律蘭鳳

【摘 要】目的：采用離子對(duì)色譜法測(cè)定注射用頭孢西丁鈉的含量，為完善注射用頭孢西丁鈉質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法：采用離子對(duì)色譜法，色譜柱為AgilentZORBAX80AExtendC18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相為5mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液乙腈（體積比750∶250）；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；流速為1mL·min-1。結(jié)果：頭孢西丁的質(zhì)量在0.310 1～3.1010μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.99998；平均回收率為100.2%，RSD為1.05%。結(jié)論：本文方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為完善注射用頭孢西丁鈉含量測(cè)定方法提供了依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】頭孢西丁鈉；離子對(duì)色譜法；含量測(cè)定

頭孢西丁為β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，由美國(guó)默沙東公司開(kāi)發(fā)并于1974年上市。頭孢西丁抗菌作用和抗菌譜同第二代頭孢菌素，但對(duì)厭氧菌特別是脆弱擬桿菌的作用更強(qiáng)，對(duì)β內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定。臨床上用于腹膜炎和其他腹腔內(nèi)、盆腔內(nèi)、婦科感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎、尿路感染（包括淋?。?、呼吸道感染、骨關(guān)節(jié)軟組織感染。采用注射用頭孢西丁鈉的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)文獻(xiàn)方法測(cè)定頭孢西丁的含量，結(jié)果頭孢西丁的理論塔板數(shù)較低，色譜峰拖尾較嚴(yán)重。本文采用離子對(duì)色譜（IPC）法測(cè)定頭孢西丁的含量，能較大程度地提高頭孢西丁的理論塔板數(shù)，改善色譜峰拖尾現(xiàn)象，且操作簡(jiǎn)便易行，結(jié)果重現(xiàn)性好，專(zhuān)屬性強(qiáng)。

1.儀器與試藥

島津LC2010A/C型高效液相色譜儀，ClassVP色譜工作站，METTLER TOLEDO十萬(wàn)分之一電子天平。

乙腈為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水，磷酸、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、10%四丁基氫氧化銨溶液為分析純。頭孢西丁對(duì)照品（批號(hào)130572 200701，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95.3%，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所），注射用頭孢西丁鈉（康田制藥（中山）有限公司，批號(hào)0711011、0711012、0711013）。

2.測(cè)定方法的建立

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX 80A Extend?C18柱（150mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：5mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液（取10%四丁基氫氧化銨溶液13.2mL，加水900mL后，用1mol·L-1磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，再用水稀釋至1000mL）乙腈（體積比750∶250）；檢測(cè)波長(zhǎng)254nm；流速為1mL·min-1；進(jìn)樣量5μL。

2.2供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于頭孢西丁15mg）置50 mL量瓶中，用磷酸鹽緩沖液（稱(chēng)取磷酸二氫鉀1.0g和磷酸氫二鈉1.8 g，加水900mL使溶解，用磷酸或10mol·L-1氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.0，再用水稀釋至1000mL，搖勻）溶解并稀釋至刻度，制成每1mL中約含頭孢西丁0.3mg的溶液，作為供試品溶液。

2.3對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

取頭孢西丁對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加磷酸鹽緩沖液制成0.6mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.4線性關(guān)系

分別精密量取質(zhì)量濃度為0.6202mg·mL-1頭孢西丁對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2、5、6、8mL，加磷酸鹽緩沖液稀釋成質(zhì)量濃度為0.06202～0.6202 mg·mL-1的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以質(zhì)量（m）為橫坐標(biāo)，各自峰面積（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A=1.277×106m+9.774×103，r=0.9999（n=6）

結(jié)果表明頭孢西丁的質(zhì)量在0.3101～3.1010μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為0.3mg·mL-1的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得頭孢西丁峰面積的RSD為0.57%，表明試驗(yàn)精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品溶液于0、1、2、3、4、5、6 h內(nèi)按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得頭孢西丁峰面積的RSD為0.98%，表明供試品溶液在6h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品，分別按“2.2”項(xiàng)下的方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，頭孢西丁的平均含量為94.26%，RSD為0.29%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的樣品5份，按“2.2”項(xiàng)下的方法制成每1mL中約含頭孢西丁1mg的供試品溶液，分別精密吸取3mL供試品溶液置5個(gè)20mL的容量瓶中，再分別精密加入已知濃度的對(duì)照品溶液10mL，加磷酸鹽緩沖液溶解并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果頭孢西丁的平均回收率為100.4%，RSD為1.05%。

2.9樣品測(cè)定

取3批樣品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算頭孢西丁的含量。結(jié)果3批樣品中頭孢西丁的平均百分含量分別為94.43%，94.71%，93.59%。

3.討論

3.1檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

參照注射用頭孢西丁鈉的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，選擇254nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2流動(dòng)相中氫氧化四丁基銨濃度的選擇

以水乙腈（體積比750∶250）為流動(dòng)相，分別考察流動(dòng)相中氫氧化四丁基銨濃度依次為0、2.5、5、10及20mmol·L-1時(shí)對(duì)頭孢西丁色譜行為的影響。結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相中氫氧化四丁基銨濃度為5mmol·L-1時(shí)，頭孢西丁的理論塔板數(shù)和拖尾因子最理想，故氫氧化四丁基銨濃度采用5mmol·L-1。

3.3流動(dòng)相的pH值選擇

以5mmol·L-1氫氧化四丁基銨溶液乙腈（體積比750∶250）為流動(dòng)相，改變其pH值，考察pH值對(duì)頭孢西丁的色譜行為的影響。結(jié)果表明，在pH4.0時(shí)頭孢西丁峰的理論塔板數(shù)最大及拖尾因子最小，故流動(dòng)相的pH值選擇4.0。

3.4方法耐用性考察

分別對(duì)不同廠牌型號(hào)的色譜柱進(jìn)行考察，并與國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件進(jìn)行比較。由結(jié)果可見(jiàn)，采用國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的流動(dòng)相試驗(yàn)達(dá)不到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的要求（理論塔板數(shù)按頭孢西丁峰計(jì)算應(yīng)不低于2 800，拖尾因子應(yīng)不大于1.5）；只有使用新的色譜柱才能達(dá)到要求；用改進(jìn)后的方法測(cè)定，使用不同的色譜柱和不同的高效液相色譜儀均能達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，表明本文方法耐用性、重現(xiàn)性良好。 [科]

【參考文獻(xiàn)】

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