潘曉賦，劉 倩，王曉愛，楊君興 ，陳小勇，李再云，李 列

1. 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所 遺傳資源與進(jìn)化國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650223

2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué)，北京 1000493

3. 西疇縣經(jīng)濟(jì)商務(wù)局，云南 西疇 663500

胚胎和仔魚畸形是水產(chǎn)業(yè)最為嚴(yán)重的問題之一,制定魚類精卵質(zhì)量評(píng)價(jià)體系,降低胚胎發(fā)育及仔稚魚外部畸形是以放流為目的的魚苗生產(chǎn)質(zhì)量控制和研究的重要環(huán)節(jié)（Vay et al,2007；Yang et al,2013）。在傳統(tǒng)漁業(yè)生產(chǎn)中, 仔稚魚質(zhì)量關(guān)乎水產(chǎn)品數(shù)量和質(zhì)量, 在長(zhǎng)期實(shí)踐中雖已發(fā)展出了眾多提高其質(zhì)量的技術(shù), 但效果不佳, 畸形率仍居高不下,影響其放流后生存能力（Tsukamoto et al, 1997）。造成畸形的原因很多, 如環(huán)境（溫度、光照和鹽度等）、營(yíng)養(yǎng)和遺傳等因素（Bolla & Holmefjord, 1988;Haddy & Pankhurst, 2000）。由于魚卵孵化效果直接影響仔稚魚畸形率, 且魚卵人工孵化需花費(fèi)大量人力物力, 因此, 客觀評(píng)價(jià)魚卵質(zhì)量并淘汰低質(zhì)量魚卵在水產(chǎn)苗種生產(chǎn)實(shí)踐中十分重要。魚類胚胎發(fā)育可用于衡量親魚培育效果及評(píng)價(jià)仔稚魚質(zhì)量, 且能為其他野生近緣種魚類的快速人工擴(kuò)繁提供技術(shù)參考。

軟鰭新光唇魚（Neolissochilus benasi）, 隸屬鯉科（Cyprinidae）鲃亞科（Barbinae）新光唇魚屬（Neolissochilus）。歷史上, 軟鰭新光唇魚是元江流域漁民的主要捕獲對(duì)象, 主要分布于云南的河口、江城、西疇及元江等地, 境外分布于越南（Chu & Chen,1989）。近年, 由于捕撈強(qiáng)度大、梯級(jí)電站開發(fā)和保護(hù)意識(shí)薄弱等原因（Yang et al, 2010）, 軟鰭新光唇魚種群衰退嚴(yán)重, 其種群在李仙江流域已屬偶見, 目前,僅在云南文山州西疇縣保存有較大種群（Yang et al,2011）。有關(guān)軟鰭新光唇魚的研究主要集中在其分類地位（Chen & Yang, 2003）和精子超低溫冷凍（Wang et al, 2012）, 在人工繁殖、胚胎發(fā)育和仔魚畸形等方面尚未有提及。本研究在軟鰭新光唇魚人工繁殖成功的基礎(chǔ)上, 觀察和描述其胚胎發(fā)育過程, 為后續(xù)器官系統(tǒng)發(fā)生和毒理學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 親魚來源與日常管理

2007年3月—5月, 由云南省江城縣曲水鎮(zhèn)引種軟鰭新光唇魚126尾, 飼養(yǎng)于中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所珍稀魚類保育研究基地（海拔：2 008 m;N25°02′37.2″, E102°55′24.3″）。2008 年 3 月—2009年12月, 由云南省江城縣曲水鎮(zhèn)再次引種軟鰭新光唇魚495尾, 飼養(yǎng)于江城縣附近魚池（海拔1 134 m,N22°35′18.6″, E101°50′57.9″）, 并于 2010 年 5 月運(yùn)回中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所珍稀魚類保育研究基地, 共存活459尾。2008年12月—2009年5月,由云南省西疇縣雞街鎮(zhèn)引種軟鰭新光唇魚2 126尾,飼養(yǎng)于西疇縣珍稀魚類養(yǎng)殖基地（海拔 1 091 m,N23°29′21.9″, E104°40′28.3″）。

養(yǎng)殖池塘面積為100～200 m2、水深為1.0～1.5 m,水溫為16～25℃, 養(yǎng)殖密度＜3 kg/m3, 雌雄比為1:1.5。每年 10月—翌年 3月光周期為光照:黑暗為 10 h:14 h, 每年 3月—9月光周期為光照:黑暗為 12 h：12 h。每隔3 d注入一次新水, 每次增加池水15～20 cm。仔稚魚孵出后8～25 d餌料為蛋黃漿和蝦漿等, 每日投喂 4次, 具體投喂量為每千尾用蛋黃一個(gè), 鮮蝦50 g研磨成漿全池潑灑。25 d以后投喂輪蟲, 其后, 餌料主要以111鯉種魚飼料和蛋白含量為40%的粉狀飼料為主, 輔以活餌、添加礦物質(zhì)和維生素等, 上、下午各投喂一次, 日糧為親魚體重的～3%, 每次投喂量以在15～30 min內(nèi)吃完為度。繁殖前1個(gè)月營(yíng)造流水環(huán)境, 促進(jìn)親魚[體長(zhǎng)（182.5±28.1）mm, 體重（95.51±20.1）g]性腺成熟。

1.2 人工繁殖

參照鯉（Cyprinus carpio）人工繁殖方法（Horváth et al, 2002）, 0.9%生理鹽水稀釋混合催產(chǎn)素[促黃體素釋放激素 A2（LHRH-A2, 寧波第二激素廠）2.0 μg/kg及馬來酸地歐酮（DOM, 寧波第二激素廠）1.0 mg/kg], 肌肉注射, 雄魚注射劑量減半。注射～24 h施行干法人工授精, 然后, 魚卵及時(shí)用霉菌凈（重慶富爾家動(dòng)物藥業(yè)有限公司）消毒15 min,孵化水溫控制在 20 ℃。人工授精前, 光學(xué)解剖鏡（Zeiss Stemi 2000-C, Germany）/顯微鏡（Olympus CX21）下觀察卵子/精子情況。

1.3 胚胎發(fā)育觀察

解剖鏡下, 精卵結(jié)合—原腸胚早期, 每 15 min觀察一次; 原腸胚早期—8體節(jié)期, 每30 min觀察一次; 8體節(jié)期—27體節(jié)期, 每1 h觀察一次; 27體節(jié)期—魚苗孵化, 每2 h觀察一次; 魚苗孵化后, 每12 h觀察一次（Zhang & Zhao, 2000; Xing et al,2011）。每次觀察取樣 15粒, 發(fā)育時(shí)間以＞50%受精卵到達(dá)該期的時(shí)間為準(zhǔn)。同時(shí), 數(shù)碼相機(jī)（Nikon Coolpix 955, Japan）拍攝發(fā)育時(shí)相, 胚胎發(fā)育時(shí)相及名稱依據(jù)Ma et al（2008）。

1.4 數(shù)據(jù)收集

核偏位率（nucleus deviation rate, ND）為魚卵放置于 10%醋酸溶液后, 發(fā)生核偏離的魚卵數(shù)量占所測(cè)魚卵總數(shù)的百分比（Pan et al, 2011）。胚胎存活率（rate of embryo survival）為胚胎發(fā)育到某一發(fā)育時(shí)相時(shí)存活的胚胎數(shù)量與所觀察胚胎總量的比值。孵化率（hatching success）為出膜仔魚數(shù)量與受精卵總量的比值。生存率（survival success）為仔魚出膜時(shí)的存活率, 即出膜仔魚數(shù)量與魚卵總量的比值（Yin,1995）。胚胎畸形率（rate of embryonic malformations）為魚卵從受精到出膜間所產(chǎn)生的畸形胚胎數(shù)量與受精卵總量的比值, 另外, 詳細(xì)記錄畸形存在部位（如口、脊椎、胸腔及眼部等）及其他表現(xiàn)形式（如卵黃囊吸收異常及雙頭等）, 統(tǒng)計(jì)其數(shù)量并計(jì)算其占畸形胚胎總量的百分比。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均以mean±SD表示, 單因素方差分析和回歸分析處理數(shù)據(jù), 所有數(shù)據(jù)處理在SigmaPlot10.0中進(jìn)行, 顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié) 果

2.1 卵子和精子特性

軟鰭新光唇魚產(chǎn)卵量為 1 986～5 854 粒/尾,卵徑為 2.2～2.8 mm, 卵膜透明, 卵黃球較大, 呈橙黃色。受精卵遇水卵膜逐漸膨脹, 卵徑可達(dá)2.5～3.2 mm, 為半浮性卵, 無粘性, 卵粒比重大于水,在靜水中沉底發(fā)育, 但在流水中可以漂浮不沉底。

軟鰭新光唇魚精子密度為（16.32±2.89）×109個(gè)/mL, 鮮精平均活力為（60.6±3.2）%, 平均壽命為（70.2±5.3）s。正常情況下, 精液為乳白色, 精子密度越大, 乳白色愈濃, 密度越小, 顏色越淡。

2.2 人工繁殖情況

共催產(chǎn)60尾雌魚和100尾雄魚, 其中, 雌魚成功47尾（78.3%）, 雄魚成功92尾（92.0%）。平均核偏位率為73.2%, 平均孵化率為32.4%, 共孵化仔魚4.35萬尾。各批次的催產(chǎn)、產(chǎn)卵及各時(shí)期胚胎存活率見表1。

表1 2009—2011年軟鰭新光唇魚人工繁殖結(jié)果Table 1 Artificial propagation of Neolissochilus benasi from 2009 to 2011

2.3 胚胎發(fā)育

水溫 20 ℃條件下, 軟鰭新光唇魚魚卵從受精到魚苗孵出需～120 h（表2）, 胚胎發(fā)育過程分為受精卵時(shí)期、分裂期、囊胚期、原腸胚期、體節(jié)期和孵化期等6個(gè)時(shí)期。

2.3.1 受精卵期

受精后～30 min, 原生質(zhì)向動(dòng)物極集中, 動(dòng)物極頂端顏色逐漸變淺, 在卵黃上方形成明顯突起, 即胚盤, 胚盤不透明, 占胚胎的很小比例 （圖1A）。

2.3.2 分裂期

軟鰭新光唇魚卵子的卵裂屬盤狀卵裂或不完全卵裂, 僅在胚盤上進(jìn)行。受精后1 h, 胚盤出現(xiàn)第1次分裂, 為經(jīng)裂, 在胚盤頂部中央出現(xiàn)一縱溝,把胚盤分裂成兩個(gè)均等的細(xì)胞（圖 1B）; 受精后90 min, 進(jìn)行第2次分裂, 新分裂溝與第1次分裂溝垂直, 為縱裂, 形成四個(gè)大小、形態(tài)相似的細(xì)胞（圖1C）; 受精后2 h, 進(jìn)行第3次分裂, 在第1次分裂面的兩側(cè)各出現(xiàn)一條與之平行、而與第 2次分裂溝相垂直的分裂溝, 最后形成8個(gè)等大的細(xì)胞, 規(guī)則而對(duì)稱地排成兩排（圖1D）; 受精后2 h 30 min, 發(fā)生第4次分裂, 在平行于第2次分裂面的兩側(cè)各出現(xiàn)一條分裂溝, 形成4排、每排4個(gè), 共16個(gè)細(xì)胞, 原生質(zhì)網(wǎng)密集（圖1E）; 受精后3 h, 開始第5次分裂,這次分裂完成后形成4排、每排八個(gè), 共32個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞出現(xiàn)差異, 邊緣細(xì)胞略大, 分裂球最大寬度和卵黃直徑比較接近; 受精后3 h 30 min, 發(fā)生第6次分裂,形成64個(gè)細(xì)胞（圖1F）, 從此, 分裂球越分越小, 細(xì)胞數(shù)量越來越多, 細(xì)胞團(tuán)呈方形隆起。

2.3.3 囊胚期

卵裂繼續(xù)進(jìn)行, 細(xì)胞愈分愈小, 數(shù)目不斷增加,受精后4 h, 形成128個(gè)細(xì)胞; 受精后4 h 50 min, 形成256個(gè)細(xì)胞（圖1H）; 受精后5 h 40 min, 形成512個(gè)細(xì)胞, 此時(shí), 分裂失去同步性, 中央囊胚外移;受精后6 h 30 min, 卵黃合胞體層形成（圖1I）; 受精后7 h 20 min, 胚盤處細(xì)胞團(tuán)高高隆起, 呈高帽狀,進(jìn)入囊胚早期（圖1J）; 受精后8 h 10 min, 進(jìn)入囊胚中期, 胚細(xì)胞團(tuán)高度有所下降; 受精后9 h, 囊胚晚期開始, 胚細(xì)胞團(tuán)進(jìn)一步下降, 囊胚變低變薄。整個(gè)囊胚期持續(xù)時(shí)間為～7 h 5 min。

2.3.4 原腸胚期

受精后12 h 5 min, 進(jìn)入原腸早期（圖1K）, 囊胚細(xì)胞繼續(xù)下包, 且由于分裂球的下包、內(nèi)卷運(yùn)動(dòng)而在胚盤邊緣形成胚環(huán)（圖1L）; 受精后12 h 35 min, 進(jìn)入原腸中期, 卵黃 50%被胚盤外包, 可見胚盾雛形;受精后15 h 15 min, 分裂球細(xì)胞下包達(dá)卵黃體的3/4,胚盾繼續(xù)延伸, 進(jìn)入原腸末期（圖1M）; 受精后19 h,背緣前端加厚膨大成為腦泡原基, 背唇、腹唇明顯（圖1N）。整個(gè)原腸期持續(xù)時(shí)間為～6 h 55 min。

2.3.5 體節(jié)期

圖1 軟鰭新光唇魚胚胎發(fā)育（水溫20 ℃）Figure 1 Embryonic development of Neolissochilus benasi at 20 ℃

受精后19 h 30 min, 胚胎發(fā)育進(jìn)入體節(jié)期, 胚盾逐漸增厚（圖1O）, 形成神經(jīng)板雛形, 胚盤繼續(xù)下包＞5/6的卵黃, 形成卵黃栓（圖 1P）。受精后 21 h 15 min, 胚孔封閉（圖1Q）; 受精后21 h 30 min, 胚體中部出現(xiàn)五對(duì)肌節(jié)（圖1R）; 受精后22 h 30 min,胚體中部出現(xiàn)六對(duì)肌節(jié), 胚體頭部?jī)蓚?cè)形成橢圓形眼囊（圖1S）; 受精后27 h 30 min, 16體節(jié)構(gòu)成的身體呈肩章形（圖1T）; 受精后29 h, 胚體開始出現(xiàn)肌肉效應(yīng), 此時(shí)肌肉收縮微弱且無規(guī)則節(jié)律（圖1U）。胚體尾部隨時(shí)間推移而不斷伸長(zhǎng)（圖1V）,心臟位于頭下后方, 受精后42 h, 心臟開始搏動(dòng), 初時(shí)搏動(dòng)微弱無力, 逐漸變得強(qiáng)而有力（圖1W）。

2.3.6 孵化期

受精后120 h, 仔魚開始孵出, 孵出前胚體在卵膜內(nèi)環(huán)繞超過一圈, 出膜前胚體扭動(dòng)加劇, 尾部加速擺動(dòng), 最終將卵膜頂破, 胚體脫膜而出（圖1X）。初孵仔魚身體稍彎曲, 數(shù)分鐘后伸直（圖2）。

軟鰭新光唇魚初孵仔魚全長(zhǎng)～6.5 mm, 出膜后5～10 h, 仔魚全身透明, 眼睛尚無色素, 血液呈淡黃色, 尾部逐漸伸直, 但卵黃囊大, 游泳能力弱,一般靜臥水底, 做垂直游動(dòng)（圖3）。

圖2 軟鰭新光唇魚初孵仔魚Figure 2 Newly hatched larvae of Neolissochilus benasi

圖3 軟鰭新光唇魚仔魚（出膜后5～10 h）Figure 3 Larvae of Neolissochilus benasi, 5 to 10 hours after hatching

2.4 仔魚畸形

胚胎發(fā)育過程中, 畸形出現(xiàn)的部位主要有口部、胸腔、脊索及眼部等, 另外, 卵黃蘘吸收異常和雙頭也是畸形的表現(xiàn)形式（圖 4）。其中, 脊索畸形較為常見（92.3%）, 其次分別為胸腔增大（78.1%）、口部畸形（35.4%）、眼部畸形（18.5%）及雙頭（0.1%）。脊索畸形主要出現(xiàn)在體節(jié)期, 胚體并沒有像正常胚胎發(fā)育一樣伸長(zhǎng), 卵黃囊的形狀不能與胚胎的伸直相適應(yīng)而始終維持橢圓形結(jié)構(gòu),出膜后才繼續(xù)完成胚胎拉長(zhǎng)和尾部發(fā)育, 造成胚胎脊索彎曲畸形。脊索畸形均伴隨著胸腔增大, 在胚胎出現(xiàn)肌肉效應(yīng)后, 胚體肌細(xì)胞的收縮和舒張一般為無規(guī)律顫抖, 而后并不形成心臟原基, 無心臟搏動(dòng)。

2.5 仔魚生長(zhǎng)

剛出膜的軟鰭新光唇魚仔魚全長(zhǎng)、脊索長(zhǎng)和口—肛門長(zhǎng)分別為（6.51±0.12）mm、（6.37±0.10）mm和（5.26±0.09）mm（表2）, 混合營(yíng)養(yǎng)期為5～7 d。出膜后第10 d, 魚苗的卵黃囊全部吸收完, 仔魚開始開口攝食, 能夠自由游動(dòng)。經(jīng)過15 d的生長(zhǎng), 仔魚全長(zhǎng)、脊索長(zhǎng)和口—肛門長(zhǎng)分別為（13.35±0.44）mm、（12.71±0.39）mm 和（9.79±0.41）mm。45 日齡仔魚平均存活率為86.5%。孵化后40～55 d, 仔魚開始出現(xiàn)鱗片, 進(jìn)入稚魚期。

3 分析與討論

3.1 親魚培育與魚卵質(zhì)量的關(guān)系

圖4 軟鰭新光唇魚仔魚的畸形形式Figure 4 Deformity models in larvae of Neolissochilus benasiA：脊椎畸形; B：卵黃囊異常; C：雙頭; D：胸腔增大。A：deformities of spinal column; B：yolk-sac resorption abnormalities; C：occurrence of conjoined twins; D：chest deformities.

表2 軟鰭新光唇魚各發(fā)育階段（水溫20 ℃）Table 2 Development stages of Neolissochilus benasi at 20 ℃

親魚培育技術(shù)是在了解培育親魚性腺發(fā)育特點(diǎn)、繁殖習(xí)性和影響產(chǎn)卵繁殖的生態(tài)環(huán)境因素的基礎(chǔ)上建立的。但是, 目前尚無法完全模仿多種魚類的繁殖季節(jié)生態(tài)環(huán)境。為確保軟鰭新光唇魚繁殖成功, 除池塘環(huán)境、水質(zhì)、空間和溫度等因素外, 養(yǎng)殖環(huán)境下魚卵質(zhì)量的影響因子更能引起人們的廣泛關(guān)注（Pan et al, 2009）, 但雄魚精液品質(zhì)檢測(cè)則鮮見報(bào)道（Wang et al, 2012）。軟鰭新光唇魚精液監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn), 雄性個(gè)體鮮精平均活力為（60.62±3.21）%, 低于鯉（Cyprinus carpio）、鰱（Hypophthalmichthys molitrix）和草魚（Ctenopharyngodon idellus）等（Chen et al, 1992）。但是, 若使用鮮精實(shí)施人工授精, 原腸胚早期胚胎存活率均＞50%,因此, 鮮精活力并不一定會(huì)影響魚卵受精率。由于繁殖所用魚類均采自野外, 雖然經(jīng)過短暫池塘飼養(yǎng),初步建立親魚培育技術(shù)體系, 但仍然有許多技術(shù)細(xì)節(jié)需要完善。在滇池金線鲃（Sinocyclocheilus grahami）和撫仙金線鲃（Sinocyclocheilus tingi）親魚培育實(shí)踐中也發(fā)現(xiàn)了類似問題, 而盡量提供適合的養(yǎng)殖條件, 最大限度低捕獲誘發(fā)的壓力, 可以顯

表3 軟鰭新光唇魚孵化期和胚后發(fā)育各階段仔魚測(cè)量Table 3 Average measurements (mm) of hatchlings and post-larvae of Neolissochilus benasi at various stages of development

著提高繁殖效率（Pan et al, 2009, 2011）。

3.2 胚胎發(fā)育特點(diǎn)

本研究首次描述軟鰭新光唇魚的胚胎發(fā)育, 其胚胎發(fā)育過程與寬口光唇魚（Acrossocheilus monticola）（Yan et al, 1999）、云南光唇魚（Acrossocheilus yunnanensis）（Tang & He, 1982）、 倒 刺 鲃（Spinibarbus denticulatus denticulatus）（Yi et al,2004）、中華倒刺鲃（Spinibarbus sinensis）（Huang et al, 2009）、黑脊倒刺鲃（Spinibarbus caldwelli）（Huang, 2009）、斑馬魚（Danio rerio）（Kimmel et al,1995）和鱇魚良白魚（Anabarilius grahami）等（Ma et al, 2008）較為相似, 主要形態(tài)特征出現(xiàn)順序基本相同, 僅分期時(shí)間略有不同。相對(duì)于同屬鲃亞科的倒刺鲃（44 h）、寬口光唇魚（～57 h）、黑脊倒刺鲃（～60 h）、中華倒刺鲃（～60 h）和云南光唇魚（66 h）, 軟鰭新光唇魚發(fā)育速度較慢, 這可能與其較大的卵黃囊（Tang & He, 1982; Yan et al, 1999）和較低的孵化溫度有關(guān)（Yan et al, 1999）, 與寬口光唇魚、云南光唇魚、倒刺鲃和斑馬魚相比, 原腸胚末期, 軟鰭新光唇魚胚體中部已可見體節(jié)雛形。

3.3 胚胎與仔魚致畸原因分析

自然狀況下, 魚類胚胎和仔魚階段畸形＜10%（Klumpp & Von Westernhagen, 1995）。西疇人工孵化畸形率較接近自然狀況（2.4%～8.7%）, 而昆明的畸形率則較高（＞30%）。一般認(rèn)為, 胚胎與仔魚畸形與自然環(huán)境中水的溫度、硬度、pH、光周期以及食物組成和營(yíng)養(yǎng)等密切相關(guān)（Bolla & Holmefjord,1988; Haddy & Pankhurst, 2000）。昆明和西疇兩地親魚的培育方案相同, 但昆明種群培育效果優(yōu)于西疇種群, 初步認(rèn)為昆明種群的胚胎和仔魚畸形率偏高與水（溫度等）和光周期等自然因素關(guān)系更大, 且這些因素的協(xié)同作用可能導(dǎo)致了魚卵早破現(xiàn)象。

魚卵早破是指胚胎發(fā)育至原腸胚末期后, 卵膜出現(xiàn)皺襞或塌癟, 在流水沖擊下胚胎提前出膜,進(jìn)而導(dǎo)致胚胎畸形的現(xiàn)象, 其原因主要有：魚卵質(zhì)量差、孵化用水溶氧低及放卵密度過大等。卵子過熟或不成熟均為魚卵質(zhì)量差的表現(xiàn), 可體現(xiàn)于卵徑大小、卵子形態(tài)等外部形態(tài)。孵化用水溶氧低可能是由于受精率低, 死卵較多, 不能及時(shí)將死卵移出孵化盆而引起水質(zhì)惡化導(dǎo)致缺氧。放卵密度過大, 水中溶解氧不能滿足胚胎發(fā)育所需溶氧也會(huì)導(dǎo)致胚胎畸形。軟鰭新光唇魚發(fā)育至原腸胚期時(shí), 由于魚卵質(zhì)量較差、水溫波動(dòng)較大及水質(zhì)惡化等原因, 使細(xì)胞分裂時(shí)序紊亂, 但在該時(shí)期很難觀察到畸形產(chǎn)生?；沃饕霈F(xiàn)在體節(jié)期, 胚體沒有伸長(zhǎng), 尾芽發(fā)育停滯, 出膜后尾部才繼續(xù)發(fā)育, 造成胚體脊索不能正常向前后伸直,或是弓背, 或是彎尾, 或是兩者兼有, 從而使神經(jīng)管、腦、脊髓及眼睛不能正常分化。因此, 在親魚培育管理中應(yīng)盡量提供適合的養(yǎng)殖條件, 如池塘大小、水質(zhì)和光強(qiáng)度等。

另外, 高活性新型魚類催產(chǎn)劑的使用使得許多生殖功能紊亂魚類在池塘養(yǎng)殖環(huán)境下得以繁衍。與傳統(tǒng)催產(chǎn)劑（魚腦垂體勻漿液和人體絨毛膜促性腺激素）相比, 高活性新型魚類催產(chǎn)劑催產(chǎn)效果好且穩(wěn)定、成本低、效價(jià)穩(wěn)定且排卵和產(chǎn)卵效應(yīng)時(shí)間短而具規(guī)律性, 有利于安排生產(chǎn)。但也有研究表明,使用催產(chǎn)劑效果不顯著, 而對(duì)魚卵質(zhì)量影響很大（Bonnet et al, 2007）, 如對(duì)虹鱒（Oncorhynchus mykiss）的人工催產(chǎn)研究顯示, 催產(chǎn)劑的使用是造成眼色素出現(xiàn)后的胚胎和出膜后仔魚大量死亡的原因之一（Bonnet et al, 2007）

3.4 人工增殖實(shí)踐中的問題

目前, 魚類早期胚胎畸形率高的機(jī)制尚不明確。多數(shù)研究認(rèn)為偏高或偏低的溫度是導(dǎo)致胚胎和仔魚大量畸形的主要原因之一（Huang et al, 2009）,而在人工控制條件下, 例如控制溫度、溶氧等, 并未降低胚胎畸形率, 有時(shí)反而增高。在孵化過程中,除魚卵質(zhì)量外, 某些物理因素也可導(dǎo)致胚胎死亡,例如孵化用水溶氧過高, 在魚卵周圍集聚一個(gè)或數(shù)個(gè)氣泡, 使魚卵長(zhǎng)時(shí)間不能下沉, 導(dǎo)致魚卵死亡。這種情況主要發(fā)生在孵化后期, 此時(shí)水質(zhì)變肥, 水溫高時(shí)光合作用強(qiáng), 水中溶解氧過飽和, 而及時(shí)加入新水則可解決該問題。

致謝：中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所的馬莉協(xié)助處理胚胎發(fā)育照片; 中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所的楊劍、劉淑偉、楊博、王偉營(yíng)和蔣萬勝參加了部分野外引種工作, 西疇縣第一中學(xué)的徐紅梅和西疇縣新街鎮(zhèn)的徐清輝參加了西疇縣珍稀魚類養(yǎng)殖基地的親魚培育和人工繁殖工作, 在此一并表示感謝！