蔣 坤，潘玉杰，夏 文，李 星，安斯揚，孫曉軍，安 巧（貴州百靈企業(yè)集團制藥股份有限公司，貴州安順561000）

巖陀為虎耳草科鬼燈檠屬植物西南鬼燈檠Rodgersiasambucifolia Hemsl.的根莖，性味為苦、澀、涼。原植物主產(chǎn)于云南、貴州、四川。其根莖具有收斂、消炎、祛風除濕的功效，對老年性支氣管炎、菌痢、腸炎、感冒頭痛、外傷出血、風濕骨痛等常見疾病有較好的療效［1］。其提取物的療效成分為巖白菜素（別名為巖白菜內(nèi)酯、矮茶素、巖白菜寧），具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、催眠及安定作用。巖白菜素為白色疏松的針狀結晶或結晶性粉末，無臭，味苦，遇光或熱漸變色，在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶。其化學結構式見圖1。

巖白菜素收載于《中國藥典》2010年版（一部）［2］，含量測定方法為紫外分光光度法，但該方法專屬性不強。為使含量測定專屬性更好、更準確，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法測定巖白菜素含量；同時，按照《中國藥典》規(guī)定進行性狀觀察、鑒別、檢查等，為巖白菜素的臨床應用和研究開發(fā)相關制劑提供依據(jù)。

圖1 巖白菜素的化學結構式Fig 1 Chemical structural formula of bergenin

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 1200 series 高效液相色譜儀（G1315D DAD 檢測器）；梅特勒-托利多電子天平（梅特勒-托利多上海有限公司）；KQ-250DB型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱恒溫干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）。

巖白菜素對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：111532-201302）；巖白菜素（由云南金泰德有限公司、云南康益有限公司、云南玉溪萬芳有限公司提供，分別稱為樣1、樣2、樣3）；3批巖白菜素中試樣品（批號：20130601、20130602、20130603，分別稱為樣4、樣5、樣6），10批巖白菜素樣品（批號：20130304、20130201、20130202、20130604、20130701、20130102、20130101、20140304、20130303、20130301）均由貴州百靈企業(yè)集團制藥股份有限公司生產(chǎn)；甲醇（美國TEDIA公司）；純凈水（娃哈哈集團有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 性狀

取巖白菜素對照品、樣1、樣2、樣3及3批中試樣品（樣4、樣5、樣6），觀察外觀、氣味、光和熱條件下的顏色變化，并進行溶解度、比旋度測定，結果見表1。

表1 性狀考察結果Tab 1 Properties of bergenin

試驗結果與《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素性狀項［2］下一致。

2.2 鑒別

根據(jù)《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素鑒別項［2］方法對巖白菜素對照品及樣1、2、3、4、5、6 進行試驗，試驗結果與《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素鑒別項［2］下一致。

2.3 檢查

2.3.1 干燥失重檢查。取巖白菜素對照品、樣1、樣2、樣3及3批中試樣品（樣4、樣5、樣6），參照《中國藥典》2010 年版（一部）巖白菜素鑒別項［2］方法進行干燥失重檢查。結果干燥失重檢查平均值為3.80%，減失重量低于6.0%，符合《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素干燥失重項［2］下規(guī)定。

2.3.2 熾灼殘渣檢查。取巖白菜素樣品根據(jù)《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素檢查項［2］方法進行熾灼殘渣檢查。結果熾灼殘渣含量均值為0.08%，低于0.1%，符合《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素熾灼殘渣項［2］下規(guī)定。

2.4 含量測定

2.4.1 色譜條件［3-4］。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱為C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）（北京迪科馬科技有限公司）；流動相為甲醇-水（25∶75）；流速為1.0 ml/min；檢測波長為275 nm；進樣體積為10 μl。理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應不低于3 000。對照品及樣品色譜圖見圖2、圖3、圖4。

圖2 巖白菜素對照品高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatogram of standard bergenin

圖3 巖白菜素（樣4）高效液相色譜圖Fig 3 HPLC chromatogram of bergenin（sample 4）

圖4 溶劑高效液相色譜圖Fig 4 HPLC chromatogram of the solvent

2.4.2 對照品溶液的制備。取巖白菜素對照品約10 mg，精密稱定，置于10 ml 量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取此溶液1 ml，以甲醇稀釋至10 ml，過濾，即得0.1 mg/ml的對照品溶液。

2.4.3 供試品溶液的制備。取巖白菜素（樣4）約10 mg，精密稱定，置于10 ml 量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取此溶液1 ml，以甲醇稀釋至10 ml，過濾，即得供試品溶液。

2.4.4 線性范圍考察。精密稱取巖白菜素對照品10.39 mg，置于10 ml量瓶，制得質(zhì)量濃度為1.039 mg/ml的母液；精密吸取該母液1 ml 分別稀釋至25、15、10、7.5、5 ml，制得質(zhì)量濃度分別為0.041 56、0.069 26、0.103 90、0.138 50、0.207 80 mg/ml 的對照品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件進行測定。以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標、峰面積積分值（y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程y＝8.191 7+6 300.3x（r＝0.999 9）。結果表明，巖白菜素質(zhì)量濃度在0.041 56～0.207 80 mg/ml（進樣量為0.416～2.078 μg）時，與峰面積積分值線性關系良好。

2.4.5 精密度試驗。精密稱取巖白菜素對照品5.46 mg，置于50 ml量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取1 ml，以甲醇稀釋至10 ml，過濾。按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，連續(xù)進樣5次，測得其峰面積積分值RSD為0.72%，表明儀器精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗。取巖白菜素（樣4）10.70 mg，置于10 ml量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取1 ml，用甲醇稀釋至10 ml，過濾，作為供試溶液。按“2.4.1”項下色譜條件，于0、2、4、6、8、24 h 分別進樣測定，測得其峰面積積分值的RSD為1.14%，表明巖白菜素供試溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.7 耐用性試驗。取巖白菜素（樣4）10.75 mg，置于10 ml量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取1 ml，用甲醇稀釋至10 ml，過濾，作為供試溶液。采用不同流速、不同比例、不同廠牌的色譜柱、不同柱溫，按“2.4.1”項下色譜條件進行測定，結果見表2。

表2 耐用性試驗結果Tab 2 Results of serviceability test

由表2結果可知，在選用不同比例流動相、流速、色譜柱廠家、柱溫后，峰面積RSD＝2.7%，表明本方法的耐用性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗。精密稱取巖白菜素（樣4）約2.59 mg共9份，分別置于50 ml量瓶，再精密稱取相當于樣品含量80%、100%、120%的巖白菜素對照品各3 份加入上述量瓶中，以甲醇溶解并定容至50 ml，得到低、中、高濃度的供試溶液各3份。按“2.4.1”項下色譜條件測定并計算回收率，結果見表3。

表3 加樣回收率試驗結果Tab 3 Results of recovery test

由表3 可見，加樣回收率平均值為100.4%，RSD 為1.04%，表明該方法準確度良好。

2.4.9 檢測限及定量限。精密稱取巖白菜素對照品5.14 mg，置于100 ml 量瓶，加甲醇溶解并定容；精密吸取1 ml 稀釋至25 ml，得質(zhì)量濃度為0.002 056 mg/ml 的對照品溶液，過濾，進樣1 μl。進一針空白溶劑觀察基線。經(jīng)計算，當信噪比為3時，檢測限為0.284 ng；當信噪比為10時，定量限為0.945 ng。

2.4.10 含量測定結果。采用筆者擬訂的質(zhì)量標準草案中HPLC法與《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素項下的紫外-可見分光光度法，分別對10批樣品進行含量測定，結果見表4。

表4 兩種方法測定10批樣品的含量結果（%）Tab 4 Contents of 10 batches of samples determined by two methods（%）

由表4結果可見，按干燥品計算，采用紫外-可見分光光度法測定，巖白菜素（C14H16O9）含量為97.0%～103.0%；采用HPLC 法測定，可將巖白菜素標示量定為98.0%～102.0%，故采用HPLC法更方便、準確、穩(wěn)定。

2.5 貯藏

與《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素貯藏項［2］一致。

2.6 用法與用量

與《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素用法與用量項［2］一致。

2.7 適應證

與《中國藥典》2010年版（一部）巖白菜素適應證項［2］一致。

3 討論

本文為巖白菜素質(zhì)量建立了專屬性、準確性更強的含量測定方法，并進行了方法學考察，采用原標準中的紫外-可見分光光度法與HPLC 法對10 批巖白菜素樣品進行了含量測定，并對測定結果進行了比較。結果表明，HPLC 法更為簡便、快速、可靠、準確，提升了巖白菜素的質(zhì)量標準，增加了巖陀提取物質(zhì)量的可控性。

［1］ 史彥斌，胡振英，董鵬程，等.中草藥鬼燈檠的現(xiàn)代研究進展［J］.時珍國醫(yī)國藥，2004，15（9）：621-622.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［S］.2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：384.

［3］ 王燕，鮑家科，金楊，等.巖陀藥材質(zhì)量標準研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17（10）：85-88.

［4］ 陳文文，黃勤挽，蘭雁，等.HPLC測定民族藥巖陀藥材中巖白菜素的含量［J］.華西藥學雜志，2007，22（2）：210-212.