梁小敏

（江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，江西樟樹 331200）

生姜塊莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)

梁小敏

（江西農(nóng)業(yè)工程職業(yè)學(xué)院，江西樟樹 331200）

以生姜塊莖為培養(yǎng)材料，通過對生姜催芽、表面滅菌、外植體切割和啟動(dòng)培養(yǎng)等試驗(yàn)研究得出，生姜適宜的培養(yǎng)方案為生姜塊莖先埋入含水量10%左右的細(xì)沙中催芽，清洗后用稀釋800倍的多菌靈浸泡30 min，再用0.12%的升汞浸泡12 min表面滅菌，切割外植體時(shí)保留少部分姜塊，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+BA 0.5 mg· L-1+NAA 0.25 mg·L-1+0.1%生姜提取液。

生姜塊莖；滅菌；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

生姜以地下塊莖無性繁殖為主，其繁殖系數(shù)較低，用種量大，并且易通過帶病種姜傳播病害。用組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行繁殖可以解決這一生產(chǎn)難題，但生姜在進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)會(huì)遇到一系列的問題，本試驗(yàn)主要從生姜莖塊的滅菌、切割與啟動(dòng)培養(yǎng)等組織培養(yǎng)技術(shù)方面加以研究。

1 材料與方法

1.1 材料

生姜購買于江西省樟樹市農(nóng)貿(mào)市場。

1.2 方法

把生姜埋在催芽盒細(xì)沙中，置25℃恒溫培養(yǎng)箱中催芽。當(dāng)芽長2～3 cm時(shí)，放在清水托盤里用毛刷清洗干凈，切下帶姜塊的芽點(diǎn)，用洗衣粉或多菌靈浸泡，自來水沖洗30～40 min，瀝干水分。在超凈工作臺(tái)上，先用75%的酒精浸潤30 s，再用0.10%～0.15%升汞滴加1～2滴吐溫80浸泡10～12 min，同時(shí)不停搖蕩使表面滅菌充分，然后無菌水沖洗，切割成0.5～1.0 cm的不定芽或帶0.5～1.0 cm見方姜塊的不定芽接種到培養(yǎng)基上，置于2 000 lx，（25±2）℃的溫控培養(yǎng)室中培養(yǎng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 生姜的表面滅菌

飽和洗衣粉浸泡1 min是實(shí)驗(yàn)室常用的清洗材料的方法，但對生姜?jiǎng)t達(dá)不到理想去污效果（污染率高達(dá)100%）；改用稀釋800倍的多菌靈清洗30 min后，污染率明顯下降（污染率為35%）。對不同濃度升汞和滅菌時(shí)間進(jìn)行效果對比（表1）顯示，0.10%的升汞浸泡12 min是本實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法，但生姜污染率明顯太高。0.15%的升汞浸泡10 min，污染率雖降低，但同時(shí)伴隨著存活率的下降。0.12%的升汞浸泡12 min，滅菌效果在這3個(gè)濃度中比較好。

表1 不同濃度升汞及滅菌時(shí)間效果對比

2.2 生姜外植體的切割

經(jīng)過滅菌后，切割生姜芽點(diǎn)作為接種的外植體，針對所切割的外植體是否含有生姜芽基部以及基部的大小進(jìn)行了對比試驗(yàn)，結(jié)果（表2）顯示，切割外植體時(shí)，若外植體帶有小部分姜塊母體，則誘導(dǎo)出來的芽褐化程度較輕，生長較好。但所帶姜塊母體較多則會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重污染。而不帶任何姜塊母體的生姜芽點(diǎn)褐化較嚴(yán)重，生長也比較慢。

表2 生姜芽基部姜塊對離體培養(yǎng)的影響

2.3 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基

切割好的生姜外植體接種在5種不同的培養(yǎng)基上，添加不同種類或濃度的生長調(diào)節(jié)劑，4周后進(jìn)行觀察記錄（表3）。各處理均以MS為基本培養(yǎng)基，并加入0.7%瓊脂和0.3%的蔗糖，生姜莖塊培養(yǎng)過程中極易生根，有時(shí)會(huì)影響到芽的增殖倍數(shù)，相對而言，誘導(dǎo)發(fā)芽有一定的難度。陳娟等［1］認(rèn)為，6-BA的效果優(yōu)于KT和GA3，且GA3具有明顯的抑制作用。杭玲等［2］用BA 3.0 mg· L-1+NAA 0.1 mg·L-1的培養(yǎng)基誘導(dǎo)芽分化效果最好，且沒有幼根長出，而使用KT取代BA，其效果不如BA。

表3 5種培養(yǎng)基對啟動(dòng)培養(yǎng)的影響

通過對5種培養(yǎng)基中生姜的芽誘導(dǎo)試驗(yàn)認(rèn)為，僅有BA和GA，而無NAA培養(yǎng)基的長勢較差，但有BA與NAA的培養(yǎng)基的植株也出現(xiàn)不同程度的生根或生長不良現(xiàn)象。附加有生姜提取液的這組培養(yǎng)基材料生長狀況要好于其他培養(yǎng)基。

3 小結(jié)與討論

通過對生姜塊莖表面滅菌、外植體切割和選用不同的啟動(dòng)培養(yǎng)基培養(yǎng)等試驗(yàn)結(jié)果顯示，生姜莖塊應(yīng)埋入含水量10%左右的細(xì)沙中催芽，清洗后用稀釋800倍的多菌靈浸泡30 min，瀝干水，再用0.12%的升汞浸泡12 min進(jìn)行表面滅菌，然后用無菌水清洗干凈。在切割外植體時(shí)保留少部分芽點(diǎn)以下的姜塊基部母體更容易成活。啟動(dòng)培養(yǎng)基中增加1%的生姜汁液會(huì)讓培養(yǎng)結(jié)果更理想。

生姜進(jìn)行塊莖無菌培養(yǎng)時(shí)，催芽有一定困難，細(xì)沙太干或恒溫箱相對濕度太低，則無法催芽；細(xì)沙太濕或恒溫箱相對濕度較高又易腐爛。同時(shí)，生姜為地下塊莖，芽上有鱗片，污染較嚴(yán)重，滅菌難度較大，是生姜塊莖離體培養(yǎng)的一大瓶頸。薛寒青等［3］用1 g·L-1次氯酸鈉處理20 m in，最后再用0.1 g·L-1升汞處理10 min。用表面消毒與脫菌素相結(jié)合的方式可有效降低染菌率。在切割外植體或轉(zhuǎn)接材料時(shí)，最好帶上部分姜塊。陳澤雄等［4］也認(rèn)為，采用保留基部0.5 cm的微型團(tuán)塊作為生姜繼代方式效果較好。

在誘導(dǎo)芽的過程中，還常伴隨生根現(xiàn)象。對此，雷開榮［5］認(rèn)為，生姜快速繁殖要求較高的BA濃度，但在同時(shí)附加BA 2～3 mg·L-1+ NAA 0.5～1.0 mg·L-1的培養(yǎng)基中，可以實(shí)現(xiàn)生姜叢生芽和根同步誘導(dǎo)。孫霞等［6］采用附加KT 2.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1的培養(yǎng)基，通過器官發(fā)生途徑可獲得大量的帶根苗。如果誘導(dǎo)出的芽數(shù)量足夠多，生根與增殖同步進(jìn)行可節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間。

培養(yǎng)中還發(fā)現(xiàn)，生姜較易出現(xiàn)葉片黃化現(xiàn)象。陳澤雄等［4］是以改良MS（1/3 NH4NO3）為基本培養(yǎng)基，BA 1.5 mg·L-1與BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1隔代交替使用，置于散射光條件下培養(yǎng)效果最好，且能降低玻璃化苗和黃化苗比例。

［1］ 陳娟，潘開文，畢世榮，等.生姜莖尖組織培養(yǎng)和污染率控制的研究［J］.長江蔬菜，2007（1）：38-40.

［2］ 杭玲，黃卓忠，江文，等.生姜組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究與應(yīng)用［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（5）：125-127.

［3］ 薛寒青，周淑蘭.不同抗生素對生姜組織培養(yǎng)中姜芽脫菌效果的研究［J］.北方園藝，2009（6）：45-47.

［4］ 陳澤雄，劉奕清，黃登艷，等.培養(yǎng)因子及切割工藝對生姜試管苗生長效應(yīng)的研究［J］.中藥材，2010（5）：668-671.

［5］ 雷開榮.生姜組織培養(yǎng)中增殖與生根同步培養(yǎng)技術(shù)研究［J］.中國種業(yè)，2006（5）：33-34.

［6］ 孫霞，亓翠英，秦燕.生姜通過器官發(fā)生途徑體外再生的研究［J］.北方園藝，2012（19）：121-123.

（責(zé)任編輯：張瑞麟）

S 632.5

B

0528-9017（2014）06-0848-02

文獻(xiàn)著錄格式：梁小敏.生姜塊莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（6）：848-849.

2013-12-16

梁小敏（1973-），女，副教授，碩士，主要從事農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用教學(xué)與科研工作。E-mai1.1iangxm@sina.com。