■陳賽娟 龐樹坤 劉亞娟 周松濤 鞏耀進(jìn) 陳寶江 谷子林2，

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)山區(qū)研究所，河北保定 071001；2.河北省山區(qū)農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究中心，河北保定 071001；3.河北省涿州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河北涿州 072750；4.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定 071001）

單寧(Tannin)是一些植物的次生代謝產(chǎn)物，大致可分為兩種，縮合單寧和水解單寧。單寧酸(Tannic acid)又稱鞣酸，屬于水解類單寧，具有很強(qiáng)的生物和藥理活性[1]。過(guò)去單寧一直被認(rèn)為是飼料的抗?fàn)I養(yǎng)因子，對(duì)動(dòng)物有很強(qiáng)的抗?fàn)I養(yǎng)吸收作用，但近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收有阻礙作用的是縮合單寧，而飼料中含有適量的水解單寧能夠促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用率，提高動(dòng)物抗應(yīng)激能力和免疫力。氮污染是威脅全球生物多樣性的三大主要原因之一，氮污染的危害已經(jīng)越來(lái)越被人們重視。養(yǎng)殖場(chǎng)的廢液中存在大量的氮，未經(jīng)處理排出后，對(duì)周圍環(huán)境造成嚴(yán)重污染。通過(guò)飼糧調(diào)控提高進(jìn)食氮的利用率，減少氮向環(huán)境的排放[2-3]，是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。Ashisak等[4]報(bào)道在小鯉魚飼料中添加單寧，可以使小鯉魚血液中白細(xì)胞、血漿蛋白、白蛋白和球蛋白含量升高，血紅蛋白的含量降低。楊鎰峰等[5]研究表明，給育成前期雄性梅花鹿飼喂添加2%單寧的日糧，其體重和體高平均日增長(zhǎng)顯著提高，血清尿素氮濃度顯著下降。Schiavone等[6]研究發(fā)現(xiàn)，肉仔雞日糧中加入栗樹單寧（一種可水解單寧）后，試驗(yàn)的前兩周，0.2%栗樹單寧可以明顯提高肉仔雞的日增重和日采食量，減少了飼料中氮的損失。張曉慶等[7]報(bào)道在綿羊飼糧中添加3.40 g/kg的紅豆草單寧，能顯著降低尿氮排出量，提高氮存留率，對(duì)飼糧蛋白質(zhì)起到良好的保護(hù)效果。Cantos等[8]也報(bào)道地中海地區(qū)的伊比利亞豬每天采食超過(guò)20 g的存在于霍爾姆橡樹果中的五倍子酸(一種可水解單寧)，但是機(jī)體沒有任何中毒跡象。單寧酸作為安全新型飼料添加劑已經(jīng)在歐盟獲得批準(zhǔn)。本課題組前期研究已發(fā)現(xiàn)，在獺兔日糧中添加單寧酸可以提高生長(zhǎng)獺兔的日增重、降低料重比，但這一結(jié)果是否是由單寧酸提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率引起的，在家兔日糧中添加單寧酸是否能減少氮的排放量，提高氮的利用率，有待進(jìn)一步研究。本研究擬通過(guò)消化代謝試驗(yàn)測(cè)定不同單寧酸水平日糧對(duì)家兔營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率和氮平衡指標(biāo)的影響，探索單寧酸在家兔上的應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇60日齡左右體重相近的健康獺兔30只，隨機(jī)分為5組，每組6個(gè)重復(fù)。分別飼喂基礎(chǔ)飼糧和試驗(yàn)飼糧，Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ組為試驗(yàn)組，在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上分別添加0.05%、0.10%、0.15%和0.20%的單寧酸，采用全收糞尿法進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)，預(yù)飼期和正飼期各7 d。

1.2 試驗(yàn)飼糧

消化試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平參考谷子林[9]推薦的我國(guó)獺兔飼料營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行設(shè)計(jì)，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。試驗(yàn)用單寧酸由廣東佛山施華特貿(mào)易有限公司提供。

表1 基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 試驗(yàn)方法

采用全收糞、尿法進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)。每只試驗(yàn)兔于代謝籠內(nèi)單獨(dú)飼養(yǎng)，每天飼喂2次，自由采食和飲水，自然通風(fēng)和光照，準(zhǔn)確稱量與記錄每天的投料量和剩料量。預(yù)試期觀測(cè)每只兔的采食量，正試期記錄和稱量每只兔每天的實(shí)際采食量。以重復(fù)為單位每天10：00收集全部新鮮糞便和尿液稱重，按日排尿量的20%左右取尿樣，置于塑料瓶中，加酸，冷藏，備測(cè)尿N；收集糞便后，清除糞球上的兔毛，平均分為2份，一份用10%鹽酸溶液固定揮發(fā)性氮，用于測(cè)定粗蛋白質(zhì)，另一份不添加10%鹽酸溶液，用于分析其他常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分。試驗(yàn)結(jié)束，將收集的糞便充分混勻后置入烘箱中65～70℃烘干，取出后在空氣中回潮24 h后稱重，測(cè)定初水分后，將風(fēng)干樣品粉碎取部分樣品裝入樣品瓶中密封保存?zhèn)錅y(cè)。

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，所有兔子于晨飼前耳緣靜脈采血約5 ml，傾斜靜置至析出血清，3 000 r/min離心10 min，收集血清，-20℃保存待測(cè)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

總能（GE）：氧彈式熱量測(cè)定儀測(cè)定法；粗蛋白質(zhì)（CP）：凱氏定氮法；粗纖維（CF）、中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維（ADF）、酸性洗滌木質(zhì)素（ADL）：范式纖維洗滌法測(cè)定；鈣（Ca）：高錳酸鉀滴定法（仲裁法）測(cè)定；磷（P）：鉬黃比色法測(cè)定；干物質(zhì)（DM）：先測(cè)出樣品的水分含量，進(jìn)一步計(jì)算出DM含量；粗脂肪（EE）：索氏抽提法；粗灰分（Ash）：常規(guī)法測(cè)定；具體測(cè)定方法詳見楊勝[10]主編的《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》。

飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率(%)=(食入營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量-對(duì)應(yīng)糞中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量)/食入營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)量×100；

可消化氮量(g/d)=氮采食量(NI)-糞氮量(FN)；

沉積氮量(RN)=氮采食量(NI)-糞氮量(FN)-尿氮量(UN)；

氮總利用率(%)=沉積氮量/氮采食量×100；

氮凈利用率(%)=沉積氮量/可消化氮量×100。

血清樣品在河北大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科生化室使用全自動(dòng)生化分析儀（奧林巴斯Au-600，日本）進(jìn)行尿素氮和總蛋白含量的測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 13.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，結(jié)果用Mean±SD表示，差異顯著時(shí)用Duncan法做多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 單寧酸對(duì)家兔養(yǎng)分利用率的影響(見表2)

表2 家兔日糧中主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率(%)

由表2可見，飼喂添加單寧酸的日糧組家兔，對(duì)DM、CP、Ash、GE、Ca、P、CF和NDF的表觀消化率均高于對(duì)照組，其中，添加0.05%和0.15%單寧酸組的Ca的表觀消化率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率在試驗(yàn)組和對(duì)照組間差異均未達(dá)到顯著水平。試驗(yàn)組家兔對(duì)DM的表觀消化率比對(duì)照組提高了9.48%～11.81%，對(duì)CP的表觀消化率比對(duì)照組提高了4.27%～7.03%。

2.2 單寧酸對(duì)家兔氮代謝的影響(見表3)

由表3可知，飼喂添加單寧酸的日糧組家兔氮采食量均高于對(duì)照組家兔，而糞氮排出量和尿氮排出量并未高于對(duì)照組家兔，因此所有試驗(yàn)組家兔的可消化氮量和沉積氮量均高于對(duì)照組家兔，但差異不顯著(P＞0.05)。試驗(yàn)組家兔的氮總利用率和氮凈利用率均高于對(duì)照組，且隨著日糧中單寧酸添加量的增加，氮總利用率和氮凈利用率也呈增高趨勢(shì)。其中，添加0.10%和0.15%單寧酸組的氮總利用率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，添加0.20%單寧酸組的氮總利用率極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)；添加0.20%單寧酸組的氮凈利用率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

表3 單寧酸對(duì)家兔氮平衡的影響

2.3 單寧酸對(duì)家兔血清生化指標(biāo)的影響(見表4)

由表4可知，飼喂添加單寧酸的日糧組家兔血清總蛋白含量均高于對(duì)照組家兔，其中，添加0.10%和0.20%單寧酸組的血清總蛋白含量顯著高于添加0.05%單寧酸組和對(duì)照組(P＜0.05)，添加0.15%單寧酸組的血清總蛋白含量極顯著高于添加0.05%單寧酸組和對(duì)照組(P＜0.01)。試驗(yàn)組家兔血清尿素氮含量均極顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)。

表4 單寧酸對(duì)家兔血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 單寧酸對(duì)家兔養(yǎng)分利用率的影響

楊鎰峰等[5]將單寧應(yīng)用于育成期雄性梅花鹿的試驗(yàn)結(jié)果表明，添加單寧試驗(yàn)組梅花鹿對(duì)DM、CP和Ca的消化率或吸收率均高于空白對(duì)照組；孫展英[11]研究發(fā)現(xiàn)，在斷奶仔豬日糧中添加單寧酸，能明顯提高CP和EE的表觀消化率。本研究結(jié)果表明，飼喂添加單寧酸的日糧組家兔，對(duì)DM、CP、Ash、GE、Ca、P、CF和NDF的表觀消化率均高于空白對(duì)照組，與上述文獻(xiàn)報(bào)道一致。但Dalle等[12]和劉華偉[13]的研究結(jié)果與上述結(jié)果不符，二者報(bào)道日糧中添加CT對(duì)日糧中干物質(zhì)、粗蛋白、粗脂肪和粗纖維的消化率無(wú)顯著性影響。

3.2 單寧酸對(duì)家兔氮代謝的影響

動(dòng)物日糧中的含氮物質(zhì)絕大部分是蛋白質(zhì)，非蛋白質(zhì)的含氮物質(zhì)含量很少，可以忽略不記。蛋白質(zhì)在體內(nèi)分解代謝所產(chǎn)生的含氮物質(zhì)，主要由尿、糞排出，通過(guò)測(cè)定每日日糧中的含氮量（攝入氮），以及尿和糞便中的含氮量（排出氮）就可以了解氮平衡的狀態(tài)，從而估計(jì)蛋白質(zhì)在體內(nèi)的代謝量和動(dòng)物的生長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)等情況。

氮是畜禽排泄物中造成環(huán)境污染的主要物質(zhì)，畜禽排泄物中氮的含量與日糧中的氮含量以及氮的消化率和沉積率有關(guān)。血清TP含量在一定水平上代表日糧中蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)水平及動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收程度。汪益峰等[14]研究表明，隨著銀鯽對(duì)蛋白質(zhì)的合成代謝作用增強(qiáng)，血清總蛋白的含量也提高；程忠剛等[15]報(bào)道當(dāng)仔豬體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成作用增強(qiáng)、氮的沉積增強(qiáng)時(shí)，血清中TP含量增加。血清中BUN可以較準(zhǔn)確地反映動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝狀況，在一定的范圍內(nèi)血清尿素氮含量越低則表明氮的利用效率越高[16]。趙國(guó)先等[17]研究發(fā)現(xiàn)，BUN是蛋白質(zhì)、氨基酸代謝的終產(chǎn)物，與體內(nèi)氮沉積率、蛋白質(zhì)或氨基酸利用率有顯著負(fù)相關(guān)。在本試驗(yàn)中，家兔日糧中添加單寧酸，減少了氮的排放量，提高了氮的沉積量，且提高了血清總蛋白含量，降低了血清尿素氮含量。隨著日糧中單寧酸添加量的增加，氮總利用率和凈利用率均呈增高趨勢(shì)，這與前人的報(bào)道一致。

4 結(jié)論

在家兔日糧中添加單寧酸可以提高家兔對(duì)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的表觀消化率、血清總蛋白含量、氮總利用率和氮凈利用率，降低血清尿素氮含量，使家兔機(jī)體處于較高水平的正氮平衡狀態(tài)。