汪洋，周亞濱

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

蘇木(Lignum Sappan)又名蘇方、蘇方木、紅柴、赤木、棕木，為豆科云實(shí)屬植物蘇木(Caesalpinia sappan L．)的干燥心材。主要產(chǎn)于緬甸、印度、馬來半島、越南及斯里蘭卡，我國(guó)主要分布于貴州、云南、四川、福建、兩廣及臺(tái)灣等地［1］。

大量研究已經(jīng)證實(shí)，蘇木具有免疫抑制、抗氧化、抗炎及抗腫瘤作用。蘇木乙酸乙酯提取物可以抑制大鼠移植心臟心肌組織中穿孔素(PFP)、顆粒酶 B(GrB)、FasL的表達(dá)，調(diào)節(jié)CD4+/CD8+值，抑制心肌細(xì)胞的過度凋亡［2－5］。本實(shí)驗(yàn)采用不同濃度蘇木乙酸乙酯提取物作用于健康Wistar大鼠，觀察其對(duì)健康大鼠外周血細(xì)胞因子的影響。

1 材料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量150～200g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1．1．2 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑

蘇木購(gòu)自黑龍江省藥材公司。將蘇木粗粉(40目)用75%乙醇浸泡，加熱至85℃，連續(xù)回流提取2h，過濾，反復(fù)2次，將濾液混合，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收后，于真空干燥箱中烘干，制成乙醇提取干粉。將乙醇提取物加入雙蒸水混懸，再用乙酸乙酯萃取，回收得到乙酸乙酯提取物。大鼠 IL－1、IL－2、IL－12 及 IFN－γ ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自晶美生物。

1．1．3 實(shí)驗(yàn)儀器

TCS－500型電子秤(武漢電子稱重儀器公司);CR21型低溫高速離心機(jī)(日本日立公司);電熱恒溫水浴箱(上海醫(yī)療儀器廠);低溫冰箱MDF－U50V(日本三洋公司產(chǎn)品);電子分析天平［梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司］。

1．2 實(shí)驗(yàn)方法

1．2．1 動(dòng)物分組

健康Wistar大鼠32只，隨機(jī)分為空白組、高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組8只。

1．2．2 動(dòng)物給藥

高、中、低劑量組分別按照 2．3g/kg/d、1．15g/kg/d、0．58g/kg/d給予蘇木乙酸乙酯提取物橄欖油溶液灌胃;空白組給予同體積橄欖油灌胃，各組連續(xù)灌胃7天。

1．2．3 取材

各組連續(xù)灌胃7天后，眼球取血1ml，以 5000r/min，4℃離心5min后留取血清備用。

1．2．4 檢測(cè)指標(biāo)

采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清IL－1、IL－2、IL－12及IFN－γ含量的變化，具體流程參照ELISA試劑說明書操作。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16．0 統(tǒng)計(jì)分析軟件，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，多組間比較用F檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

蘇木高、中、低劑量組及空白組細(xì)胞因子的表達(dá)見表1。

表1 蘇木高、中、低劑量組及空白組細(xì)胞因子的表達(dá)(±s，n=8)

表1 蘇木高、中、低劑量組及空白組細(xì)胞因子的表達(dá)(±s，n=8)

注:與空白組比較，*P ＜0．05;與高劑量組比較，#P ＜0．05;與中劑量組比較，▲P ＜0．05;與低劑量組比較，●P ＜0．05。

空白組 69．300 ±25．916 169．913 ±17．012#▲ 64．838 ±8．085#▲● 136．400 ±29．822#▲高劑量組 66．075±20．699 79．350±15．994＊▲● 28．925±4．258＊▲● 76．588±8．605＊●中劑量組 66．131 ±20．108 118．913 ±18．093*# 40．438 ±8．287*# 86．738 ±10．493*低劑量組 71．488 ±28．125 153．425 ±36．435# 48．513 ±6．732*# 121．038 ±23．159#▲

由表1可知，蘇木乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組與空白組IL－1的表達(dá)無明顯差異(P＞0．05)。蘇木乙酸乙酯提取物高、中劑量組IL－2的表達(dá)均降低，與空白組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且高劑量組IL－2的表達(dá)明顯低于中劑量組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，蘇木乙酸乙酯提取物低劑量組IL－2的表達(dá)與空白組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

蘇木乙酸乙酯提取物高、中、低劑量組IL－12的表達(dá)均降低，與空白組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且高劑量組表達(dá)明顯低于中、低劑量組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，中、低劑量組間沒有明顯差異(P ＞0．05)。

蘇木乙酸乙酯提取物高、中劑量組IFN－γ的表達(dá)均降低，且與空白組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但高、中劑量組之間沒有明顯差異(P＞0.05)，蘇木乙酸乙酯提取物低劑量組IFN－γ的表達(dá)與空白組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。

3 討論

白細(xì)胞介素，簡(jiǎn)稱白介素，指在白細(xì)胞或免疫細(xì)胞間相互作用的淋巴因子，它與血細(xì)胞生長(zhǎng)因子同屬細(xì)胞因子。兩者相互協(xié)調(diào)，作用共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能。白介素在激活、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，介導(dǎo)T、B細(xì)胞活化、增殖與分化及在炎癥反應(yīng)中起重要作用。

IL－1 是多種類型細(xì)胞如單核細(xì)胞等在免疫應(yīng)答時(shí)產(chǎn)生的細(xì)胞因子，血小板生長(zhǎng)因子能刺激集落刺激因子等細(xì)胞因子的產(chǎn)生并且能夠促進(jìn)T細(xì)胞產(chǎn)生IL－2，在免疫應(yīng)答和組織修復(fù)中起作用。IL－2主要由活化的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生，是所有T細(xì)胞亞群的生長(zhǎng)因子，并能夠促進(jìn)B細(xì)胞增殖，是調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子［6］。IL－12是一種異源二聚體分子，主要由單核/巨噬細(xì)胞及B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，在腫瘤、感染以及自體免疫性疾病中起重要作用。IFN是具有廣泛生物活性的一種蛋白質(zhì)，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能、抗病毒等多種作用。IFN可調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，是機(jī)體防御系統(tǒng)的重要組成部分。

本研究結(jié)果顯示，蘇木乙酸乙酯提取物可以抑制大鼠外周血IL－2、IL－12、TNF－γ的表達(dá)，且與藥物濃度有關(guān)，高、中、低劑量組均可以抑制IL－12、TNF－γ的表達(dá)，且高劑量組作用明顯強(qiáng)于中、低劑量組。高、中劑量組均可以抑制IL－2的表達(dá)，且高劑量組作用強(qiáng)于中劑量組，低劑量組對(duì)IL－2的表達(dá)沒有明顯的抑制作用。由此提示，蘇木乙酸乙酯提取物具有一定的免疫抑制作用，且作用強(qiáng)度與藥物劑量有關(guān)，其作用機(jī)理可能為:1)通過抑制IL－2、TNF－γ的表達(dá)，抑制單核巨噬細(xì)胞的活化，使單核巨噬細(xì)胞MHCⅠ類分子、Ⅱ類分子和共刺激分子的表達(dá)水平顯著降低，從而抑制單核巨噬細(xì)胞的抗原提升作用。2)通過抑制IL－12的表達(dá)，使NK細(xì)胞分泌IFN－γ水平降低，從而抑制Th0 向Th1 細(xì)胞方向分化，抑制T細(xì)胞的增殖和巨噬細(xì)胞的活化，從而抑制T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。3)通過降低IL－2、IL－12的表達(dá)，抑制NK細(xì)胞的活化，從而減弱其細(xì)胞毒作用。

［1］ 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編寫委員會(huì)．中國(guó)植物志［M］．北京:科學(xué)出版社，1986:105．

［2］ 周亞濱．蘇木對(duì)大鼠同種異位心臟移植心肌顆粒酶B mRNA表達(dá)的影響［J］．上海免疫學(xué)雜志，2002，22(2):110－112．

［3］ 周亞濱．蘇木對(duì)同種異位心臟移植大鼠心肌穿孔素mRNA表達(dá)的影響［J］．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23(5):370－372．

［4］ 于波．蘇木提取物對(duì)心臟移植大鼠T淋巴細(xì)胞亞群的免疫抑制和對(duì)心肌的保護(hù)作用［J］．中國(guó)地方病學(xué)雜志，2004，23(6):539－542．

［5］ 姜斌，周亞濱．蘇木乙酸乙酯提取物對(duì)大鼠心臟移植慢性排斥模型血清IL－10 水平的影響［J］．中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2012，40(5):30－31．

［6］ 覃仕化，汪悅．痹痛靈顆粒對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠血清及滑膜組織勻漿中 IL－2的影響［J］．西部中醫(yī)藥，2011，24(11):26－27．