有哪些成分尚不清楚。通過本實(shí)驗(yàn)表明，金蕎麥果實(shí)中含有蘆丁、槲皮素和表兒茶素等有效成分，但其中主要以蘆丁為主，槲皮素、表兒茶素等含量甚微。我國古時(shí)即將金蕎麥根莖作為中藥入藥，近年來通過對(duì)金蕎麥大量的研究，發(fā)現(xiàn)其提取物具有抗菌、抗感染、解熱抗炎、抗癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用，而其主要成分為表兒茶素，且主要集中在地下根莖部分，地上部分的莖、葉含量則很低［9－12］。本次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金蕎麥的果實(shí)中也含有少量表兒茶素，值得進(jìn)一步研究。

在栽培蕎麥種中，由于苦蕎麥營養(yǎng)和藥用價(jià)值高，種子中富含蘆丁等黃酮成分，由此被廣泛開發(fā)制成多種保健產(chǎn)品［20］。從本研究結(jié)果看，金蕎麥果實(shí)中也含有較高的蘆丁含量，因此，金蕎麥果實(shí)可開發(fā)利用的潛力巨大。雖然金蕎麥果實(shí)中表兒茶素、槲皮素等含量較低，但由于果實(shí)中蛋白質(zhì)含量高、氨基酸組分全，必需氨基酸含量高，富含有效成分蘆丁和維生素、微量元素等，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，可將其進(jìn)行綜合利用，例如果皮可用來制保健枕芯，果仁(種子)可用來生產(chǎn)茶、糕點(diǎn)、面食制品等多種保健產(chǎn)品，既能充分利用資源，又能達(dá)到可持續(xù)利用的目的。

［1］ 艾群，王斌，王國清.金蕎麥制劑的抑菌研究［J］.黑龍江醫(yī)學(xué)，2002，26(9):666.

［2］ CHEN Pui Kwong.金蕎麥體外抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2003，1(2):128 －131.

［3］ 張?chǎng)?，李興從，劉玉青，等.威麥寧的酚性成分［J］.云南植物研究，1994，16(4):354 －356.

［4］ 何顯忠.金蕎麥的藥理作用和臨床應(yīng)用［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2001，12(4):316 －317.

［5］ 袁建平，呂艷，李麗美.HPLC法測(cè)定金蕎麥提取物中原花青素B2、表兒茶素［J］.中成藥，2011，33(4):708 －710.

［6］ 張麗靜，易新萍，李革，等.HPLC法測(cè)定新疆貫葉連翹中蘆丁及槲皮素的含量［J］.新疆大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2007，24(1):70－72.

［7］ 方玲芬.HPLC法測(cè)定貴州苦蕎麥種皮中槲皮素含量［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，31(4):71 －73.

［8］ 陳志鴻，羅招陽.表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)抗腫瘤研究進(jìn)展［J］.中國腫瘤，2006，15(7):453 －456.

［9］ 劉永隆，房其年，張秀琴.金蕎麥有效成分的研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1983，18(7):545 －547.

［10］ 姚榮成，黃梅芬，吳友仁，等.云南產(chǎn)金蕎麥根莖抗腫瘤有效部位的化學(xué)研究［J］.云南植物研究，1989，11(2):215 －218.

［11］ 吳清、粱國魯.金蕎麥野生資源的開發(fā)與利用［J］.中國野生植物資源，2001，20(2):27 －28.

［12］ 劉光德，李名揚(yáng)，祝欽瀧，等.資源植物野生金蕎麥的研究進(jìn)展［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22(10):380 －389.

［13］ Watanabe M，Ohshiga Y，Tsushida T.Antioxidant compounds from buckwheat(Fagopyrum esculentum Moench)hulls［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，1997，45(4):1039 －1044.

［14］ 鐘耕.苦蕎麥粉乙醇提取物抗氧化性及蘆丁受熱變化的研究［J］.中國糧油學(xué)報(bào)，2004，19(3):131 －134.

［15］ 李安仁，高作經(jīng)，毛祖美，等.中國植物志:第25卷第1分冊(cè)［M］.北京:科學(xué)出版社，1998:111－112.

［16］ 張政，王轉(zhuǎn)花，林汝法，等.金蕎麥籽粒營養(yǎng)成分分析［J］.營養(yǎng)學(xué)報(bào)，1999，21(4):480 －482.

［17］ 唐宇，彭德川，孫俊秀，等.金蕎麥籽粒中總黃酮提取工藝研究［J］.食品和發(fā)酵科技，2011，47(6):54 －57

［18］ Peng Dechuan，Tang Yu，Sun Junxiu，et al.Comparison of flavonoids content between tartary buckwheat and several wild buckwheats［C］∥Proceedings of International Forum on Tartary Buckwheat Industrial Economy.Beijing:China Agricultural Science＆Technology Press，2006:137 －142.

［19］ 唐宇，孫俊秀，彭德川，等.野生蕎麥營養(yǎng)和藥用成分的研究［J］.四川烹飪高等專科學(xué)校學(xué)報(bào)，2011，(4):28 －31.

［20］ Lin Rufa，Shan Fang，Bian Junsheng，et al.The practice of tartary buckwheat industrialization［C］∥Proceedings of International Forum on Tartary Buckwheat Industrial Economy.Beijing:China Agricultural Science ＆ Technology Press，2006:5－9.